收藏本站
《南通大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

白介素-6抵抗NMDA诱导的神经元凋亡的作用及其细胞内信号转导机制

刘展  
【摘要】: 目的:本实验室以前的工作表明,细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6 )具有保护神经元、抵抗谷氨酸和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)的兴奋性神经毒作用。已知神经元凋亡与许多脑疾病和脑损伤密切相关,而IL-6对神经元凋亡的影响及其作用机制目前尚不明确。为此,本研究在我们以往工作的基础上,一方面通过制备NMDA诱导的神经元凋亡的细胞模型来探讨IL-6保护神经元、抵抗神经元凋亡的作用,另一方面从IL-6的细胞内信号转导途径入手,探索IL-6抗神经元凋亡的作用机制。可望为IL-6应用于临床来防治某些脑损伤和脑疾病提供实验依据。方法:取出生后8 d大鼠的小脑,进行小脑颗粒神经元的培养。根据不同的研究目的,将IL-6(40、120 ng/ml)、JAK抑制剂AG490(5、10μmol/L)和PI3K抑制剂LY294002(5、10μmol/L)分别加入到小脑颗粒神经元的培养液中预孵育8 d,然后用NMDA(100μmol/L)刺激小脑颗粒神经元30 min,诱导神经元凋亡。用Real-time PCR法及Western blot法检测神经元内凋亡相关基因/蛋白和酶的表达水平,即检测抗凋亡成分Bcl-2、促凋亡成员Bax和凋亡关键酶半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl asparate-specific proteinase-3,caspase-3)的mRNA和蛋白的表达水平。同时,用Western blot法检测IL-6、AG490及LY294002作用于神经元时,神经元表达磷酸化的信号转导和转录活化因子(signaltransducer and activator of transcription 3,STAT3)及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)的水平。结果:未用IL-6预处理的神经元,在用NMDA刺激后,其表达Bcl-2 mRNA和蛋白显著减少,表达Bax mRNA和蛋白明显增加,表达caspase-3 mRNA和蛋白活化片段显著增加。IL-6本身呈现浓度依赖性地增强Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,及抑制Bax和caspase-3的mRNA和蛋白的表达。神经元用IL-6预孵育后,再用NMDA刺激,神经元内Bcl-2、Bax和caspase-3的mRNA和蛋白的表达水平与未用IL-6预处理的神经元比较,出现mRNA和蛋白表达一致的Bcl-2上调、Bax和caspase-3下调的变化,这些变化均有显著意义,并且IL-6的作用具有浓度依赖性,即IL-6在较高浓度(120 ng/ml)时,能使NMDA诱导的Bcl-2、Bax和caspase-3的表达变化恢复到未用任何处理的对照水平。神经元用JAK抑制剂AG490和IL-6共同预孵育,再用NMDA刺激后,神经元内Bcl-2、Bax和caspase-3的mRNA和蛋白的表达水平与仅用IL-6预处理和NMDA刺激的神经元比较,出现mRNA和蛋白表达一致的Bcl-2下调、Bax和caspase-3上调的变化,AG490的这一作用也具有浓度依赖性,即较高浓度的AG490(10μmol/L)阻断IL-6的作用较强,但仍没有使Bax和caspase-3的mRNA和蛋白的表达水平完全回复到未用IL-6预处理的神经元的表达水平,说明AG490可部分阻断IL-6对凋亡基因/蛋白和酶表达的影响。同时,IL-6可上调磷酸化STAT3的表达,AG490明显阻断IL-6对磷酸化STAT3表达上调的作用。神经元用PI3K抑制剂LY294002和IL-6共同预孵育,再用NMDA刺激后,神经元内Bcl-2、Bax和caspase-3的mRNA和蛋白的表达水平与仅用IL-6预处理和NMDA刺激的神经元比较,出现mRNA和蛋白表达一致的Bcl-2下调、Bax和caspase-3上调的变化,LY294002的这一作用也具有浓度依赖性,即较高浓度的LY294002(10μmol/L)阻断IL-6的作用较强,但仍没有使Bax和caspase-3的mRNA和蛋白的表达水平完全回复到未用IL-6预处理的神经元的表达水平,说明LY294002可部分阻断IL-6对凋亡基因/蛋白和酶表达的影响。