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拟除虫菊酯类农药通用抗体制备及高效氯氟氰菊酯免疫检测技术研究

李志茹  
【摘要】:农药残留免疫检测技术是国内外小分子快速检测的重要内容。本文针对拟除虫菊酯类农药制备通用抗体。以拟除虫菊酯类农药的中间体——间苯氧基苯甲酸为半抗原,用活性酯法在间苯氧基苯甲酸的羧基末端偶联载体蛋白BSA作为免疫抗原,用混合酸酐法在其羧基末端偶联载体蛋白OVA作为ELISA反应的包被抗原。用UV-2401Pc型号的紫外分光光度计对合成的人工抗原、BSA、OVA以及半抗原进行全波长扫描,鉴定人工抗原偶联成功与否,经过扫描鉴定,偶联物在280nm处的紫外吸收峰型与单一蛋白吸收峰型的变化比较,可以初步判断偶联成功。 用上述制备的人工抗原PBA-BSA作为免疫抗原,制备#0631,#0629,#0977抗血清。抗血清效价测定依次达到1:204800,1:819200;1:409600。用#0629血清确定抗原抗体工作浓度,抗原工作浓度为6μg/mL,抗体工作浓度为血清稀释6000倍。在此工作浓度下,用9种拟除虫菊酯进行交叉测试,抗体可以识别高效氯氟氰菊酯,氰戊菊酯,氟菊酯和百树菊酯等几种农药。以高效氯氟氰菊酯为研究对象,检测的标准曲线方程为Y=-0.8129X+2.3439,R~2=0.9965.I_(50)为0.76mg/ml。检测线性范围1-10000μg/mL。检测精确度用微量板的批内和批间误差表示。批内变异系数为CV=4.7%,批间平均变异系数为CV=4~7.1%。 用高效氯氟氰菊酯对ELISA检测条件优化,抗原工作浓度为6μg/mL,抗体工作浓度血清稀释6000倍。反应体系封闭液1%OVA,封闭时间2h,离子强度0.2~0.3M,有机溶剂(甲醇,丙酮)浓度≤10%,pH值的适宜范围为7~9,反应温度37℃,时间1h,TMB显色时间10Min。


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