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《南京农业大学》 2000年
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不结球白菜CpTI基因遗传转化的研究

张革平  
【摘要】: 本研究以CpTI抗虫基因为目的基因,以不结球白菜(Brassica campestris ssp. chinensis Makino)AB耐寒系和短-126品系的带柄子叶为 转化受体,以农杆菌介导的方式,转化不结球白菜材料,以获得具有抗 虫性状的不结球白菜种质。 带柄子叶在添加0.1mg/L 2,4-D和0.1mg/L NAA的预处理培养基上 处理3天,AB耐寒系不定芽分化率由6.0%提高至44.6%,而在短-126 品系上则没有明显的效应;卡那霉素对不结球白菜子叶的分化有强烈的 抑制作用,Km为15mg/L时产生100%白化外植体:羧苄青霉素不仅不 抑制带柄子叶的不定芽分化,反而可使不定芽分化的时间由20天提前至 14天;农杆菌侵染浓度的变化对带柄子叶分化影响不大,但是随着共培 养时间的延长,芽分化率显著下降。 以不结球白菜AB耐寒可育株品系的带柄子叶为外植体材料,在含有 2,4-D 0.1mg/L的预培养基上培养三天后,与农杆菌共培养1~2天,再 在含有6-BA 5mg/L和NAA 0.1mg/L的分化培养基上培养20天;经过在 含有15mg/L的卡那霉素选择培养基上筛选2次,获得卡那霉素抗性芽; 苗经过扩繁、生根,移栽在田间开花、结籽。 以农杆菌Ti质粒为阳性对照,未转化植株为阴性对照,对得到的转 化植株进行PCR和PCR-Southern检测;检测结果表明CpTI基因确实存 在于转化植株的基因组中。
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