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两种猪源链球菌纤连蛋白体外结合的特征

孙理云  
【摘要】:猪链球菌是集约化养猪场的重要的病原之一。迄今为止,发现有35个血清型。猪链球菌2型(Streptococcus suis 2,SS2)被认为是毒力最强的。马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)可感染猪、马、犬、羊、鸡、猫及奶牛,在兽医方面具有重要的意义。上述两种菌均是人兽共患病病原,也是我国猪链球菌病的主要病原。 细菌表面的疏水性是细菌重要的理化特性,与细菌表面组成物质有很大关系,一定程度上与细菌的致病性有关。 纤连蛋白(fibronectin,Fn)是由α和β链组成的一种二聚体糖蛋白,相对分子质量(Mr)约450kD,由多种类型的细胞表达产生,在动物体内两种存在方式,一种游离存在于血浆中,一种以纤维状存在于细胞外基质(ECM);α与β链中均含有Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型三种重复序列;整合素、肝素、胶原/明胶和血纤蛋白都与Fn结合,位置各不相同。细菌表面的Fn结合蛋白在Fn上有不同的结合位置。 业已证明化脓性链球菌黏附宿主细胞的机制之一是结合Fn,进而定植和侵袭宿主。细菌表面的Fn结合蛋白与ECM的Fn的结合促进上皮细胞内化链球菌。细菌与体液中的游离Fn结合在细菌逃避宿主的免疫防御方面也有重要意义。 SEZ和SS2均有Fn结合蛋白基因,但二种细菌与游离(free)及固定(immobilized)Fn体外结合情况如何,未见报道。采用盐析法测定SEZ ATCC35246株(简称ATCC35246)和SS2江苏分离株HA9801(简称HA9801)的表面疏水性,ATCC35246在浓度为1.0M的硫酸铵溶液中2 min内析出,HA9801在0.6M的硫酸铵溶液中析出。用不同浓度的人Fn包被ELISA板,采用ELISA检测对数生长后期的ATCC35246和HA9801体外结合固定Fn的情况,ATCC35246的OD_(415)随细菌浓度的升高而增大,10~8CFU/ml达到饱和浓度,而HA9801的OD_(415)与结合BSA对照值相比,经t检验差异不显著(p0.05)。同时采用间接免疫荧光方法(IFA),检测体外结合游离的人Fn的情况,在荧光显微镜下可发现两种细菌周围有绿色荧光。结果表明二菌均为表面疏水菌:ATCC35246既可结合固定的Fn,又结合游离的Fn;而HA9801仅与游离的Fn结合。 用不同pH值的PBS稀释对数生长后期的ATCC35246成不同浓度,将其加入用不同浓度的人纤连蛋白(Fn)包被好的ELISA板,加入兔ATCC35246血清与结合在Fn上的细菌作用后,加入1:2,000稀释的碱性磷酸酶标记的山羊抗兔IgG,作用1h后


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