收藏本站
《南京医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

SublyticC5b-9诱导GMCs增殖和ECM分泌的机制研究

邱文  
【摘要】:第一部分Thy-1肾炎病变和sublytic C5b-9诱导GMCs增殖、ECM分泌及TSP-1、TGF-β1合成的作用 目的:检查Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis, Thy-1N)大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells, GMCs)病变和体外用亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)复合物诱导GMCs增殖、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)和血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的合成情况。方法:首先,复制大鼠Thy-1N模型,定期用real-time PCR和Western blot方法检查其肾组织中细胞增殖指标,即细胞周期蛋白D2(cyclin D2)和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)及ECM指标,即纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和IV型胶原蛋白(collagen IV)和上述两种细胞因子(TSP-1和TGF-β1)的表达水平。同时,使用BrdU掺入法、光镜及电镜观察大鼠肾小球细胞的增殖情况。此外,体外培养大鼠GMCs,进行不同分组处理后再给予sublytic C5b-9刺激,分别检查受刺激的GMCs合成cyclin D2、PCNA、FN、collagen IV、TSP-1和TGF-β1 mRNA丰度及蛋白水平。另用ELISA法检测培养上清中总TGF-β1和活化的TGF-β1含量,并用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymidine incorporation,3H-TdR)检查GMCs的增殖情况。结果:大鼠Thy-1N病变18h时,肾组织中cyclin D2、PCNA表达和肾内BrdU阳性细胞数均开始升高,实验3d时,除了上述指标升高外,肾组织中FN、collagen IV和TSP-1、TGF-β1的合成亦显著升高,7d时这些指标的升高更为明显。另形态学观察还发现,实验3d时,GMCs数量和ECM分泌均明显增多,7d时增加更为显著。体外实验中,大鼠GMCs在sublytic C5b-9刺激后18h,其cyclin D2、PCNA、FN和collagen IV表达及细胞增殖水平均显增高。同时,TSP-1和TGF-β1 mRNA及蛋白表达(包括活化的TGF-β1含量)也明显上升。结论:Thy-1N大鼠肾小球病变存在早期增殖和继发增生的病理改变。体外用sublytic C5b-9刺激GMCs能够诱导其细胞增殖、ECM分泌和细胞因子(TSP-1和TGF-β1)的合成。 第二部分体外沉默TSP-1基因和抑制TGF-β1活化对sublytic C5b-9促进GMCs增殖和ECM分泌的影响 目的:研究沉默TSP-1基因对于sublytic C5b-9复合物促进GMCs增殖和ECM分泌的影响,并探讨TSP-1与TGF-β1两种细胞因子之间的关系。方法:设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小干涉RNA(small interference RNA, siRNA),筛选沉默效率最佳的TSP-1 siRNA。将TSP-1 siRNA转染体外培养的大鼠GMCs后再给予sublytic C5b-9刺激。以real-time PCR和Western blot检查TSP-1、TGF-β1、cyclin D2、PCNA、FN及collagen IV mRNA丰度和蛋白表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总TGF-β1和活化TGF-β1的含量。同时,用3H-TdR法检查GMCs的增殖水平。除此之外,应用人工合成的TSP-1封闭肽段(GGWSHW)和TGF-β1中和抗体处理培养的大鼠GMCs,研究TSP-1和TGF-β1在sublytic C5b-9诱导的GMCs增殖和ECM分泌中的作用及其相互关系。结果:TSP-1 siRNA转染大鼠GMCs后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的GMCs增殖和细胞外基质(FN和collagen IV)的生成。另用TSP-1封闭肽段(GGWSHW)处理大鼠的GMCs后亦能显著抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1的活化,并减轻GMCs增殖和FN、collagen IV的产生。此外,用TGF-β1中和抗体处理GMCs后也能明显抑制由sublytic C5b-9引发的GMCs增殖和ECM(FN、collagen IV)的分泌。 