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《南京农业大学》 2006年
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剑尾鱼在水产药物临床试验中应用研究

黄志斌  
【摘要】: 水产药物临床试验目前存在的主要问题是,结果稳定性、均一性及可重复性相对偏低,问题的关键在于实验用的动物没有标准化。以纯化培育的剑尾鱼作为实验动物,探讨其在水产药物临床试验中的应用的可行性,是本研究的宗旨。 1细菌致病性试验背肌注射、腹腔注射、刮鳞浸泡、刮鳞涂表皮、鳃涂抹菌苔等方式,使剑尾鱼感染嗜水气单胞菌Ah LY1,背肌注射为适宜感染的途径。 用10株从鱼类分离的细菌分别攻击8尾剑尾鱼,结果显示,对剑尾鱼的感染与原敏感鱼的结果较为一致。剑尾鱼人工感染各类病原菌与自然感染症状较为相似。另外,近交高代比原代剑尾鱼对Ah病原菌的易感性更为一致,感染后死亡时间相对集中。表明纯系剑尾鱼可作为感染的水生实验动物模型,替代其他鱼类用于检测细菌的致病性。 2抗菌药物急性毒性试验测试常用鱼类抗菌药物乳酸诺氟沙星粉及甲砜霉素对剑尾鱼、鲫鱼、草鱼的LD_(50)。每个药物浓度组试验鱼尾数分别为30尾。结果表明:上述三种鱼口灌乳酸诺氟沙星粉96h的LD_(50)均为>2000mg/kg鱼。使用剂量为25mg/kg的乳酸诺氟沙星粉对水产动物是安全的。三种鱼口灌甲砜霉素散96h的LD_(50)均为>4000mg/kg鱼体重,使用剂量为350mg/kg的甲砜霉素散对水产动物是安全的。乳酸诺氟沙星粉、甲砜霉素散的急性毒性表明各试验鱼均未发现异常和死亡。 3中草药制剂急性毒性试验选用中草药制剂大黄末进行剑尾鱼、鲫鱼和罗氏沼虾的96h的急性毒性试验。每个药物浓度组试验鱼尾数分别为25尾。大黄末对剑尾鱼的96h的LC_(50)为64.56mg/L,安全使用浓度为6.64mg/L;对鲫鱼的96h的LC_(50)为97.72mg/L,安全使用浓度为9.77mg/L;对罗氏沼虾的96h的LC_(50)为57.54mg/L,安全使用浓度为9.06mg/L。显示大黄末正常使用剂量2~4mg/L是安全的,剑尾鱼较为易感,可取代鲫鱼和罗氏沼虾用于测定药物的急性毒性指标。 4杀虫剂急性毒性试验及硫酸铜鳃中毒病理硫酸铜和敌百虫广泛应用于鱼类寄生虫感染的治疗。但滥用和过量使用致使中毒事件时有发生。取不同体征、取不同代次的剑尾鱼,进行常用体外杀虫剂敌百虫和硫酸铜的急性毒性实验,以斑马鱼和鲫鱼作为对照,测试其LC_(50)。每个药物浓度组试验鱼尾数分别为10尾。红眼红体剑尾鱼对硫酸铜96h的LC_(50)为4.06mg/L,对敌百虫96h的LC_(50)为13.95mg/L;红眼白体剑尾鱼对硫酸铜96h的LC-(50)为3.87mg/L,对敌百虫96h的LC_(50)为12.98mg/L;第18代红眼红体剑尾鱼对硫酸铜96h的LC_(50)为3.17mg/L,对敌百虫96h的LC_(50)为11.90mg/L。高代数的剑尾鱼对上述药物敏感性比原代较强,红眼红体与红眼白体剑尾鱼对杀虫药物敏感性差异不大。斑马鱼对硫酸铜96h的LC_(50)为1.47mg/L,对敌百虫96h的LC_(50)为52.50mg/L。鲫鱼对硫酸铜96h的LC_(50)为2.14mg/L,对敌百虫96h的LC_(50)为58.29mg/L。与斑马鱼和鲫鱼相比,剑尾鱼对敌百虫的敏感性强。 采用静水式补水换药法进行硫酸铜对剑尾鱼的毒性和累积研究,分别于7、14、21、28天采样用于病理学检查,结果表明不同浓度硫酸铜对剑尾鱼鳃等的病理损伤具有渐进性过程。 