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《南京农业大学》 2008年
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条斑紫菜多糖的提取纯化及其体外抗肿瘤活性研究

朱晓君  
【摘要】: 本文优化了超声波或微波辅助同时提取条斑紫菜(Porphyra yezoensis)多糖和藻红蛋白的工艺,采用三氯乙酸和藻胆蛋白变性温度结合的方法去除蛋白,并用膜分离技术对多糖进行初步分离,根据带电性质和分子量采用DEAE C-52和Sephadex G-100纯化出三种不同的多糖组分PYPSⅡa、PYPS1a和PYPS 2a,研究了这三种多糖的结构,单糖组成及PYPSⅡa和PYPS 2a这两个多糖组分的In vitro抗肿瘤活性。主要研究结果如下: 1、本文首次明确提出超声波辅助同时提取条斑紫菜多糖和藻红蛋白的最佳提取条件为:超声60min,功率880W,30℃水浴4 h,料液比1:50,多糖提取得率为34.03%,藻红蛋白提取得率为1.20%,藻红蛋白纯度为0.356。 2、本文首次明确提出微波辅助同时提取条斑紫菜多糖和藻红蛋白的最佳提取条件为:微波4min,功率150W,30℃水浴5 h,料液比1:40,多糖提取得率为16.94%,藻红蛋白提取得率为0.417%,藻红蛋白纯度为0.255。与对照(30℃水浴5 h,料液比1:40,多糖提取得率为10.50%,藻红蛋白提取得率为0.324%,藻红蛋白纯度为0.215)相比,超声波辅助提取多糖提取得率增加23.5%,微波辅助提取多糖提取得率增加6.4%。 3、本文研究得出了三氯乙酸和藻胆蛋白变性温度结合法去除蛋白的最佳条件为:三氯乙酸浓度2%,50℃处理20min,蛋白清除率99.63%,多糖保存率90.49%,与传统的三氯乙酸除蛋白法(三氯乙酸浓度3%放置1 h,蛋白清除率为91.24%,多糖保存率为82.84%)相比,三氯乙酸和藻胆蛋白变性温度结合法去除蛋白效果更好,蛋白清除率增加8.39%,多糖保存率增加7.65%。 4、通过对超滤膜孔径的筛选,确定截留分子量分别为50 kDa和3kDa的膜。采用DEAE C-52和Sephadex G-100对50kDa和3kDa两个条斑紫菜多糖(PYPS)组分进行纯化,得到三个单一多糖组分PYPSⅡa、PYPS1a和PYPS 2a。 5、紫外光谱分析表明PYPSⅡa、PYPS1a和PYPS 2a不含核酸并口蛋白质,是单一组分。红外光谱解析表明PYPSⅡa、PYPS1a和PYPS 2a呈现出多糖的特征吸收峰,均为吡喃糖且含有硫酸基和3.6-内醚桥。气相色谱法分析表明PYPS1a和PYPS 2a均由L-鼠李糖、D-半乳糖及三种未知单糖组成,半乳糖与鼠李糖的摩尔比分别为30:1和12.8:1;PYPSⅡa是由L-鼠李糖、D-半乳糖及四种未知单糖组成,半乳糖与鼠李糖的摩尔比为6.6:1。 6、PYPSⅡa和PYPS 2a对人肝癌细胞A549的In vitro生长均有一定程度的抑制作用,并呈剂量依赖关系,在1 mg/mL时抑制率分别为43.1%和30.0%。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R914;R730.5

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【参考文献】
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