结论:用TSP-1 siRNA沉默GMCs中的TSP-1基因表达能够抑制由sublytic C5b-9刺激诱导的GMCs增殖和ECM分泌,而sublytic C5b-9促进GMCs增殖和ECM分泌的机制可能与其诱导的TSP-1合成增加且活化TGF-β1有一定的关系。 第三部分体内关闭TSP-1基因对Thy-1肾炎病变和尿蛋白分泌的抑制效应 目的:探讨用TSP-1 siRNA沉默大鼠肾组织内TSP-1基因对大鼠Thy-1肾炎(Thy-1N)肾组织病变和尿蛋白分泌的抑制作用。方法:应用肾动脉灌注加电导入方法,将TSP-1 siRNA表达质粒导入大鼠肾组织,再注射抗胸腺细胞血清(anti-thymocyte serum,ATS)复制大鼠Thy-1N。分别取ATS注射后18h、3d和7d时的大鼠肾组织,以real-time PCR、Western blot和免疫组化方法检查大鼠肾组织中TSP-1、TGF-β1、cyclin D2、PCNA、FN和collagen IV mRNA和蛋白的表达水平,同时应用ELISA法测定大鼠尿液中总TGF-β1和活化TGF-β1的含量,并采用BrdU掺入法观察各组大鼠肾小球细胞的增殖情况。此外,应用光镜和电镜检查大鼠肾组织病理学改变,并用生化方法测定各组大鼠24h尿蛋白的变化。结果:将TSP-1 siRNA质粒导入大鼠肾组织后再复制Thy-1N,定期取标本检查发现,TSP-1 siRNA+Thy-1N组,其肾组织中的TSP-1基因表达显著低于Thy-1N模型组,大鼠尿液中活化的TGF-β1含量也显著降低。另肾组织中的细胞周期蛋白(cyclin D2)、细胞增殖核抗原(PCNA)和细胞外基质(FN和collagen IV)表达水平明显下调。此外,BrdU掺入实验和形态学观察(光镜和电镜)还发现,用TSP-1 siRNA处理的Thy-1N大鼠(TSP-1 siRNA+Thy-1N组),其发病后的肾小球内GMCs增生及ECM积聚显著减轻,尿蛋白分泌也明显减少。 结论:沉默大鼠肾组织内TSP-1基因再复制Thy-1N模型,不仅能够明显抑制Thy-1N大鼠肾组织中TGF-β1的活化,而且还能减少肾小球系膜细胞(GMCs)的增生和细胞外基质(ECM),如FN和collagen IV的分泌及蛋白尿的产生。
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R692.3

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 周镜然,白云,朱锡华;补体攻膜复合物细胞非致死性效应及其信号转导机制[J];免疫学杂志;2000年S1期
2 王迎伟,何球藻,秦慧莲;大鼠肾小球系膜细胞的培养与鉴定[J];徐州医学院学报;1999年01期
3 王迎伟,徐静华,汤仁仙,高丰光;抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析[J];中国病理生理杂志;2004年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 冯雪凤;王迎伟;;DNA损伤修复相关基因Gadd45的研究进展[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
2 吴佩泽;华树成;杨雪梅;;补体攻膜复合物C5b-9处理后的树突状细胞对同种异体淋巴细胞的作用[J];吉林大学学报(医学版);2008年01期
3 金仲品;;补体激活与动脉粥样硬化的形成[J];滨州职业学院学报;2009年03期
4 孔铖将;黄左安;陈炯;史雨红;陆新江;;香鱼补体成分C9基因的克隆、序列分析及表达[J];动物学研究;2012年02期
5 丛璐;蒲传强;毛燕玲;刘洁晓;鲁向辉;汪茜;;C5b-9在坏死性肌病肌肉组织血管中的表达及意义[J];南方医科大学学报;2012年05期
6 佟建霞;;亚溶解型补体C5b-9复合物与细胞内信号转导通路[J];国外医学(免疫学分册);2005年06期
7 余文娟;王向晖;史芹;黄蕊;;纳米银对体外培养细胞附着形态及膜功能的影响[J];华东师范大学学报(自然科学版);2010年02期
8 马西文;秦明照;赵焕英;常志文;张勇;宋爱丽;;ApoE基因敲除小鼠主动脉组织中CD55、CD59表达的变化及意义[J];中国实用神经疾病杂志;2011年21期
9 陈俊香;李异;马强;成梅初;刘伏友;张东山;彭佑铭;;超声微泡介导肾小管上皮细胞β-半乳糖苷酶基因的转导(英文)[J];中南大学学报(医学版);2009年11期
10 何太文;王小琴;张利;;肾安Ⅱ号对体外培养大鼠GMC增殖及NF-kB表达的影响[J];河南中医;2009年02期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵志伶;CVF和凉膈散对创伤失血性休克大鼠肝脏损害机制的研究[D];天津医科大学;2011年
2 张翠;芪丑汤对肾衰大鼠作用机理的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2004年
3 高玲娟;Sublytic C5b-9诱导GMCs增殖和ECM分泌分子机制及其信号通路[D];南京医科大学;2007年
4 侯宁宁;链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠外周神经病变免疫损伤和环孢素A的抑制作用[D];天津医科大学;2007年
5 宋旭东;C反应蛋白介导脂质紊乱参与动脉粥样硬化早期形成的研究[D];第一军医大学;2007年
