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《南京农业大学》 2006年
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香菇(Lentinula edodes)菌丝不同发育形态差异表达基因的克隆及表达分析

李军辉  
【摘要】: 香菇(Lentinula edodes(Berk.)Pegler)是著名的大型木腐真菌,在我国有已有800多年的栽培历史。 香菇子实体的形成是香菇生活史中最复杂的发育过程,需要遗传、环境、生理等因素的协同作用。在香菇子实体发育的起始阶段中,菌丝首先在营养逆境的胁迫下进行局部地聚集而形成扭结体,随后扭结体的密度逐渐增加而形成致密菌丝团,致密菌丝团最终发育为原基,原基本质上是子实体的胚胎结构。本文建立了适合香菇不同发育阶段组织的RNA高效提取方法,与其他常规RNA提取方法相比,该方法的独特之处在于用有机溶剂抽提之前,加入了饱和NaCl溶液,从而促进了多糖物质与蛋白质的去除,并提高了RNA的产量,为下游的分子生物学操作打下了基础。另外,本文运用mRNA差异显示技术比较了香菇菌丝体、菌丝扭结体、致密菌丝团以及原基等四个发育阶段的基因表达差异。四个发育阶段的组织提取RNA后进行反转录,之后用随机引物与锚定引物组合对cDNA样品进行扩增,再用琼脂糖凝胶电泳进行差异条带的展示。结果表明四个发育阶段的基因表达差异不甚明显,最终挑选了17个差异表达的ESTs基因片段进行克隆测序。通过与Gene Bank数据库的比对,发现这些ESTs片段涉及蛋白质的合成、细胞壁的修饰、菌丝间的相互作用、碳氮源的代谢、物质的运输、信号传导、细胞的复苏等过程。其中,一个差异片段被证实为内切多聚半乳糖醛酸酶基因,通过Real-time PCR定量分析,发现该基因在疏松菌丝体、菌丝扭结体和致密菌丝团等三个阶段的表达相对较低,而在原基发育阶段呈现大量的表达,表明该基因可能与香菇原基的形态发生具有密切的关系。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S646.12

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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9 蒋峥;乳腺癌基因芯片实验数据分析与挖掘[D];重庆医科大学;2011年
10 郝震锋;免疫抑制小鼠阿萨希丝孢酵母菌皮肤感染差异表达基因的初步筛选[D];第三军医大学;2004年
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