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《南京农业大学》 2004年
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猪体细胞核移植及相关技术研究

项智锋  
【摘要】:1.以猪卵巢卵母细胞为研究对象,进行卵母细胞体外成熟培养,对影响该技术的几项重要因素即卵母细胞状态、培养基、培养基添加物进行研究分析,结果表明:(1)来源于不同直径卵泡和不同分级的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟中成熟能力差异显著,直径2-6ram卵泡GOEs成熟率80.7%,大于6mm卵泡COCs成熟率81.2%,均显著高于小于2mm卵泡COCs成熟率(36.5%,P<0.05)。A、B级COCs成熟率极显著于C级(P<0.01),三者成熟率分别为80.7%、80.2%,21.2%。(2)TCM199、NCSU-23两种不同的培养液对猪卵母细胞体外成熟培养卵母细胞成熟率无明显差异(79.8%,80.6%,P>0.05)。(3)基础培养基中添加促性腺激素PMSG、hCG能显著提高猪卵母细胞体外成熟率(添加PMSG、hCG组分别为:80.5%、77.2%、84.0%,未加组:62.5%、50.5%);类固醇激素E2当与PMSG、hCG协同作用时对卵母细胞的体外成熟有支持作用,且激素作用时间为24h时成熟率最高(84.0%);而再添加生长激素rpGH则作用不大(浓度为10ug/ml、20ug/ml、0成熟率分别为:80.4%、75.7%、77.5%,三组差异不显著P>0.05);卵泡液对卵母细胞体外成熟具有促进作用(添加组:81.4%、81.8%,未加组:50.6%),添加组成熟率显著高于未添加组(P<0.05)。 2.以卵丘细胞为供核体细胞,采用胞质内注射法进行猪体细胞核移植,对去核、激活和培养等关键技术过程进行研究,结果表明:(1)点压法、挤压法对卵母细胞去核去核率明显高于盲吸法(三者分别为62.5%,64.6%,50.7%,P<0.05)。盲吸法去核染色体容易发生位置偏离,影响去核效果,但对早成熟的卵母细胞(36-44h)进行去核可明显提高去核效率(P<0.05),在36-38h、39-41b、42-44h去核率分别为60.9%、67.8%、64.3%,而45-48h为48.4%。(2)体细胞预激活有助于提高核移胚卵裂率(28.0%,20.1%,P<0.05)。钙离子载体A23187单独或与6-二甲基氨基嘌呤6-DMAP联合作用能使猪体细胞核移胚激活继续发育。(3)核移胚以NCSU23及卵丘颗粒单层饲养TCM199培养系统进行分别培养,核移胚卵裂率无明显差异(30.06%,31.5%,P>0.05)。但NCSU23培养4细胞后发育能力更高(13.5%,3.9%,P<0.05)。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S828

【参考文献】
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