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《南京农业大学》 2009年
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嗜水气单胞菌J-1株luxS基因缺失株的构建及特性分析

张小军  
【摘要】: 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila, Ah)是重要的水生病原菌,给水产养殖业造成极大的经济损失,同时还是重要的人畜共患病病原菌。该菌的致病性与其产生的毒力因子密切相关,已知毒力因子有胞外酶、溶血素、肠毒素以及粘附素如菌毛和表面蛋白S层等。这些毒力因子相互协同作用于机体,发挥毒性作用。此过程受到严格的调控,群体感应系统参与此调控过程。 群体感应(Quorum Sensing, QS)即细菌在生长过程中通过一定的信号分子来传递信息,使细胞能感知周围环境中自己同类的数量,并据此调节自身基因的表达,产生特定的行为。群体感应细菌产生、释放、响应的信号分子命名为自体诱导物(Autoinducer, AI).本试验根据已发表的嗜水气单胞菌QS相关基因序列设计引物,以J-1株基因组为模板,PCR扩增分别得到AI-1合成酶基因ahyI;AI-2合成酶基因luxS、转录结合蛋白ahyR基因核苷酸序列。测序分析发现,扩增出的3段基因与已测出全基因组的嗜水气单胞菌ATCC7966的同源性较高。用根瘤农杆菌JZA1(Agrobacterium tumefaciens脸测AI-1;哈维氏弧菌BB170(Vibrio harveyi)险测AI-2,结果均能测出信号,说明嗜水气单胞菌可能存在双组分QS信号传导系统。 AI-1对嗜水气单胞菌毒力因子的调控已有报道,而luxS为嗜水气单胞菌ATCC7966株全基因组测序发现的S一核糖高半胱氨酸(SRH)裂解酶同源基因,该酶在其他细菌中被证实参与催化合成AI-2。对于luxS基因在嗜水气单胞菌中的功能,以及它在QS中扮演何种角色还知之甚少。本试验构建了luxS基因缺失株,为下一步分析奠定基础。根据ATCC7966的全基因组序列设计合成两对引物,分别扩出luxS基因上下游1000bp左右的序列。选择合适的酶切位点,在上下游片段中间插入氯霉素抗性基因,构建缺失luxS的自杀性质粒pHM5 (luxS)。将该质粒转入E.coli SM10,接合法将质粒转入嗜水气单胞菌J-1株,在含有氯霉素、头孢唑啉的培养基上筛选单交换插入株。PCR验证后单交换菌株接入无NaCl、含20%蔗糖的LB液体培养基中,倍比稀释后涂浓度20%蔗糖的LB平板,PCR鉴定双交换缺失株。 luxS基因缺失后发现,细菌生长较野生株慢。AI-1产生第一个波峰提前,第二个波峰升高,说明luxS缺失也会影响信号分子1的合成,这暗示了QS系统1和QS系统2协同调控的功能。缺失luxS后细菌几乎不产生AI-2,这确证了LuxS的AI-2合成酶功能。不管是缺失株还是野生株,在血平板和脱脂奶平板上均能产生透明圈,说明缺失株产生溶血素和胞外蛋白酶的能力没有丢失。随后的RT-PCR分析发现,与野生株相比,缺失株在对数生长期和稳定期溶血素基因表达没有显著变化,而丝氨酸蛋白酶基因在对数生长期表达较高,在稳定期显著降低。这与QS系统1调控胞外蛋白酶方式一致。全菌蛋白SDS-PAGE比较发现,缺失株中一个明显的蛋白条带丢失;而上清蛋白SDS-PAGE没有发现蛋白条带明显的改变。小鼠攻毒试验表明,缺失株与野生株对小鼠的半数致死量相等,致病性上的差别仅体现在小鼠死亡时间上,缺失株在8h死亡率低于野生株,但16时后死亡率则相等。该研究为进一步探讨luxS基因的功能奠定了基础。
【学位授予单位】:南京农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S941

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 付立霞;嗜水气单胞菌非质粒依赖性菌蜕疫苗的研制及评价[D];南京农业大学;2012年
2 王娜;嗜水气单胞菌浮游态和生物被膜状态比较蛋白质组学及相关蛋白特性分析[D];南京农业大学;2012年
【参考文献】
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1 邱茂锋,杨瑞馥;致病性耶尔森菌毒力因子YopM的研究进展[J];军事医学科学院院刊;2004年06期
2 陈怀青,陆承平;家养鲤科鱼暴发性传染病的病原研究[J];南京农业大学学报;1991年04期
3 陈怀青,陆承平,赵肖;培养条件对嗜水气单胞菌HEC毒素产量的影响[J];南京农业大学学报;1993年S1期
4 朱兴国,范红结,陆承平,陈怀青;嗜水气单胞菌J-1株粘附素及其受体分析[J];南京农业大学学报;2002年02期
5 严亚贤,孙建和,陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌菌毛的提纯及特性分析[J];南京农业大学学报;1995年03期
6 严亚贤,孙建和,陈怀青,陆承平;一株无致病力的嗜水气单胞菌的分离与特性分析[J];南京农业大学学报;1995年04期
7 李焕荣,陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析[J];南京农业大学学报;1996年03期
8 陆承平;致病性嗜水气单胞菌及其所致鱼病综述[J];水产学报;1992年03期
9 储卫华,陆承平;筛选用转座子Tn916诱变的具有免疫原性的嗜水气单胞菌蛋白酶缺失株[J];水产学报;2001年03期
