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《南京农业大学》 2008年
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梨火疫病菌群体感应相关基因luxS的功能分析

宋俊贤  
【摘要】: 由梨火疫病菌Erwinia amylovora引起的蔷薇科植物的火疫病是一类毁灭性的细菌病害,造成严重的经济危害。为了有效防治病害的发生及危害,人们对其致病因子的分子机理作了大量的研究。而许多植物病原细菌毒性因子的产生都依赖于群体感应(quorum sensing,QS)系统的调节。 LuxS蛋白参与细菌群体感应信号分子autoinducer-2(AI-2)合成的最后一步。本研究在实验室已有的研究基础上构建了Erwinia amylovora strainNCPPB1665(Era NCPPB1665)的luxS突变体(Ea△luxS)并且对突变体的表型进行了初步的分析。研究发现Ea△luxS影响细菌的游动性、胞外多糖的分泌以及对双氧水的耐受能力。分别将Era NCPPB1665、Ea△luxS、功能互补菌株Ea△luxS(pPRO-luxS)和空载体对照Ea△luxS(pPROEXHta)接种梨树叶柄,发现接种突变体Ea△luxS和空载体对照Ea△luxS(pPROEXHta)的叶片发病情况比野生型和功能互补菌株Ea△luxS(pPRO-luxS)明显降低。这表明luxS基因影响Era NCPPB1665重要毒性基因的表达,因此,干扰luxS基因的表达可能能成为控制梨火疫病菌的一种潜在方式。 为了进一步明确luxS基因是否影响Era NCPPB1665中hrp基因的表达,我们在E.amylovora Ea321的致病岛中挑选了八个hrp相关基因,分别为dspE、hrpW、hrpA、hrpB、hrcJ、hrpL、hrpJ、hrpY。同时,根据Sanger Institute(www.sanger.ac.uk)网站中公布的E.amylovora基因组序列,对八个相关基因分别设计引物。提取野生型Era.NCPPB1665、突变体Ea△luxS、功能互补菌株Ea△luxS(pPRO-luxS)和空载体对照Ea△luxS(pPROEXHta)的总RNA,利用反转录差异显示技术研究luxS基因对八个hrp相关基因表达的影响情况。研究发现,luxS基因并不影响hrp相关基因的表达。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S436.612

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【参考文献】
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