收藏本站
《南京农业大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

菊芋液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆及其转基因烟草的耐盐性研究

严一诺  
【摘要】: 盐分对植物的伤害主要是Na~+引起的,而Na~+/H~+逆向转运蛋白催化Na~+和H~+的逆向跨膜运输,是植物抵御盐胁迫的主要方式之一,在植物耐盐性方面起着重要的作用。对于植物Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆、表达及功能的分析将对植物耐盐基因工程产生重要意义。 通过GenBank上登录的其它植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的同源序列设计一对简并引物,利用RT-PCR和RLM-RACE技术获得了菊芋液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的cDNA全序列,命名为HtNHX1。HtNHX1 cDNA全长2148bp,5′端非编码区长269bp,3′端非编码区长501bp,含有1个可能的加polyA信号:AATAA,开放阅读框含有1647个核苷酸,编码一个由549个氨基酸构成的多肽,并且含有Na~+/H~+逆向转运蛋白的高度保守序列LFFIYLLPPI,这是Na~+/H~+逆向转运蛋白活力的竞争性抑制剂氨氯吡嗪嘧的结合位点。HtNHX1的氨基酸序列与已克隆的花花柴KcNHX2、水稻OsNHX2、莲花NcNHX1、矮牵牛PhNHX1、牵牛花InNHX2、玉米ZmNHX5的Na~+/H~+逆向转运蛋白具有很高的同源性,分别为80%,74%,72%,74%,74%,70%。同时根据RLM-RACE的原理和5′端非编码区序列的分析,推测出目的基因上游的转录起始位点可能为a,为该基因表达调控方面的研究奠定了基础。 根据HtNHX1基因全长序列设计引物扩增其编码区,并将其克隆到pUC19载体中,经测序确认,保留未发生突变的克隆体,用于构建其植物表达载体pBI121-HtNHX1。冻融法将pBI121-HtNHX1重组质粒导入根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404中,获得工程菌LBA4404-pBI121-HtNHX1。 农杆菌介导法将HtNHX1基因编码区导入烟草(Nictiana tabacum L.cv.89),获得卡那霉素抗性植株。PCR、RT-PCR均证明外源HtNHX1基因已整合到烟草基因组中。转基因烟草具有一定的耐盐性,能在含200 mmol/L NaCl的培养基中正常生长2周,而对照则在100 mmol/L NaCl处理时便不生根。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S632.9

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 夏天翔,刘兆普,王景艳;盐分和水分胁迫对菊芋幼苗离子吸收及叶片酶活性的影响[J];西北植物学报;2004年07期
2 李秋莉,高晓蓉,范琦,袁晓东,刘大伟,安利佳;反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列[J];高技术通讯;2001年11期
3 陈渝萍,薛社普;应用改进的SSP-抑制PCR技术扩增cDNA片段旁侧序列[J];基础医学与临床;1999年04期
4 钱骅,刘友良;大麦根液泡膜Na~+/H~+逆向运输与盐分区域化分配的关系[J];南京农业大学学报;1995年02期
5 王姝杰;王法龙;李世访;闫淑珍;;转Na~+/H~+antiporter(Nhap)基因烟草植株的获得及耐盐性鉴定[J];农业生物技术学报;2006年01期
6 任仲海,马秀灵,赵彦修,张慧;Na~+/H~+逆向转运蛋白和植物耐盐性[J];生物工程学报;2002年01期
7 王景雪,孙毅,梁爱华;扩增未知序列DNA片段的PCR技术研究进展[J];生物工程进展;2001年01期
8 邢桂春,张成岗,魏汉东,贺福初;采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年02期
9 王景雪,孙毅;农杆菌介导的植物基因转化研究进展[J];生物技术通报;1999年01期
10 赵可夫;植物对盐渍逆境的适应[J];生物学通报;2002年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 隋娜,李萌,田纪春,孟庆伟,赵世杰;K~+对水分胁迫下超级小麦幼苗生理特性的影响[J];山东农业科学;2004年06期
2 马方放;杨洪强;;磷对平邑甜茶根系质膜H~+-ATPase活性的调控[J];山东农业科学;2006年04期
3 张立宾;刘玉新;张明兴;;星星草的耐盐能力及其对滨海盐渍土的改良效果研究[J];山东农业科学;2006年04期
4 郭淼;张廷婷;高建强;崔德才;;拟南芥PLDα1突变体的繁殖及形态和生理特性分析[J];山东农业科学;2007年02期
5 黄霄;杨秀梅;刘训言;孟庆伟;;转正义基因番茄类囊体膜脂不饱和度对抗旱性的影响[J];山东农业科学;2008年03期
6 殷昭平;陈运起;刘世琦;高莉敏;;蔬菜抗热、耐寒性鉴定方法与评价指标研究进展[J];山东农业科学;2008年04期
7 杨剑超;袁芳;王新慧;史瑶瑶;隋娜;王宝山;;不同浓度NaCl胁迫下盐芥与拟南芥有机渗透调节物质与抗氧化酶系统的比较[J];山东农业科学;2009年12期
8 姜虎生;张思洋;王宏燕;;跳龟灵、对硫磷乳剂对玉米生理指标的影响[J];山东农业科学;2011年06期
9 白建芬;裴玉贺;赵秋霞;宋希云;;干旱胁迫下玉米幼苗几种生理生化指标的变化[J];山东农业科学;2012年03期
10 刘士华;吕国胜;;草莓果实成熟过程中糖、酸含量的动态变化[J];安徽林业科技;2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈宇;黄志明;叶美兰;吴锦程;;不同枇杷品种果实发育过程中果肉细胞壁组分的变化[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
