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《南京农业大学》 2000年
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生长抑素基因工程疫苗相关检测方法的研究

张晓娟  
【摘要】: 本文首先建立了测定激生Ⅰ号苗中HBsAg和SS含量的ELISA定量分析 方法。应用本法对激生Ⅰ号苗中HBsAg和SS含量进行分析,可以反映激生Ⅰ 号苗在鸡胚上的增殖情况,是苗的一个必要的质量控制指标。试验数据表明, 苗中HBsAg与SS的表达量之比约为200-250:1,这与利用RIA进行的表达量 分析结果接近。 利用特定的渗透休克法提取基因工程表达的产物作为抗原,经一定的处理 进行包被,建立了检测激生Ⅰ号苗免疫动物血清中SS抗体的间接ELISA检测 技术。另外还建立了测定HBsAg抗体的间接ELISA技术,这两种方法经阻断 试验和重复性试验,表明方法的特异性良好、重复性良好。应用这两种方法对 激生Ⅰ号苗免疫动物血清进行检测,表明动物产生了一定量的SS抗体及 HBsAg抗体。 通过试验研究,确定了10~7PFU/头为激生Ⅰ号苗对肉猪的最适免疫剂量。在 免疫后2周与10周,10~7组的增重分别比对照组提高16.85%、10.1%,达到显 著水平(P<0.05),到试验结束时,该组增重比对照组提高7.6%,即4.02千 克。剂量过大或过小增重效果均不好。另外,饲养管理水平及疾病因子对该疫 苗的免疫效果影响很大。 利用pET-32大肠杆菌融合表达系统,以硫氧还蛋白(Thioredoxin)为表 达载体,已研制成了可用于多次免疫的SS基因工程亚单位疫苗,视插入位点 不同分为2株基因工程体,其表达的SS融合蛋白分别为SS-N/X和SS-N/S。 将它们分别与弗氏不完全佐剂乳化制成疫苗,免疫BALB/C小鼠,中和动物 体内的SS,从而促进动物的生长。结果表明,激生N/X和N/S苗对雌性小鼠 的增重效果显著,分别比对照组增重30.54%、36.88%(P<0.05),而且该苗对 二 倾l:论义:主长抑凭基因工程疫苗相关检测方法的研究 小鼠的增重效果有显著的性别差异,雌性小鼠的增重效果要好于雄性小鼠。 本文还利用特异的抗原包被技术,建立了测定激生N八和N书苗兔疫动物 血清中SS抗体的ELISA测定方法。试验表明,该法特异性强、重复性好。应 用该法对小鼠血清的 SS抗体检测表明,激生N八和 N乃茵免疫动物后,动物 产生了一定量的SS抗体,且SS抗体可以维持3-4个月。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S852.5

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 肖慎华;激生1号在草食动物生产中的推广应用研究[D];南京农业大学;2005年
【参考文献】
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【共引文献】
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2 姜中毅;猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究[D];甘肃农业大学;2010年
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9 刘彬;乌鸡白凤丸有效成份与雌激素对脑内多巴胺能神经元的保护作用及其机制探讨[D];青岛大学;2004年
10 张应华;核基质结合区(MAR)调控的胰岛素样生长因子-1表达载体构建与转化甘蓝的研究[D];西南农业大学;2004年
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 吕艳涛;白莉雅;杨利国;;提高奶牛泌乳量的新思路:应用生长抑素(SS)基因免疫[J];中国奶牛;2011年04期
【二级参考文献】
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3 张晓娟;生长抑素基因工程疫苗相关检测方法的研究[D];南京农业大学;2000年
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7 金香兰;O型口蹄疫病毒VP1蛋白的比较与牛O型表位肽基因工程疫苗的研制[D];吉林大学;2007年
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