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《南京农业大学》 2007年
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富硒绿茶功能成分的抗氧化和抗肿瘤作用及其机理研究

余芳  
【摘要】: 本文基于绿茶具有抗氧化活性和抗肿瘤功能以及植物源的硒具有的化学防癌作用,以绿茶作为硒载体,制备富硒绿茶,以现代生物活性物质分离技术,从富硒绿茶和普通绿茶中提取、分离和制备绿茶功能成分茶多酚、茶多糖、茶蛋白,研究富硒绿茶中茶多酚、茶多糖、茶蛋白、水提物以及普通绿茶中茶多酚、茶多糖、茶蛋白、水提物及其与无机硒化合物的混合物的抗氧化活性,筛选出具有高抗氧化活性的组分或组合。采用生物学前沿技术和手段,建立人肝癌HepG2肿瘤细胞培养模型,研究高活性成分的体外抗肿瘤作用及其机理。主要研究结果如下: 1.富硒绿茶理化指标分析表明,硒能显著提高绿茶的感官品质,汤色增加,苦涩味下降;游离氨基酸和蛋白质含量显著提高,茶多酚和叶绿素含量则没有显著差异。按照不同组分的提取工艺,获得的富硒绿茶粗茶多酚中茶多酚含量为841.1±6.8 g kg~(-1)富硒绿茶粗茶多糖中茶多糖含量为403.0±14.2 g kg~(-1),富硒绿茶粗茶蛋白中蛋白质含量为624.9±26.7 g kg~(-1)。除蛋白质以外,各种成分与相对应的普通绿茶成分无显著性差异(P>0.05)。 2.采用AAPH和DPPH两种抗氧化体系研究富硒绿茶和普通绿茶不同组分及水提物的抗氧化活性。结果表明,富硒绿茶功能成分和水提物的抗氧化活性高于普通绿茶。AAPH法结果显示,富硒绿茶和普通绿茶不同组分抗脂质过氧化能力由高到低的顺序为:粗茶蛋白>粗茶多酚>粗茶多糖。DPPH法结果显示,富硒绿茶和普通绿茶不同组分清除自由基能力的顺序为:粗茶多酚>粗茶蛋白>粗茶多糖。测定富硒绿茶水提物及不同组分ECso值,水提物为22.43±0.13μg mL_(-1),粗茶多酚为4.03±0.01/μg mL~(-1),粗茶多糖为273.33±8.66μtg mL~(-1),粗茶蛋白为38.36±2.94μg mL~(-1),阳性对照a-生育酚为16.65±5.34μg mL~(-1)。富硒绿茶粗茶多酚和粗茶多糖清除自由基能力显著高于普通绿茶粗茶多酚和粗茶多糖,而粗茶蛋白之间没有显著性差异(P>0.05)。 3.采用硅胶柱层析法,纯化得到富硒绿茶中茶多酚,其主要儿茶素单体EGCG含量为50.93%,硒含量为0.29±0.012 mg kg~(-1),显著高于普通绿茶中茶多酚EGCG含量46.90%,硒含量0.052±0.018 mg kg~(-1)。富硒绿茶水提物中EGCG含量为12.39%,硒含量为4.030±O.005 mg kg~(-1),显著高于普通绿茶水提物EGCG含量11.65%,硒含量0.037±0.002 mg kg~(-1)。富硒绿茶中茶多酚及水提物的抗氧化活性显著高于普通绿茶中茶多酚及水提物以及普通绿茶中茶多酚及水提物与亚硒酸钠之间简单的加合。 4.抗肿瘤作用结果表明,富硒绿茶中茶多酚及水提物、普通绿茶中茶多酚及水提物、普通绿茶中茶多酚及水提物加亚硒酸钠等不同组合对人肺癌细胞A549(50/μgml~(-1)-200μg ml~(-1))和人肝癌细胞HepG2(200μg mL~(-1)-1000μg mL~(-1))均有明显的生长抑制作用,并呈剂量.效应关系。富硒绿茶中茶多酚及水提物抑制作用显著高于普通绿茶中茶多酚及水提物与亚硒酸钠的组合(P>0.05)。富硒绿茶中茶多酚及水提物对人肝癌细胞HepG2的IC50分别为109.16±O.17μg mL~(-1)和217.88±0.26μg mL~(-1),富硒绿茶中茶多酚的抑制作用强于富硒绿茶水提物。 5.可见和荧光染色结果表明,富硒绿茶中茶多酚作用于人肝癌HepG2细胞后,细胞变小,胞膜皱缩,细胞核固缩,致密浓染并伴有核型的不规则变化,出现核碎裂等凋亡的典型特征,表明富硒绿茶中茶多酚可明显诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡。相同剂量下,富硒绿茶中茶多酚对人肝癌细胞HepG2的损伤作用强于富硒绿茶水提物。 6.流式细胞术检测富硒绿茶中茶多酚对人肝癌HepG2细胞周期的影响,结果表明,250μg mL~(-1)的富硒绿茶中茶多酚处理人肝癌细胞HepG2 24 h后,早期凋亡及晚期凋亡的细胞分别占总检测数的14%及1.6%,明显高于未给药对照组1.8%和0.2%,相同浓度的富硒绿茶中茶多酚可使人肝癌细胞HepG2的细胞周期阻滞在S期(对照组为24.59%,给药组为52.49%),阻断细胞周期向G2-M期进行,阻止细胞增殖,诱导细胞凋亡。 Western blots免疫印迹法检测富硒绿茶对人肝癌细胞HepG2的Bc1-2、Bax蛋白表达的影响,结果表明,在500/μg mL-1剂量下,富硒绿茶中茶多酚可下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达并促进凋亡诱导基因Bax的表达,Bax/Bcl-2比值为1.14,明显高于对照0.75;富硒绿茶水提物并无明显下调Bcl-2表达的作用,但在5μg mL~(-1)时,具有促进凋亡诱导基因Bax表达的作用,Bax/Bc1.2比值为1.49,明显高于对照1.07.