10 黄晓,叶巧真,何建国,谢俊峰,王顺强;嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的克隆与序列分析[J];水产学报;2001年06期
【共引文献】
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1 倪莉;王豪举;程光胜;刘华栋;;肉鸡鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染的诊治[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年17期
2 蒋建军,王鹏雁,剡根强,康立超;集约化兔场高致病性痢疾志贺菌的分离与鉴定[J];安徽农业科学;2005年09期
3 王丽荣;董永军;梁美兰;;牛病毒性腹泻病毒的病原学与诊治[J];安徽农业科学;2005年12期
4 杭柏林;李杰;王丽荣;梁美兰;王承民;;鸡源致病性大肠杆菌分离株的药敏试验及灭活疫苗制备[J];安徽农业科学;2006年22期
5 张则斌;王芳;徐为中;范志宇;何孔旺;高成华;王平生;;一例波杂山羊葡萄球菌病与大肠杆菌病混合感染的初步诊断[J];安徽农业科学;2007年36期
6 胡秀彩;吕爱军;陈宏;;产色素温和气单胞菌的特性及其外膜蛋白型研究[J];安徽农业科学;2008年08期
7 常新耀;谢红兵;魏刚才;朱晓铭;;鸡大肠杆菌的生化特性·致病性及药敏试验研究[J];安徽农业科学;2008年11期
8 贾仁勇;李超;殷中琼;罗李媛;杜永华;吴小兰;;青刺果多糖对鸡血清抗体和血液生化指标的影响[J];安徽农业科学;2008年17期
9 常洪涛;姚雪静;陈陆;杨霞;王川庆;;河南省致病性猪源链球菌部分微生物学特性及耐药性研究[J];安徽农业科学;2008年22期
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1 陈珍;万春和;曾亮明;朱春华;林甦;刘斌琼;林羽;黄瑜;;H9N2亚型禽流感安徽分离株CK/AH/1/10的分子特征[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 毛立;李文良;严少华;钟声;郭俊尧;江杰元;;山羊流产病料中牛病毒性腹泻病毒的检测[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 刘洋;布日额;吴金花;郭闯;锡林高娃;刘燕;;内蒙古中东部地区乳源性大肠杆菌PCR检测及其耐药性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 徐慧;韦莉;佟瑞平;龚玉梅;王宏俊;孙惠玲;张培君;;溶血性曼氏杆菌PCR诊断试剂盒的研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
6 李喜旺;董奎龙;彭玉伟;;中药“牛孕灵”冲剂治疗奶牛不孕症的临床疗效总结[A];中国奶业协会年会论文集2008(上册)[C];2008年
7 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
8 葛文霞;柳旭伟;张旭峰;;克拉玛依市农业开发区H5亚型禽流感免疫抗体水平的检测[A];2010植物提取物与营养及应用技术交流研讨会论文集[C];2010年
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3 黎满香;感染猪的粪肠球菌的分离鉴定及部分特性和诊断方法研究[D];湖南农业大学;2010年
4 闫振贵;不同途径免疫NDV弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究[D];山东农业大学;2011年
5 李素;猪瘟病毒感染血管内皮细胞的差异蛋白质及细胞因子表达变化分析[D];吉林大学;2011年
6 季华员;猪产肠毒素型大肠杆菌F41受体基因的精细定位与鉴别[D];江西农业大学;2011年
7 钟蕾;三角帆蚌细菌性瘟病病原学研究与LasB基因的克隆及表达[D];湖南农业大学;2011年
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9 邹成义;恩拉霉素对断奶仔猪生产性能和免疫功能的影响及机制研究[D];四川农业大学;2011年
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3 田甜;鱼源嗜水气单胞菌的分离鉴定及耐药性研究[D];华中农业大学;2010年
4 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
5 王延昭;利用免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌[D];华中农业大学;2010年
6 严琦;副猪嗜血杆菌与巨噬细胞相互作用的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 王艳伟;PRRSV感染激活RANTES产生的信号通路研究[D];华中农业大学;2010年
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9 王秀云;鸡传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定及免疫预防研究[D];山东农业大学;2009年
10 都振玉;潍坊地区鸭传染性浆膜炎病原体的分离鉴定与疫苗制备应用研究[D];山东农业大学;2009年