6 侯卫平;IDO在新月体肾炎中的表达、意义及其体内干预的实验研究[D];第三军医大学;2007年
7 王慧;Sublytic C5b-9诱导Thy-1肾炎GMCs凋亡的机制研究[D];南京医科大学;2008年
8 李文博;补体C5b-9复合物对人RPE细胞膜通透性及VEGF、TGF-β2表达的影响[D];天津医科大学;2008年
9 李莉;草鱼补体C9和穿孔素基因的克隆与表达研究[D];华中农业大学;2008年
10 卫静;BMP-7基因修饰骨髓间充质干细胞治疗IgA肾病的实验研究[D];第三军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 车楠;SublyticC5b-9诱导Gadd45γ表达对Thy-1肾炎GMCs凋亡病变的影响[D];南京医科大学;2009年
2 姜孝明;ATF3在sublyticC5b-9复合物诱导GMCs凋亡中的作用[D];南京医科大学;2009年
3 刘炘;SublyticC5b-9刺激GMCs诱导Egr-1与ATF3表达关系的研究[D];南京医科大学;2010年
4 刘丽莎;SublyticC5b-9诱导IRF-1表达对Thy-1肾炎大鼠GMCs凋亡病变的影响[D];南京医科大学;2010年
5 洪权;抗Thy1大鼠模型的基因表达谱分析[D];泰山医学院;2011年
6 王惠明;氧化的低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化介导[D];第三军医大学;2001年
7 卢祖礼;肾安Ⅰ号对大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β_1、HGF表达影响的实验研究[D];湖北中医学院;2005年
8 罗娜;亚溶破补体攻膜复合物对小胶质细胞刺激效应的研究[D];第三军医大学;2006年
9 佟建霞;亚溶解剂量补体C5b-9复合物诱导GMCs增生和ECM分泌及其NF-κB活化的作用[D];南京医科大学;2006年
10 张军;薰衣草薄荷叶非精油组分抗氧化及对大鼠肾小球系膜细胞氧化损伤保护功效的研究[D];华东师范大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 陈广平,郭慕依,张月娥,张锦生,张秀荣,陈琦;大鼠Thyl抗血清制备及系膜增生性肾炎模型的建立[J];临床与实验病理学杂志;1996年03期
2 张明,郭慕依,陈琦,金惠铭;大鼠肾小球系膜细胞培养[J];上海医科大学学报;1995年03期
3 王迎伟,高丰光,何球藻,秦慧莲;诱生性一氧化氮合酶cRNA探针的制备及敏感性检测[J];徐州医学院学报;1999年04期
4 王迎伟,何球藻,秦慧莲,高丰光,汤仁仙;补体C5b-9抗血清对抗胸腺细胞血清性肾炎大鼠肾组织一氧化氮合成及其病变的影响[J];中国病理生理杂志;2000年09期
5 王迎伟,何球藻,秦慧莲,高丰光,黄水平;补体C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞合成NO的机制探讨[J];中国病理生理杂志;2001年10期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王簃兰;芳香族烃类经皮肤的渗透量[J];国外医学.卫生学分册;1982年01期
2 张寅恭;新杀虫剂Пиримор的卫生毒理学[J];国外医学.卫生学分册;1982年01期
3 蔡海英,张金生,崔小邢,郑国墚,黄孔威;国产维甲酸衍生物对大鼠食管上皮癌变的抑制作用[J];癌症;1983年04期
4 高强;大鼠直肠给心得安以避免首过消除效应[J];国外医学.药学分册;1983年01期
5 Seigo SHUMIYA;Sumi NAGASE;蔡华琬;;大鼠(Rattus Norvegicus)无白蛋白基因(Aualbumia)和盖帽基因(Hooded)的连锁[J];实验动物与比较医学;1983年01期
6 陈国志,黄淑英,王广义,刘志红;豚鼠和大鼠小肠移行性肌电复合波(MMC)的观察[J];基础医学与临床;1984年03期
7 横路谦次郎;不同类型辐射照射复合催乳素诱发大鼠乳腺肿瘤的效果[J];辐射防护;1984年03期
8 温志永;;幼鼠夜间PR 峰的出现对孕酮的依赖作用[J];国外医学.妇产科学分册;1989年05期
9 赵学增;郑富稳;夏烨;;普萘洛尔对雌性大鼠生殖机能的影响[J];河北医科大学学报;1989年03期
10 郑培敏;熊克仁;江家元;;大鼠斜角带核水平支的传入和传出联系——WGA—HRP和HRP法研究[J];皖南医学院学报;1989年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 程井军;吴其恺;彭锐;孙国杰;;电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织氧化及抗氧化状态的影响[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年
2 杨珺超;宋康;鲁建锋;陈君峰;夏永良;;补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1作用的实验研究[A];2009年中华中医药学会内科分会全国中医内科临床科学研究专题研讨会论文汇编[C];2009年
3 廖慧慧;李芳;何燕萍;;罗氏内异方对子宫内膜异位症模型大鼠内膜整合素a vβ 3表达的影响[A];第九次全国中医妇科学术大会论文集[C];2009年
