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《南京农业大学》 2003年
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伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性初步研究

苏鑫铭  
【摘要】: 伪狂犬病(Pseudorabies)又称Aujeszky氏病,是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型(suid herpes virus Ⅰ)所引起的猪、牛、羊等多种家畜及野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)、脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。猪是该病的主要贮存宿主和传染源,对养猪业造成的经济损失仅次于猪瘟和口蹄疫。伪狂犬病病毒上海株(PrV-SH)是从上海地区某猪场发病猪中分离的一株地方毒株与强毒株Ea株具有相似的特性,据此推测,PrV-SH株为强毒株。经过对PrV-SH株TK基因序列分析发现,PRV-SH株TK基因与我国的地方分离株Ea株和Fa株的基因同源性及推导的氨基酸同源性都很高,所以选择PrV-SH株为亲本毒株来构建基因缺失疫苗,在我国具有一定的实用价值。 提取伪狂犬病毒(PrV)SH株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PrV Kaplan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失498个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBluescriptⅡSK载体上,获得转移载体pBLR;提取pBLR质粒,经聚乙二醇纯化后,用磷酸钙转染法与PrV SH株共转染RK13细胞,在细胞培养液中有5—溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下,利用143TK~-细胞筛选出重组PRV SH毒株:rPrV-SH。 本实验测定了rPrV-SH缺失株在细胞上的生长特性、对小鼠的半数致死量。试验结果显示,缺失了TK基因后,其在细胞上的生长状况和病毒的滴度未见明显影响,形成蚀斑得能力及蚀斑大小未见明显差异。PrV SH株和rPrV-SH株对小鼠的半数致死量分别为1.39×10~4PFU和>3×10~5PFU,说明缺失TK基因的rPrV-SH株比亲本毒株PrV SH株的毒力有所下降。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S852.65

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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