【同被引文献】
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1 李圆圆;曹海鹏;邓璐;杨先乐;;西伯利亚鲟源嗜水气单胞菌致病菌的分离及其全菌苗的免疫效果[J];动物学杂志;2008年06期
2 张友平;王军毅;刘问;钱冬;;罗氏沼虾气单胞菌MrM0602株的分离和致病性研究[J];水产科学;2008年01期
3 黄琪琰;金丽华;魏海丽;吴建农;陈逢安;刘招生;高以太;刘光军;殷羽中;;主要淡水养殖鱼类暴发性流行病的防治[J];淡水渔业;1992年03期
4 何智;任红梅;杨德英;杨光友;边尧;王帅;;嗜水气单胞菌源黄鳝出血病的组织病理学研究[J];淡水渔业;2010年04期
5 曹军;冯学芝;冯展波;常燕;徐磊;;大黄鱼致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定[J];湖北农业科学;2007年05期
6 曾纪锋,王君;鳖嗜水气单胞菌败血症的病理学观察[J];海南大学学报(自然科学版);2000年03期
7 文祝友,刘晓燕,金燮理,陈可毅,萧克宇;三角帆蚌嗜水气单胞菌病的病理研究[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2001年01期
8 陈怀青,陆承平;家养鲤科鱼暴发性传染病的病原研究[J];南京农业大学学报;1991年04期
9 朱兴国,范红结,陆承平,陈怀青;嗜水气单胞菌J-1株粘附素及其受体分析[J];南京农业大学学报;2002年02期
10 严亚贤,孙建和,陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌菌毛的提纯及特性分析[J];南京农业大学学报;1995年03期
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1 吴幼;非质粒依赖型菌蜕疫苗及其中药免疫佐剂的研究[D];西南大学;2008年
【二级参考文献】
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1 陈怀青,陆承平;家养鲤科鱼暴发性传染病的病原研究[J];南京农业大学学报;1991年04期
2 陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌表层蛋白及外膜蛋白的初步分析[J];南京农业大学学报;1993年02期
3 陈怀青,陆承平,赵肖;培养条件对嗜水气单胞菌HEC毒素产量的影响[J];南京农业大学学报;1993年S1期
4 许冬青,陆承平,陈怀青;嗜水气单胞菌S蛋白的生化特性[J];南京农业大学学报;1999年04期
5 储卫华,陆承平;嗜水气单胞菌胞外蛋白酶对鲫鱼的致病性[J];南京农业大学学报;2000年02期
6 陈琼,陆承平,陈怀青;嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究[J];南京农业大学学报;1994年03期
7 严亚贤,孙建和,陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌菌毛的提纯及特性分析[J];南京农业大学学报;1995年03期
8 严亚贤,孙建和,陈怀青,陆承平;一株无致病力的嗜水气单胞菌的分离与特性分析[J];南京农业大学学报;1995年04期
9 李焕荣,陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析[J];南京农业大学学报;1996年03期
10 孙其焕,孙佩芳,金丽华,吴建农;异育银鲫溶血性腹水病病原的研究[J];水产学报;1991年02期
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5 陶家发;吴淑勤;潘厚军;石存斌;;嗜水气单胞菌GYK1株培养基的优化[J];畜牧与兽医;2006年11期
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7 曹军;常燕;徐晓梅;于海燕;庄晓亮;刘冬琴;;抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及保护效果[J];湖北农业科学;2009年06期
8 陈俭清;卢彤岩;;体外药动模型中恩诺沙星对嗜水气单胞菌的药动及药效研究[J];东北农业大学学报;2009年10期
9 刘玉兰;邢克智;陈玲;杨广;;褶皱臂尾轮虫对2种细菌的摄食及其生长情况研究[J];安徽农业科学;2010年08期
10 陈俭清;卢彤岩;刘红柏;王荻;汪文选;;恩诺沙星对嗜水气单胞菌的体外药效学研究[J];水产学杂志;2010年01期
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1 吴谋胜;彭宣宪;;采用蛋白质组学方法研究嗜水气单胞菌的生长代谢[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 梁万文;秦春香;陈明;熊艳芸;雷爱莹;黄婷;李超;王瑞;余晓丽;;鲢鱼嗜水气单胞菌PCR检测方法的建立[A];2008年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2008年
3 龙华;曾勇;;鱼血清转铁蛋白对嗜水气单胞菌(A.Hydrophila)的抗性研究[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
