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幽门螺杆菌卵黄抗体的研制

谢献胜  
【摘要】:试验以幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)为材料,采用不同培养基进行培养和保存,并制备成完全抗原对刚开产或开产不久的母鸡进行免疫,用凝集试验法测定其抗体效价,并对免疫Hp母鸡免疫应答规律和卵黄抗体的抑菌活性及理化特性做了初步探讨。为制备高含量的抗Up的免疫卵黄及相关生物的制剂提供技术依据,也为鸡蛋及免疫蛋的开发利用和深入研究积累经验并提供借鉴。 1 幽门螺杆菌的培养与保存 本试验采用不同培养基对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)进行培养和保存,结果表明:固体培养Hp,培养基为哥伦比亚琼脂基础加混合抗生素(10mg·L~(-1)盐酸万古霉素+10mg·L~(-1)两性霉素B+2500iu·L~(-1)多粘菌素B+5mg·L~(-1)甲氧苄胺嘧啶),并分别添加6%脱纤维绵羊血、6%马血清,在5%O_2,10%CO_2,85%N_2的微需氧条件下,37℃培养3d,均可培养出Hp;严格无菌的条件下,不添加混合抗生素,对细菌的生长没有影响,且不会造成杂菌污染。液体培养Hp,布氏肉汤基础中加入混合抗生素和6%马血清,Hp增菌迅速,但如不及时更换新鲜的微需氧环境,极易形成球形体。菌株采取冷冻保存液法保存于-70℃~-80℃低温条件下6个月,可以成功复苏,且复苏率可达100%。 2 抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验 试验以幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免,165日龄二免,180日龄三免,于首免后即开始收集鸡蛋,采用凝集试验法测定卵黄中的抗体效价。结果表明:每间隔15天,采取两次加强免疫方法,可有效的引起免疫应答。母鸡在初免45d后,抗体效价可达到1:1024,同批样品在此水平可维持达60d以上(效价大于1:128),然后抗体效价呈缓慢下降趋势,经130d后,抗体效价下降至1:8。体外抑菌试验表明,高免卵黄具有明显的抑制HP生长的活性。 3 鸡抗幽门螺杆菌卵黄抗体的理化特性 试验对自制鸡抗幽门螺杆菌高免卵黄的理化特性进行了研究。结果发现:pH值、温度对其活性的影响较明显,胃蛋白酶则加强了这一作用。在pH值单独影响下,pH≤3为其敏感区,如果同时存在胃蛋白酶,则其敏感区为pH≤4,在巴氏消毒温度条件下其具有较好的热稳定性,这对于工业化生产卵黄抗体具有非常重要的意义。


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