同时,IL-6可上调磷酸化Akt的表达,LY294002明显阻断IL-6对磷酸化Akt表达上调的作用。结论:NMDA抑制Bcl-2表达及增强Bax和caspase-3的表达,表明NMDA可诱导神经元的凋亡。IL-6显著抵抗NMDA诱导的Bcl-2表达下调及Bax和caspase-3表达上调,说明IL-6具有保护神经元、抵抗神经元凋亡的作用。用药物分别抑制IL-6细胞内信号转导分子JAK和PI3K后,其下游蛋白STAT3和Akt的磷酸化被抑制,同时IL-6抗神经元凋亡的作用被阻断,提示IL-6的两条细胞内信号转导途径JAK-STAT3和PI3K-Akt均参与介导IL-6的抗神经元凋亡作用。
【学位授予单位】:南通大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R741

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭富强;杨云华;;病毒性心肌炎患儿血清单核细胞趋化蛋白-1、白介素-6水平的变化[J];中国实用医药;2011年16期
2 孟珊珊;张铁辉;刘洪文;贾非;赵庆杰;;腺苷A_1受体激动剂对缺血损伤的兔脊髓神经元凋亡的影响[J];卒中与神经疾病;2011年03期
3 褚赛纯;胡玉燕;李清君;李慧娜;李文斌;;NOS抑制剂对甲醛炎性痛诱导的大鼠痛反应及脊髓神经元凋亡的影响[J];中国应用生理学杂志;2011年03期
4 丁俊蓉;许华强;赵晓燕;郭建华;周益伟;;肿瘤坏死因子-α、白介素-6在老年代谢综合征中的检测以及与胰岛素抵抗的相关性研究[J];国际老年医学杂志;2010年02期
5 朱萧;王芳;卢敏莹;潘东晓;胡树珍;申鸿卓;罗凯;贺智敏;王金龙;;血清IL-6水平在神经胶质瘤预后中的意义[J];解剖科学进展;2011年04期
6 邢月利;金燕;高乐俊;;不同血压人群血清IL-6及hs-CRP水平变化及其相关性[J];临床输血与检验;2011年03期
7 李清明;舒仁明;王家驷;白俊玺;;血清白介素-6在诊断肝细胞肝癌中的临床价值研究[J];川北医学院学报;2011年03期
8 鱼海;杨金锁;张建军;温慧军;;急性脑梗死患者同型半胱氨酸与炎症因子的相关性分析[J];卒中与神经疾病;2011年04期
9 刘学文;胥向红;杨锐;贾玉洁;;W-7对NMDA诱导的体外培养神经元凋亡的保护作用及机制[J];中国新药杂志;2011年14期
10 张延;武伟;詹锋;陈道军;符克英;林书典;王茹;黄艳艳;;尿白介素-6水平与IgA肾病肾小管间质损伤的相关性研究[J];海南医学;2011年17期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨金升;王彦平;范磊;张明磊;司江华;曲传勇;;艾芬地尔对脑缺血再灌注大鼠AIF表达及神经元凋亡的影响[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
2 涂献坤;杨卫忠;石松生;倪天瑞;陈春美;王春华;文帅;;缺血预处理通过抑制炎症反应和神经元凋亡减轻缺血性脑损伤的初步研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
3 刘曙东;喻良;孙红斌;;EES对SE后海马神经元c-jun表达的影响及c-jun与海马神经元凋亡相关性的研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
4 陈应柱;顾永健;;刺五加皂甙抗一氧化氮介导的谷氨酸毒性神经元凋亡[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
5 王晓良;刘斌;袁辉;石桥桥;王玲;马士平;;中枢钾通道在神经元凋亡、损伤中的作用[A];2008年全国抗衰老与老年痴呆学术会议论文集[C];2008年
6 刘永红;万琪;李力;;小鼠皮质神经元类缺血/再灌注后氟桂利嗪对胞质内游离钙离子和神经元凋亡的实验研究[A];中国康复医学会脑血管病专业委员会第八次全国学术研讨会论文集[C];2004年
7 王宏涛;孙建宁;徐秋萍;陈国强;;异亚丙级莽草酸对局灶性缺血再灌注损伤致大鼠神经元凋亡的保护作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
