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《南京农业大学》 2004年
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肌球蛋白的ATPase活性及热凝胶特性研究

林丽军  
【摘要】:本论文包含三方面内容:(1)对兔骨骼肌肌球蛋白的提取、纯化方法进行改进。(2)对肌球蛋白ATPase活性的测定方法做了适当调整,同时对肌球蛋白ATPase在不同环境条件下的性质进行研究。(3)采用实验设计软件(Design-Expert),运用响应曲面(Response Surface),以凝胶硬度、保水性、溶解度、肌球蛋白ATPase活性为响应值,研究pH、氯化钾、多聚磷酸盐对肌球蛋白凝胶性能的影响。 第一章:对兔骨骼肌肌球蛋白的提取方法做了进一步的改进,主要针对78000g 1h的超速离心条件,将去除肌动球蛋白的方法引入,调整分离参数及溶液组成;与硫酸铵分级沉淀手段结合;未去除肌动球蛋白的粗蛋白进行再沉淀;三者结合起来,达到了去除超速离心步骤,提纯蛋白的目的。与Nauss(1969)方法提取同等量的肌球蛋白相对比,则改进的方法具有以下优点:时间短、成本低、工作量小。 第二章:对肌球蛋白ATPase活性的测定方法做了部分改动,同时研究钙镁离子、离子强度、pH、贮藏时间对肌球蛋白ATPase活性的影响,为后续的实验工作建立基础。研究结果表明:钙离子是肌球蛋白的良好激活剂,Ca~(2+)-ATPase能较好反映肌球蛋白ATPase活性的变化;Ca~(2+)激活的肌球蛋白ATP酶Km值为3.332mM,Vmax为0.676gmol/mg·min;Ca~(2+)-ATPase在pH5.5时,活性达到最高值;Ca~(2+)-ATPase在低离子强度下活性大,离子强度越高活性越低;Mg~(2+)-ATPase受离子强度影响不大,比较平稳。 第三章:运用数学模型分析了pH、氯化钾、多聚磷酸盐对肌球蛋白凝胶性能的影响。在实验构建的肌球蛋白、KCl、pH、磷酸盐简单体系中,形成优良凝胶在氯化钾浓度0.38M附近,pH5.9左右,磷酸盐发挥作用受到KCl浓度的影响且与肌肉类型有关:腰大肌肌球蛋白受到焦磷酸盐和三聚磷酸盐的影响,而半膜肌肌球蛋白仅受到六偏磷酸盐的影响。磷酸盐、pH、盐浓度、肌肉类型紧密相关,磷酸盐对凝胶硬度的影响有pH作用,离子强度的作用及与蛋白结合的作用;而对于原料肉,磷酸盐的作用首先是增溶蛋白,解离肌动球蛋白。保水性受到pH、KCl浓度、磷酸盐的影响,获得优良保水性的参数范围为pH6.2左右,KC10.5M左右(0.4~0.6),磷酸盐发挥作用与纤维类型有关:腰大肌肌球蛋白保水性在磷酸盐的pH作用不体现时,只与SPP有关;而半膜肌肌球蛋白则与SPP、TPP、HMP都有关系。腰大肌和半膜肌肌球蛋白溶解度受到pH和KCl浓度的线性影响,结果一致。腰大肌和半膜肌肌球蛋白ATPase活性同样也仅受到pH和KCl浓度的影响,都在KC10.4M有最大值,不同的是:腰大 肌球蛋白的八TPase活性及热凝胶特性研究 肌肌球蛋白ATPase活性在pH6.2有最大值,而半膜肌肌球蛋白则在pH6.6有最大值.
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