幽门螺杆菌卵黄抗体的研制

【摘要】：试验以幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)为材料，采用不同培养基进行培养和保存，并制备成完全抗原对刚开产或开产不久的母鸡进行免疫，用凝集试验法测定其抗体效价，并对免疫Hp母鸡免疫应答规律和卵黄抗体的抑菌活性及理化特性做了初步探讨。为制备高含量的抗Up的免疫卵黄及相关生物的制剂提供技术依据，也为鸡蛋及免疫蛋的开发利用和深入研究积累经验并提供借鉴。 1 幽门螺杆菌的培养与保存 本试验采用不同培养基对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)进行培养和保存，结果表明：固体培养Hp，培养基为哥伦比亚琼脂基础加混合抗生素(10mg·L~(-1)盐酸万古霉素+10mg·L~(-1)两性霉素B+2500iu·L~(-1)多粘菌素B+5mg·L~(-1)甲氧苄胺嘧啶)，并分别添加6％脱纤维绵羊血、6％马血清，在5％O_2，10％CO_2，85％N_2的微需氧条件下，37℃培养3d，均可培养出Hp；严格无菌的条件下，不添加混合抗生素，对细菌的生长没有影响，且不会造成杂菌污染。液体培养Hp，布氏肉汤基础中加入混合抗生素和6％马血清，Hp增菌迅速，但如不及时更换新鲜的微需氧环境，极易形成球形体。菌株采取冷冻保存液法保存于-70℃～-80℃低温条件下6个月，可以成功复苏，且复苏率可达100％。 2 抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验 试验以幽门螺杆菌(helicobacter pylori，Hp)全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免，165日龄二免，180日龄三免，于首免后即开始收集鸡蛋，采用凝集试验法测定卵黄中的抗体效价。结果表明：每间隔15天，采取两次加强免疫方法，可有效的引起免疫应答。母鸡在初免45d后，抗体效价可达到1:1024，同批样品在此水平可维持达60d以上(效价大于1:128)，然后抗体效价呈缓慢下降趋势，经130d后，抗体效价下降至1:8。体外抑菌试验表明，高免卵黄具有明显的抑制HP生长的活性。 3 鸡抗幽门螺杆菌卵黄抗体的理化特性 试验对自制鸡抗幽门螺杆菌高免卵黄的理化特性进行了研究。结果发现：pH值、温度对其活性的影响较明显，胃蛋白酶则加强了这一作用。在pH值单独影响下，pH≤3为其敏感区，如果同时存在胃蛋白酶，则其敏感区为pH≤4，在巴氏消毒温度条件下其具有较好的热稳定性，这对于工业化生产卵黄抗体具有非常重要的意义。