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《南京农业大学》 2004年
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十一株巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)生物学与分子生物学特性的比较研究

陶建平  
【摘要】:鸡球虫病是危害养鸡业的重大疾病,其防治长期以来以药物为主,但是耐药虫株的不断出现,新药研制费用昂贵,尤其是药物残留肉蛋和环境危害人体健康,使得抗球虫药的研制和使用受到限制,这也促使本病防治趋势由药物转向疫苗。目前,疫苗的使用效果评价不一,这可能与田间株和疫苗株间的抗原相异有关。巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)是诱发鸡球虫病的3种常见球虫之一,具有很强的免疫原性,对其它几种鸡球虫有部分的交叉免疫力,故在各种研制的鸡球虫病疫苗中,巨型艾美耳球虫是必不可少的虫种之一。但是,巨型艾美耳球虫的株免疫原性差异最显著,在田间有时可因巨型艾美耳球虫免疫变异株的出现导致疫苗免疫失败。因此,疫苗的研制和使用有赖于对各地虫株的分离和深入研究,特别是虫株的抗原谱的分析及其分子基础的研究。 巨型艾美耳球虫在我国已有25个省、市或区报道,但有关其分子生物学的专项研究尚未见有报道,可供研究的虫株也较少,在各地方株及疫苗株与田间分离株之间的比较性研究国內尚属空白。为此,我们从江苏、安徽、山东、广东、福建、上海等地田间及美国产球虫病疫苗申分离和建立了11株巨型艾美耳球虫,开展了本研究工作,旨在阐明我国巨型艾美耳球虫的基本生物学特征;摸清在我国主要养禽地区巨型艾美耳球虫的抗原谱,为这些地区球虫病疫苗的使用提供理论指导,尤其是为选用国外进口疫苗提供科学依据;分析各地虫株间的亲源关系,探索抗原变异的分子基础;为今后疫苗的研制和其它方面(如抗药性、球虫免疫学、遗传学、分子生物学等)的研究提供适宜的虫株;同时研究结果也丰富了鸡球虫病学的內容。 一、巨型艾美耳球虫地方分离株的建立与基本特征 采用单卵囊分离技术,从江苏、安徽,山东、广东、福建和上海等省市10个地区的鸡场及美国产球虫病疫苗(COCCIVAC—D)中获得了11株纯种球虫,根据7项指标鉴定11株纯种球虫均为巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima Tyzzer,1929)。用Duncan氏新复极差法对各林所测数据均值进行多重比较,显示11株间存在不同程度的差异,其中美国株与国內各株差异均显著(P<0.05)。用光镜和扫描电镜观察,11株的卵囊结构相同,卵囊窄端的壁上有一卵膜孔。 十一株巨型艾美耳球虫(月功盯了习~艺如)生物学与分子生物学特性的比较研究 二、巨型艾美耳球虫地方分离株的致病性分析 用每鸡0.1、104、l、1护和10x’ 104个卵囊的剂量感染黄羽肉公雏,以平均增重、 病变记分和死亡率为指标,测定n株巨型艾美耳球虫的致病性,结果显示11个虫株 均有致病性.各感染组的增重(0 .1、1少组例外)与对照组相比均有显著差异(p0.5); 在感染10、1少个·只一,的剂量时,上海株增重最少,苏州株和龙岩株增重最多;扬州 株的病变记分最大,苏州株和龙岩株的最小,扬州株与苏州株之间有显著差异(P 0.5);扬州株、连云港株、福州株、广州株和美国株引起鸡死亡,死亡率分别为20%、 10%、10%、10%和10%.综合各项指标,扬州株和上海株致病性最强,苏州株和龙 岩株致病性最弱. 三、2株巨型艾美耳球虫的内生发育和病理变化 采用组织切片技术,对扬州株和上海株的内生发育过程、病理变化进行了研究。 结果显示:除发育阶段出现的时间不同外,扬州株和上海株间基本一致。有3代裂殖 生殖和1代配子生殖.裂殖体位于肠上皮细胞核的上方,第1代和第2代裂殖体寄生 于十二指肠和空肠前段的肠腺上皮细胞,第3代裂殖体寄生于十二指肠、空肠前段和 后段的绒毛顶端或两侧的肠上皮细胞.配子体寄生于肠绒毛上皮细胞和肠腺细胞核的 下方.接种后88h,无肉眼可见病变,在1 32一168h时病变最严重。显微病变主要发 生于第3代裂殖生殖和配子生殖期,引起粘膜上皮细胞大量脱落、肠绒毛缩短等病变。 四、巨型艾美耳球虫地方分离株繁殖力的比较分析 用n株巨型艾美耳球虫袍子化卵囊100个·只一,或10 000个·只一,经嗦嗽接种7 日龄或21日龄雏鸡,以麦克马斯特氏法对感染后第6一14天间每天24h排出的卵囊 计数,并进行统计分析。结果表明:100个·只一,卵囊感染7日龄雏鸡时,广州株和 凤阳株排卵囊量最多,上海株和苏州株排卵囊量最少;100个·只一1卵囊感染21日龄 雏鸡时,扬州株排卵囊量最多,上海株排卵囊量最少;10 000个·只“,卵囊感染21日 龄雏鸡时,苏州株排卵囊量最多,连云港株和扬州株的排卵囊量最少.排卵囊量随着 感染剂量的增加或鸡日龄的增大而增多,但各虫株增加量不同.各虫株的排卵囊规律 极相似,在感染后第7天排卵囊量达峰值,第8、9天排出的卵囊量显著减少,第10 天排出的卵囊量仅占总量的2%,.第14天接近于0.第6一8天排出的卵囊量占总量 的87%一99%. 五、巨型艾美耳球虫地方分离株对同源株的免疫力分析 用平均增重、病变记分或卵囊减少率为保护力指标,分析了11株巨型艾美耳球 虫对同源株的免疫力,结果表明,7日龄雏鸡免疫感染100个卵囊后,对攻毒10、1了 个同源株卵囊具有很高的保护力,免疚鸡不出现临床症状,肠道病变显著减轻,增重 中文摘要 与对照组相近(尸0.05);免疚鸡攻毒1 Xl了个同源株卵囊时,卵囊减少率均在97.42 %以上。各虫株在对同源株
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.7

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