4 王进荣;王平;孟宪丽;杨永茂;张艳;;单向肠灌流法研究芦荟大黄素的大鼠在体肠吸收[A];第十一届全国中药药理学术大会论文摘要[C];2010年
5 史大卓;;接种Walker256肉瘤对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的影响[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
6 方杰;胡昔权;郑海清;潘三强;李莉莉;;运动训练对脑梗死大鼠室管膜下区神经新生的影响[A];中国康复医学会第十三届全国脑血管病康复学术会议会议指南[C];2010年
7 孙琳;郭春妮;赵永波;;BM6在Aβ致大鼠海马神经元损害中保护作用的研究[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
8 徐存拴;李三强;周爽;;麻醉对大鼠应激反应的影响[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
9 朱萱萱;王广基;刘建平;王淑云;徐轩;;口腔膜治疗实验性大鼠口腔膜溃疡的研究[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
10 舒清明;张永亮;李灵芝;何冰;李志强;;蛋白质芯片技术检测脑损伤大鼠血清差异蛋白[A];中国生理学会应用生理学专业委员会暨《中国应用生理学杂志》二十周年纪念大会和学术讨论会论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;关木通对大鼠致癌性的实验研究[N];中国医药报;2003年
2 刘霞;诱导多功能干细胞让小鼠长出大鼠胰腺[N];科技日报;2011年
3 ;丹参能加快放创复合伤大鼠创面愈合[N];中国中医药报;2005年
4 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
5 ;新抗病毒抗生素17997在大鼠体内药代动力学和组织分布研究[N];中国医药报;2003年
6 ;刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆有防治作用[N];中国中医药报;2005年
7 ;中药复方能逆转腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大[N];中国中医药报;2005年
8 孙忻;人类首次获得克隆大鼠[N];科技日报;2003年
9 阿胜;死亡阴影下孕育生机无限[N];医药经济报;2002年
10 程源;父母吸烟会导致婴儿厌食[N];大众卫生报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邱文;SublyticC5b-9诱导GMCs增殖和ECM分泌的机制研究[D];南京医科大学;2009年
2 杨建新;腹部术后疲劳综合征模型及抗术后疲劳方作用的研究[D];湖北中医学院;2004年
3 杨丹榕;大鼠IgEFcCH2-3受体阻断与IgEFcCH2-3-FasL诱导肥大细胞凋亡的研究[D];第二军医大学;2004年
4 李玉茹;神经营养素及其受体在老年性大鼠耳蜗及下丘中表达规律的研究[D];吉林大学;2005年
5 陈党红;舒筋颗粒对卒中后肌张力增高的影响及可能作用机制探讨[D];广州中医药大学;2005年
6 卢奕;人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究[D];苏州大学;2005年
7 潘静薇;NOGO-B在动脉粥样硬化病变中差异表达的研究[D];第二军医大学;2006年
8 王连友;大鼠液压冲击颅脑损伤模型的立体定向控制研究[D];天津医科大学;2006年
9 陈来照;神经肽Y及其受体在垂体腺瘤中的表达及意义[D];天津医科大学;2006年
10 朱志宏;不同性别大鼠创伤失血性休克后多形核白细胞反应的差异及胃复安干预的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 向芳;围产期大鼠血脂组成与乳腺炎症相关基因的表达变化研究[D];四川农业大学;2011年
2 吴芳庚;环境温度变化致大鼠小肠黏膜免疫屏障损伤的研究[D];南昌大学;2011年
3 杨科峰;基于BCI的大鼠运动行为控制的研究[D];郑州大学;2011年
4 钟丽敏;中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究[D];苏州大学;2011年
5 彭晶;乳化异氟醚对成年大鼠学习记忆功能的影响[D];遵义医学院;2011年
6 刘金凤;螺虫乙酯对大鼠的生理影响及其体内分布检测方法的建立[D];东北农业大学;2011年
7 杜力;桂枝附子去桂加白术汤治疗大鼠弗氏完全佐剂关节炎作用机制的研究[D];辽宁中医药大学;2011年
8 高传长;丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶-1表达的影响[D];南昌大学;2011年
9 罗雯;COX-2shRNA对实验性大鼠肝纤维化的影响[D];南华大学;2012年
10 张雄军;麻醉与手术对大鼠认知功能损害和MMP-9表达改变的研究[D];南华大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026