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R730.5

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10 彭敏;伍欣星;;DNA疫苗通过Fas-FasL途径发挥抗肿瘤作用[A];湖北省暨武汉市生物化学与分子生物学学会第八届第十七次学术年会论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 陈永杰;多国专家争议绿茶标准[N];北京科技报;2008年
2 李辉;绿茶是抗癌的好饮品[N];农村医药报(汉);2008年
3 本报记者 文卿;服“万病之药” 筑健康长城[N];中华合作时报;2003年
4 叶鹏;茶之色[N];中华合作时报;2002年
5 ;教你泡制四道美容瘦身绿茶[N];西藏日报;2004年
6 记者 胡剑 特约记者 江建国;婺源跻身全国10大绿茶生产基地县[N];上饶日报;2006年
7 严若虚;“绿茶王”和他的天价茶[N];江西日报;2007年
8 中国农业大学食品学院副教授 范志红;绿茶加豆浆 防癌效更佳[N];健康时报;2008年
9 尚远方;常喝绿茶可防治癌[N];医药养生保健报;2008年
10 ;湖北绿茶的世界机会[N];湖北日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 余芳;富硒绿茶功能成分的抗氧化和抗肿瘤作用及其机理研究[D];南京农业大学;2007年
2 梁进;纳米茶多酚的制备及其抗肿瘤作用研究[D];南京农业大学;2011年
3 张学武;珍珠梅抗肿瘤作用机制及其化学成分的研究[D];延边大学;2007年
4 范云双;绿升麻生物活性成分的研究[D];天津大学;2007年
5 任彦荣;糖基化青蒿素的制备及抗肿瘤活性研究[D];重庆大学;2008年
6 侯盛;抗HER2抗体/Flt3L双功能融合蛋白的抗肿瘤作用机理研究[D];第二军医大学;2005年
7 陈月;紫杉醇/环糊精的包合及包合物抗肿瘤作用的研究[D];吉林大学;2006年
8 闫茂才;齐墩果酸衍生物的设计、合成与生物活性研究[D];沈阳药科大学;2008年
9 邱玉琴;多烯紫杉醇经皮给药系统的设计与评价[D];中国科学院研究生院(理化技术研究所);2009年
10 张庆勇;大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)免疫增强活性及抗肿瘤作用研究[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 肖虹;绿茶及其茶多酚对罗曼蛋鸡肉品质、蛋品质及生产性能的影响[D];安徽农业大学;2010年
2 朱丹;利用光学—电化学技术快速测定茶多酚含量的方法和装置的研究[D];浙江大学;2011年
3 杨柳;茶叶中多酚的分析测定研究[D];山西大学;2005年
4 张永军;茶叶浸提物对功能性酶活性和二级结构的影响研究[D];华南理工大学;2010年
5 张丽娟;酵母硒对奶牛消化、抗氧化和泌乳性能的影响[D];新疆农业大学;2007年
6 王飞飞;富硒绿茶醇提物的制备及其抗氧化和抗肿瘤活性研究[D];南京农业大学;2007年
7 王传名;茶多酚和茶多糖提纯研究[D];山东大学;2010年
8 何泊为;龙井绿茶奶粉的研究[D];浙江工业大学;2010年
9 张恩;绿茶无氧加工工艺及设备研究[D];杭州电子科技大学;2011年
10 宋庆荣;超临界条件下从绿茶中提取咖啡碱和茶多酚的研究[D];华东理工大学;2010年
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