2 傅明连;林素英;蔡丽琴;黄志明;吴锦程;;不同枇杷品种细胞壁代谢与果肉质地形成的关系[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
3 张立宾;郭新霞;徐化凌;常尚连;;耐盐蔬菜碱蓬的耐盐能力及其对滨海盐渍土的改良效果[A];山东园艺学会第七次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2011年
4 李婷婷;张秀新;吕英民;;盆栽芍药有机生态型无土栽培基质配方筛选[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
5 王磊;卓丽环;李瑞发;;农业废弃物作为百子莲组培苗移栽基质的研究[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
6 刘洪波;李跃进;芦永兴;任有志;李正元;;托克托县毡匠营村几种盐生植物与土壤环境响应的研究[A];第五次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2009年
7 王钰;潘光堂;;具有高再生性且对农杆菌C58敏感的玉米自交系材料的筛选[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
8 程林梅;孙毅;任永玲;;转基因耐盐植物研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
9 赵会杰;付晓记;张秀月;赵一丹;陈新建;刘华山;孟凡庭;刘卫群;;一氧化氮对涝渍胁迫下牛膝叶片抗氧化作用及光合的影响[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
10 揭雨成;;红麻耐盐体细胞变异体的诱导与植株再生研究[A];中国作物学会2007年学术年会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 毕明娟;B型烟粉虱诱导的烟草防御信号途径及B型烟粉虱和烟蚜对烟草防御反应的生理适应性差异[D];山东农业大学;2010年
2 贺春燕;施肥对枸杞产量和品质的影响及效应研究[D];甘肃农业大学;2009年
3 田娜;农杆菌介导的猕猴桃遗传转化及AtNHX1转化植株抗盐性分析;拟南芥At4G12490基因对逆境的抗性功能研究[D];西北大学;2010年
4 郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年
5 盖玉红;盐生和中生植物对盐害的响应及其抗性结构机制研究[D];东北师范大学;2010年
6 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
7 李瑞利;两种典型盐生植物耐盐机理及应用耐盐植物改良盐渍土研究[D];南开大学;2010年
8 何影;引入甘氨酸甲基化合成甜菜碱途径提高黑麦草抗旱性研究[D];山东大学;2010年
9 何小勇;翅荚木种源遗传多样性及其抗低温胁迫能力研究[D];中南林业科技大学;2007年
10 刘卫东;湖南假俭草遗传多样性、生理学特性及护坡性能研究[D];中南林业科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨堃;鹅CYP7A1基因克隆、表达调节及表达规律的研究[D];华中农业大学;2010年
2 高胡静;百合离体条件下的耐盐性评价和EMS诱变育种初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 朱莹;分析耐盐基因与启动子功能的CRE/loxP重组激活系统的构建与检验[D];哈尔滨师范大学;2010年
4 王鑫;盐胁迫下高粱新生叶片结构和光合特性的系统调控研究[D];山东农业大学;2010年
5 杨洛滨;盐胁迫下5个树种根系活力及Na~+,K~+含量影响的研究[D];山东农业大学;2009年
6 王长宪;利用基因工程创造香樟抗寒树种新种质技术研究[D];山东农业大学;2009年
7 李树芬;甜菜碱提高转基因番茄耐热性研究[D];山东农业大学;2010年
8 王悦琳;过表达玉米ZmMPK7转基因烟草耐盐性研究[D];山东农业大学;2010年
9 李秀杰;采前1-甲基环丙烯处理对青花菜贮藏品质的影响[D];山东农业大学;2010年
10 李慧;土壤水分和灌溉水配置对冬小麦产量及水氮利用效率的影响[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 於丙军,刘友良;大豆耐盐性研究进展[J];大豆科学;2000年02期
2 李太元,田颖川,秦晓峰,莽克强,李文谷,何永刚,沈蕾;高效抗虫转基因烟草的研究[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1994年03期
3 许耀,贾敬芬,郑国锠;酚类化合物促进根癌农杆菌对植物离体外植体的高效转化[J];科学通报;1988年22期
4 肖岗,张耕耘,刘凤华,王军,陈受宜,李聪,耿华珠;山菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因研究[J];科学通报;1995年08期
5 赵恢武,刘晗,于海源,胡鸢雷,高音,林忠平,李振宇;耐旱植物厚叶旋蒴苣苔BDN1脱水素基因的克隆及表达特性分析[J];科学通报;2000年15期
6 李长润,刘友良;盐胁迫下小麦幼苗离子吸收运输的选择性与叶片耐盐量[J];南京农业大学学报;1993年01期
7 张根义,徐武,李鸣,张敬,李安生;植物细胞感受态研究初探(简报)[J];农业生物技术学报;1997年01期
8 王新力,彭学贤,李宏;香蕉果实特异性ACC合酶的cDNA克隆及序列分析[J];生物工程学报;2000年02期
9 任仲海,马秀灵,赵彦修,张慧;Na~+/H~+逆向转运蛋白和植物耐盐性[J];生物工程学报;2002年01期
10 徐国恒,凌雁,万有,王晓民;mRNA差别显示技术及其在生命科学中的应用[J];生理科学进展;1997年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙纪录,贾英民,桑亚新;菊芋资源的开发利用[J];中国果菜;2002年06期