5消毒剂急性毒性试验取纯化培育的剑尾鱼进行常用几种体外消毒水产药物的急性毒性实验,以斑马鱼、白鲢等作为对照,比较其消毒剂急性毒性试验敏感性差异。每个药物浓度组试验鱼尾数分别为10尾。二氯异氰尿酸钠、复合三氯异氰尿酸粉、苯扎溴铵、漂白粉和生石灰等体外消毒水产药物96h对剑尾鱼的LC_(50)分别为1.11mg/L、4.2mg/L、0.90mg/L、5.20mg/L及122.7mg/L;对白鲢鱼的LC_(50)分别为0.57mg/L、2.45mg/L、0.62mg/L、1.80mg/L及57.6mg/L;对斑马鱼的LC_(50)分别为0.81mg/L、2.45mg/L、0.80mg/L、4.23mg/L及135.7mg/L。剑尾鱼与对照鱼相比,对上述消毒药物的敏感性相似。剑尾鱼可用于水产消毒药物安全性检测评价。 6药物防治试验 试验鱼分别采用背肌注射、刮鳞浸泡等方式人工感染嗜水气单胞菌Ah BK-10株(血清型05)。药物为抗菌药(乳酸诺氟沙星粉)、消毒剂(聚维酮碘、苯扎溴铵溶液)及中草药(复方双黄散),分别采用口灌或药浴方式,比较药物对剑尾鱼的保护率,以鲫鱼或草鱼为对照。试验分药物预防组(先给药,后感染:设2倍剂量组、使用剂量组、0.5倍剂量组)、药物治疗组(先感染,后给药:设2倍剂量组、使用剂量组、0.5倍剂量组)、阴性对照组(感染后不给药)、空白对照组(不感染不给药)。每组实验动物分别为30~60尾,计算药物的保护率。 试验鱼分别采用背口注射方式人工感染Ah,乳酸诺氟沙星粉以25mg/kg鱼使用剂量口灌防治嗜水气单胞菌Ah感染。该药对剑尾鱼和鲫鱼预防组平均保护率分别为74%和73%,治疗组平均保护率分别为67%和65%。经X~2检验,差异显著。 试验鱼分别采用刮鳞浸泡方式人工感染Ah BK-10株,聚维酮碘、苯扎溴铵溶液分别采用药浴方式防治Ah感染:聚维酮碘溶液对剑尾鱼和鲫鱼预防组平均保护率分别为:74%、77%,治疗组平均保护率分别为64%,70%。苯扎溴铵溶液对剑尾鱼和鲫鱼预防组平均保护率分别为64%,70%,药物治疗组平均保护率分别为62%,65%。 分别采用背肌注射方式人工感染Ah,复方双黄散喂服剂量2g/1kg鱼体重,可用于防治Ah感染,对剑尾鱼和草鱼的预防组平均保护率分别为:62%,66%、治疗组平均保护率分别为56%,66%。纯系剑尾鱼能否作为水产中草药药物的有效性检测的实验鱼类有待于进一步试验。 剑尾鱼与鲫鱼、草鱼比较,对病原菌的易感性个体差异较小,感染后,死亡时间相对集中。结果重复性好,可比性强。而鲫鱼组三个平行组的数据较紊乱,各组数据差异较大。可将剑尾鱼作为抗菌药(乳酸诺氟沙星粉)、消毒剂(聚维酮碘、苯扎溴铵溶液)药物防治试验替代动物模型。 7药物残留试验以RR-B系近交18代剑尾鱼检测诺氟沙星粉在鱼体内残留,以鲫鱼为对照。口服25mg/1kg鱼体重剂量诺氟沙星粉第4,9天后,剑尾鱼肌肉组织中药物残留量分别为0.465μg/g、0.049μg/g;肝脏组织中药物残留量分别为0.514μg/g、0.039μg/g。鲫鱼肌肉组织中药物残留量分别为0.434μg/g、0.018μg/g;肝脏组织残留量分别为0.483μg/g、0.036μg/g。第15天时,剑尾鱼和鲫鱼的肝脏、肌肉组织中,均未检出诺氟沙星。与鲫鱼相比,诺氟沙星粉在剑尾鱼体内残留相仿,表明剑尾鱼可作为水产药物残留的实验动物模型。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S948

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