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江苏省鸡传染性法氏囊病病原生态学分子流行病学研究

白文霞  
【摘要】: 将分离自江苏省的15个分离株和省外的9个分离株对其IBDV VP_2高变区进行RT-PCR扩增,酶切鉴定后,进行克隆测序,得到约560bp长的片段。应用计算机软件DNAstar分析比较15个江苏省分离株与国内分离株、参考株以及国外参考毒株的VP_2高变区(AccI-SpeI)的核苷酸及推断的氨基酸序列,构建进化树,并分析酶切位点和抗原位点。结果显示: 1、24株IBDV分离株在249和254位上的氨基酸分别为Q和G,而非K和S,这是抗原性不发生变异的保证。在279位,22株IBDV是“D”(NJ2000,HB99例外),而284位,24株分离株的氨基酸都为“A”,这是IBDV毒株具有致病力的必要条件。一般vvIBDV还存在4个保守的氨基酸变异,222P-A,256V-I,294L-I,299N-S,我们研究的分离株也具有这个特点(HB99的222位为“T”)。除了JP2000,有23株在七肽区的序列是保守的。表明本文研究的分离株是超强毒株(vvIBDV)。 2、SspⅠ酶切位点是vvIBDV毒株所具有的特征之一。除了NMG、JP2000,22株分离株在1010核苷酸处都有SspⅠ酶切位点,基本上确定江苏省分离株是超强毒株。变异毒株(约254密码子处)一般具有StyⅠ酶切位点。24株分离株在这个位点缺失StyⅠ酶切位点,排除了它们是变异株的可能性;同时它们也缺失DraⅠ酶切位点;而且,我们研究的分离株和大多vvIBDV一样,在约832核苷酸处存在TaqⅠ酶切位点;除了变异株3212外,所有变异毒株和超强毒株的参考株在VP_2高变区的794核苷酸处均缺失EcoRⅡ酶切位点,研究的分离株也在794核苷酸处缺失EcoRⅡ酶切位点;所有的超强毒株参考株及研究的分离株都在983核苷酸位置具有NaeⅠ酶切位点;研究的分离株和超强毒株、变异毒株的参考株在796核苷酸处缺失BstNI酶切位点。从这些规律我们总结出24个IBDV分离株均属于vvIBDV。 3、江苏省IBDV分离株与比较的超强毒株的抗原位点相似,而与古典毒株,变异毒株和致弱毒株参考株有差异。 4、与古典毒株、变异毒株和弱毒株的参考株相比,江苏省分离株和国内外超强毒株的参考株的同源性最高,为91.7%—100%。序列和进化树关系表明近来在中国江苏分离 江苏省鸡传染性法氏囊病病原生态学和分子流行病学研究 的毒株是超强毒株,而且,VVIBDV已在亚洲国家流行,它们和欧洲、非洲H十世纪八 十年代分离的yVIBDV同源性极高,属于相似的基因组.它们和美国、欧洲、大洋洲 在H十世纪七、八十年代分离的古典毒株、致弱毒株、变异毒株进化关系很远。很显 然,在IBDV之间的基因变异并不总是由分离株的分离时间和地点所决定的。 5、绘制江苏省病原生态学分布图,江苏省的连云港、徐州、盐城、扬州、镇江、南 京、常州和无锡都有VyIBDV的爆发,流行。


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