视蛋白基因3（opsin3）参与调节肝癌细胞5-Fu耐药性的机制研究

张晋

【摘要】：肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康。目前对于大多数肝癌,化学治疗仍是最常用的治疗手段。然而随着化疗药物的广泛使用,肝癌细胞对化疗药物易产生耐药,常常导致化疗失败。研究表明,肝癌细胞耐药性可以使细胞凋亡受到抑制,而参与细胞凋亡调控的基因表达异常可能是导致肝癌细胞对化疗药物耐受的原因之一。因此,发现和研究肝癌耐药性相关机制,对预防和逆转肝癌耐药性、发现新的药物作用靶点以及建立新的治疗方法具有重要的理论和现实意义,已成为当前肝癌防治研究的热点问题。本实验室前期研究表明,与蚊杀虫剂抗性相关视蛋白基因同源的人视蛋白基因3 (opsin3,OPN3)与肝癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性相关,推测,OPN3可能作为G蛋白偶联受体(GPCR)成员,参与了肝癌细胞Bel-7402对5-Fu的耐药性机制。本研究分别对4组稳定转染细胞株(低表达OPN3的肝癌敏感细胞Bel-7402、高表达OPN3的肝癌耐药细胞Bel74025-Fu及相应空载体对照细胞株),在5-Fu处理状态下,采用实时荧光定量PCR方法对opsin3转染结果进行验证;并采用Annexin V / Propidium Iodide(PI)双染色、流式细胞术等方法对转染细胞株进行凋亡检测;进一步采用Western blot方法对流式细胞术凋亡实验结果进行验证,并通过Western blot进一步检测信号通路相关蛋白质表达差异,探讨OPN3参与调节肝癌细胞5-Fu耐药性的机制。结果表明,OPN3相对表达水平与Bel-7402细胞在5-Fu处理下的凋亡水平呈正相关,提示OPN3可能上调细胞凋亡信号通路,诱导细胞凋亡。这一结果与前期CCK-8细胞毒性/耐药性实验结果相符。OPN3相对表达水平能够影响Akt/磷酸化Ak(tp-Akt)/Bcl-2/Bax信号通路蛋白质表达,即高表达OPN3可以抑制p-Akt/Bcl-2表达,促进蛋白质Bax表达;低表达OPN3可以促进p-Akt /Bcl-2表达,抑制Bax表达。本研究初步探讨了OPN3参与调节肝癌细胞5-Fu耐药性的机制,首次发现OPN3可以调控Akt信号通路相关蛋白质表达,为深入研究视蛋白基因影响肝癌细胞耐药性及凋亡的机制、发现新的肝癌基因治疗靶点提供了科学依据。

【关键词】：肝癌 5-氟尿嘧啶 耐药性 视蛋白基因OPN3 凋亡 信号通路
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R735.7
【目录】：

中文摘要4-6
英文摘要6-8
前言8-10
材料与方法10-23
一、材料10-14
（一）细胞系10
（二）主要试剂10-11
（三）主要溶液配方11-14
（四）主要仪器14
二、方法14-23
（一）实时荧光定量 PCR 验证 OPN3 在 Bel7402、Bel74025-Fu 细胞中的差异表达14-18
（二）流式细胞术凋亡检测18-20
（三） Western blot20-23
结果23-30
一.荧光定量 PCR23-25
（一） RNA 提取23
（二）细胞转染 OPN3 高表达载体及低表达载体效果鉴定23-25
二.流式细胞术凋亡检测25
三.Western blot25-30
（一）蛋白质定量25-26
（二） Western blot 鉴定 OPN3 在稳定转染细胞系内的表达26-27
（三） Western blot 鉴定 Bcl-2、Bax 蛋白质表达差异27-28
（四） Western blot 信号通路研究28-30
讨论30-33
小结33-34
参考文献34-38
综述38-53
参考文献48-53
攻读学位期间发表文章情况53-54
致谢54-55

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3	;Effect of targeted magnetic nanoparticles containing 5-FU on expression of bcl-2, bax and caspase 3 in nude mice with transplanted human liver cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2007年23期
4	魏凤香;刘君星;王琳;李红枝;罗佳滨;;迷迭香精油诱导肝癌HepG2细胞凋亡后bcl-2和bax基因表达变化的研究[J];中药材;2008年06期
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6	段传荣;过建春;;中西医结合防治原发性肝癌研究进展[J];光明中医;2010年01期
7	饶建明;杨金瑞;易路;;PI3K/Akt信号传导通路与雄激素非依赖性前列腺癌关系的进展[J];国际泌尿系统杂志;2006年05期
8	何国珍;黄天壬;邓伟;余家华;张春燕;利基林;;XRCC1Arg399Gln基因多态性与肝癌发生的关系研究[J];广西中医药大学学报;2012年03期
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4	侯恩存;王新;练祖平;陆运鑫;白广德;关莹;黄丁平;秦冰;陈小梅;刘敏;黄妍;;肝动脉化疗栓塞术对肝癌患者细胞免疫功能的影响[J];实用肿瘤学杂志;2006年05期
5	陈万青;邹小农;张思维;;中国肝癌死亡率地理分布分析[J];实用肿瘤学杂志;2008年03期
6	王兴旺,胥彬;细胞凋亡在肿瘤基因治疗中的意义[J];肿瘤;1997年05期

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3	张启南，陆培新，王金兵，吴燕，陆振宏;原发性肝癌高危人群前瞻研究[J];肿瘤研究与临床;1996年02期
4	白咸勇,贾秀红,成令忠,顾云娣,刘同慎;c-fos蛋白在大鼠肝癌发生中的表达及意义[J];滨州医学院学报;1997年04期
5	路建平;肝细胞生长因子与肝癌[J];肝脏;1999年04期
6	张江灵,王崇国;干扰素和白细胞介素-2治疗乙型肝炎甲胎蛋白异常升高者对降低肝癌发生率的前瞻性研究[J];实用肝脏病杂志;1999年01期
7	俞顺章,穆丽娜;乙型肝炎与肝癌[J];上海预防医学杂志;2005年09期
8	周峥珍,章宗籍,钱忠义,张华献,申丽娟,谢桂先;DEN诱发大鼠肝癌模型的实验病理研究[J];昆明医学院学报;2005年03期
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8	指导专家重庆医科大学附属第二医院感染病科教授张大志记者苏云丽;AFP升高肝癌发生“第一信号”[N];医药导报;2009年
9	记者徐琪忠　通讯员肖鑫;肝癌生物治疗有了新靶标[N];中国医药报;2011年
10	新欣;乙肝表面蛋白有望“预告”肝癌发生率[N];医药经济报;2004年

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7	宋志;抑癌基因Tg737在肝癌发病机制中作用的初步研究[D];第四军医大学;2010年
8	李长煜;肝癌化疗栓塞术前后血清蛋白质组学研究[D];复旦大学;2010年
9	秦雪;树鼩肝癌发生过程中的差异蛋白质组学研究及Prx家族的表达验证[D];广西医科大学;2006年
10	唐喆;索拉菲尼联合射频消融治疗肝癌的临床和实验研究[D];浙江大学;2012年

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