2 杨仕喜;栽种菊芋有利可图[J];农村经济与技术;1994年02期
3 王中良;话说菊芋[J];农家顾问;1997年02期
4 刘树文,陈锦屏,王仲孚;菊芋多酚氧化酶性质的研究[J];中国农学通报;1998年06期
5 ;菊芋可作畜禽饲料[J];农业科技与信息;1996年11期
6 ;治沙新方法——种植菊芋[J];林业实用技术;2002年08期
7 黄振,房华;食用菊芋的经济价值及栽培技术[J];中国农业信息;2004年04期
8 梁建芳,彭美科;湟中县菊芋生产栽培[J];青海农林科技;2004年02期
9 王飞;北美洲菊芋栽培技术[J];农村经济与科技;2001年04期
10 高思兰,王波,崔爱军,张继东,石淑英,庞风玲;菊芋的生育特性及高产栽培技术[J];山东农业科学;2002年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
2 孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
3 戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
4 朱炎平;邱君志;关雄;;粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)几丁质酶基因克隆的研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
5 吕海鹏;史俊南;赵守亮;Athony J.Smith;;人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
6 王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
7 方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
8 张志春;张谷丰;罗光华;方继朝;;小菜蛾嗅觉膜原蛋白SNMP1基因的克隆表达[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
9 王翠;李世军;李闯;俸艳萍;彭秀丽;龚炎长;;鸭多巴胺受体1(DRD1)基因克隆与多态性检测[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
10 张上隆;;甜橙辣椒红/辣椒玉红素合成酶同源基因的克隆[A];张上隆果树学文选[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 富晓;菊芋的栽培[N];湖北科技报;2004年
2 特约记者 刁继贤;菊芋工业园项目正式签约[N];大庆日报;2009年
3 刘越西 徐仁元 记者 金姝;世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛在吉大农学部培育成功[N];吉林日报;2011年
4 刘娃 峰峰;种植菊芋粮饲双收[N];河南科技报;2001年
5 省农科院生物所研究员 崔伏香 提供;菊芋加工二法[N];河南科技报;2002年
6 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
7 黄勇娣;世界首例转基因克隆兔在沪诞生[N];解放日报;2007年
8 本报记者 夏龙刚;菊芋制柴油:离产业化道路有多远?[N];中国能源报;2009年
9 张洪钦 董延涛;菊芋栽培管理应注意啥[N];山西科技报;2001年
10 许沈华;什么是基因克隆[N];家庭医生报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
2 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
3 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
4 魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
5 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
6 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
7 王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
8 李伟;圆锥小麦地方品种遗传多样性研究[D];四川农业大学;2006年
9 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
10 倪多娇;栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 严一诺;菊芋液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆及其转基因烟草的耐盐性研究[D];南京农业大学;2008年
2 鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
3 刘占通;猪α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒活性研究[D];河南农业大学;2005年
4 张怡;重组鼠抗人CD19单链抗体的构建和表达[D];浙江大学;2006年
5 郝敏;玉米与大斑病菌构成的不同互作中基因表达的研究[D];河北农业大学;2006年
6 黄志强;产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其基因克隆[D];福建农林大学;2006年
7 武鸿;嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究[D];浙江大学;2007年
8 余国武;腊梅脂转移蛋白基因克隆与功能的初步分析[D];西南大学;2007年
9 赵秀振;蓖麻蚕体液胰凝乳蛋白酶抑制剂调查及其基因克隆[D];中国农业科学院;2007年
10 马维;辣椒疫病抗性相关基因的克隆与分析[D];西北农林科技大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026