8 王宏涛;孙建宁;徐秋萍;陈国强;;异亚丙级莽草酸对局灶性缺血再灌注损伤致大鼠神经元凋亡的保护作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
9 吴明;朱元贵;潘晓东;林楠;张静;陈晓春;;雷公藤氯内酯醇通过激活Wnt/β-catenin通路减轻寡聚态Aβ1-42诱导的神经元凋亡[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
10 朱从丽;戴冀斌;;鸡胚发育过程中端脑神经元凋亡分布的研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王 键 郜 峦;不同中医治法对脑缺血-再灌注损伤大鼠自由基和神经元凋亡的动态比较研究[N];中国中医药报;2004年
2 ;黄芪有抗大鼠急性脑缺血后神经元凋亡作用[N];中国中医药报;2005年
3 ;老年痴呆症研究成热点[N];中国医药报;2002年
4 罗翌 叶烨 梅广源;益气活血法治疗急性缺血性脑卒中[N];中国医药报;2005年
5 马彦红;中风患者何时施针灸[N];家庭医生报;2007年
6 仲海亮;积雪草可治肌萎缩侧索硬化症[N];中国医药报;2006年
7 马艳红;探索AD分子机制 全面开展“靶点”研究[N];中国医药报;2003年
8 袁佳丽 常建龙;为了人民的健康[N];科技日报;2011年
9 罗刚;小儿惊厥预后并非绝对良好[N];健康报;2003年
10 冯琳 王伟;口腔颌面部战创伤研究获突破[N];中国医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨静文;3,5,3’-三碘甲状腺原氨酸对有丝分裂后神经元的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
2 钱巍;APC-Cdh1在体内外神经元缺氧损伤中的作用[D];华中科技大学;2010年
3 孙红振;火器性周围神经损伤后神经元凋亡的特点及CIDE-B基因对神经元凋亡的影响[D];第三军医大学;2004年
4 唐咸玉;温肾健脾、祛毒活血法对早期糖尿病肾病及IL-6、TNF-α影响的研究[D];广州中医药大学;2007年
5 陈奕芝;β-细辛醚对谷氨酸所致神经元损伤的保护作用[D];广州中医药大学;2007年
6 莫鸿辉;IL-6、ICAM-1、ApoE血清水平及基因多态性与冠心病证侯关系研究[D];广州中医药大学;2007年
7 李飞跃;反流性食管炎粘膜上皮紧密连接蛋白及桥粒连接蛋白表达方式的改变及与IL-6表达关系的实验研究[D];中国医科大学;2009年
8 赵钢;康脉软胶囊对家兔股动脉硬化闭塞症C-反应蛋白、白介素-6、基质金属蛋白酶-9影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2009年
9 汪璇;白介素6类细胞因子对成人成肌细胞增殖和分化影响的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
10 李毅;活化蛋白C对脂多糖诱导内皮细胞活化的影响[D];中国协和医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱晓云;短期应用辛伐他汀对急性冠脉综合征患者血浆IL-6、MMP-9和CRP的影响[D];广西医科大学;2005年
2 安贵峰;核因子与白介素6在骨质疏松模型骨组织中的表达研究[D];中国医科大学;2005年
3 马永娜;C-反应蛋白及白介素-6与急性心肌梗死后心室重构的相关性研究[D];河北医科大学;2005年
4 贺丙华;单肺通气麻醉行肺科手术期间动脉血中IL-6和IL-8的变化[D];广西医科大学;2007年
5 张冬梅;藻蓝蛋白对缺血再灌注大鼠脑保护作用的实验研究[D];青岛大学;2005年
6 齐菲;胞浆型磷脂酶A_2调控ECV-304细胞释放Leptin的作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
7 冉茂熙;强肌健力饮对脾虚型重症肌无力细胞因子的影响[D];广州中医药大学;2006年
8 王磊;栀子苷预处理对家兔重症急性胰腺炎防治作用[D];湖北中医学院;2008年
9 王银娥;白介素-6在大鼠慢性病贫血发病机制中的相关研究[D];山西医科大学;2009年
10 葛信波;硫酸镁对大鼠创伤性脑损伤后白介素-6表达影响的实验研究[D];中国医科大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026