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《南京农业大学》 2004年
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草菇耐低温菌株的诱变选育与分子生物学鉴定

韩业君  
【摘要】: 草菇(Volvariella volvacea)起源于中国,迄今已有300多年的栽培历史。草菇是典型的热带高温型食用菌,菌丝对低温的抵抗力差,对环境条件的变化尤其是温度的变化很敏感。与大多数食用菌相比,草菇存在着冷害,即在4℃的低温条件下保存,菌丝会发生自溶而导致菌种死亡和子实体发软,液化直至腐烂。这给草菇的菌种保存和产后保鲜带来了极大的困难。本文通过草菇原生质体复合诱变以低温为筛选指标,选育出耐低温草菇菌株VH3,并对其机理进行了探讨。主要研究结果如下: 1.研究并建立了草菇原生质体制备和再生的最佳条件:溶壁酶浓度2%,温度32℃,pH自然状态下的0.8mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,菌龄为3d的菌丝酶解2h(验证、重复王辅德等实验)。 2.通过UV、“Co-γ射线、DES对草菇V23原生质体进行复合诱变;从近1500株诱变菌株中选育出耐常规低温(4℃)时间≥10d菌株VH1、VH2、VH3、VH4。除VH1以外,各诱变株在较低温度(18、22、26、28、30℃)下生长速度明显高于CK。 3.突变株均与出发菌株V23(CK)有较明显的拮抗现象,RAPD分析发现诱变株的平均变异系数为0.831。26℃、28℃、30℃时,VH3生物学效率分别高出出发菌株145.5%,115%,44%;且其最佳出菇温度为28℃,在26℃时仍然可以正常出菇。稳定性实验表明,VH3耐低温及生物学效率均较稳定,说明VH3是适合低温栽培的优良菌株。 4.在4℃,15℃,25℃时分别进行草菇子实体贮藏试验发现,三种温度条件下,诱变株的贮藏期均高于CK。4℃时,VH1和VH3的贮藏期比CK高出50%。草菇在15℃时贮藏期最长,其次是25℃,4℃时最短。草菇子实体氨基酸组成分析表明,总氨基酸含量没有明显差别,VH3比CK谷氨酸含量高。 5.同工酶分析发现,VH3酯酶和过氧化物同工酶均发生了较大的变化。总蛋白研究发现草菇V23在低温诱导时有低温诱导蛋白PZ1产生,但是在草菇VH3中却没有发现该蛋白产生;在VH3中发现特异性蛋白PZ2。SDS-PAGE电泳发现PZ1由两个亚基组成,分子量为42KD、21KD;PZ2由一个亚基组成,分子量为75KD。两蛋白的等电点分别为 草菇耐低温菌株的诱变选育与分子生物学鉴定 4 .8、5 .7 5. 6 .NORTHERN杂交发现从低温诱导草菇中分离到的低温诱导基因片段在vH3中有 少量表达。 通过分析发现vH3是适合于低温栽培(26℃、28℃)的优良草菇菌株.从低温诱导 v23中分离到的低温诱导基因片段在VH3中有少量表达,表明草菇在低温协迫下和诱 变株vH3的耐低温机理有相似之处.
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S646.13

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【参考文献】
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