4 李金;胡志东;田彬;徐海茹;岳娜;;天津医科大学总医院嗜水气单胞菌的分布及耐药性分析[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
5 李月红;;嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的分离培养和鉴定[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
6 沈素方;刘佩红;沈莉萍;;噪鹛嗜水气单胞菌的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
7 方勤美;林天龙;龚晖;陈红燕;陈日升;欧阳岁东;;嗜水气单胞菌β-hemA重组菌的优化培养及其生长曲线的测定[A];福建省科协第三届学术年会卫星会议——创建精品畜牧业研讨会论文集[C];2003年
8 邓显文;谢芝勋;谢志勤;刘加波;庞耀珊;谢丽基;;多重聚合酶链反应快速检测嗜水气单胞菌和爱德华菌[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
9 潘晓艺;沈锦玉;郝贵杰;;嗜水气单胞菌TPS-30株丝氨酸蛋白酶基因与溶血素基因在大肠杆菌中的融合表达[A];2008年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2008年
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1 李德新 范红结;南农大推出嗜水气单胞菌灭活疫苗[N];江苏农业科技报;2000年
2 王冬梅 王冬敏;嗜水气单胞菌引起的鲤鱼并发症防治措施[N];中国特产报;2001年
3 林岳夫;我国研制出多联鱼病防治疫苗[N];中国海洋报;2004年
4 林岳夫;福建制成多联鱼病防治疫苗[N];农资导报;2004年
5 张明;蛙病的防治[N];山西科技报;2004年
6 朱其太;气单胞菌预防和控制[N];中国国门时报(中国出入境检验疫报);2002年
7 李大刚;早春预防塘鱼三大病[N];中国渔业报;2009年
8 胡志安 王书磊;提高我国水产免疫技术研究水平[N];中国渔业报;2010年
9 方群兵;水产动物细菌性疾病的诊疗(完)[N];中国海洋报;2001年
10 福建金谷科技开发有限公司 姜雄飞;甲鱼养殖中消毒剂的使用(未完待续)[N];中国海洋报;2001年
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1 付立霞;嗜水气单胞菌非质粒依赖性菌蜕疫苗的研制及评价[D];南京农业大学;2012年
2 田树君;嗜水气单胞菌中聚羟基脂肪酸酯包涵体蛋白PhaP的研究[D];中国农业大学;2005年
3 曹海鹏;抗嗜水气单胞菌解淀粉芽孢杆菌的抗菌机理研究及其微胶囊制剂的安全性评价[D];上海海洋大学;2013年
4 罗晓松;鱼源嗜水气单胞菌aopB~- aopD~- aroA~-缺失株构建及其生物学特性研究[D];华中农业大学;2008年
5 卢春霞;复方植物提取物对嗜水气单胞菌抑菌作用的研究[D];江南大学;2011年
6 朱大玲;嗜水气单胞菌毒力基因及基因工程疫苗[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2006年
7 肖鹏;鱼类疫苗的研究:Ⅰ:海水鱼类病原菌乳化口服疫苗的研究;Ⅱ:迟缓爱德华氏菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白疫苗的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2008年
8 张敏;迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella Tarda)LuxS/AI-2群体感应系统研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
9 吴惠仙;生物防治用途芽孢杆菌对水产条件致病菌抑制作用与对中华绒螯蟹、日本沼虾及中华鳖保护效果的评价[D];浙江大学;2005年
10 王娜;嗜水气单胞菌浮游态和生物被膜状态比较蛋白质组学及相关蛋白特性分析[D];南京农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 薛玉玲;嗜水气单胞菌J-1株ahyI基因缺失株的构建及特性分析[D];南京农业大学;2012年
2 翟翔;嗜水气单胞菌J-1株不同培养条件下胞外蛋白的比较蛋白组学研究[D];南京农业大学;2009年
3 王春瑞;嗜水气单胞菌的分子流行病学调查及其两种分型方法的研究[D];宁波大学;2011年
4 肖丹;射阳盐场地区鲫源嗜水气单胞菌分子流行病学研究[D];上海海洋大学;2011年
5 杨丽莉;枯草杆菌脂肽抗嗜水气单胞菌的机理和应用研究[D];南京农业大学;2010年
6 蒋启欢;嗜水气单胞菌的分离鉴定及控制方法研究[D];合肥工业大学;2012年
7 夏飞;团头鲂源嗜水气单胞菌分离鉴定、检测及绿色荧光蛋白标记菌株的构建[D];南京农业大学;2012年
8 刘亚东;中华鳖养殖水质调控及嗜水气单胞菌缓释疫苗研制[D];河北大学;2013年
9 陈晓利;黄鳝嗜水气单胞菌病和温和气单胞菌病防治研究[D];四川农业大学;2010年
10 赵蓓蓓;鳖源嗜水气单胞菌ZHYYZ-1表型、致病机制及抑菌中草药复方筛选的研究[D];浙江海洋学院;2012年
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