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《南京医科大学》 2010年
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肝细胞生长因子保护足细胞损伤的实验研究

部璇  
【摘要】: 目的: 肾小球滤过屏障的重要组分之一——足细胞在蛋白尿和肾小球硬化的发病机制中占有重要作用。肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)是损伤介导的组织修复因子,能引起细胞的生长,增殖和分化。但是HGF对足细胞损伤及蛋白尿是否存在保护作用尚不清楚。因此,本研究利用嘌呤霉素肾病小鼠动物模型,观察HGF对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside, PAN)所介导的足细胞损伤和蛋白尿的影响。 方法: 选用雄性,体重18~22g,BALB/c小鼠为研究对象。实验动物随机分为正常对照组(NC,n=6)、PAN肾病模型组(PAN,n=6)、HGF+PAN组(H+P,n=6)。PAN组:一次性尾静脉注射PAN144mg/kg体重建立嘌呤霉素肾病小鼠动物模型。H+P组:将HGF质粒(pCMV-HGF)20ug/只溶于生理盐水1.6ml,通过尾静脉快速注入小鼠体内, 24小时后给予144mg/kg体重的PAN尾静脉注射,正常对照组和PAN组注射等量的含pCDNA3质粒(20ug/只)生理盐水。于造模前和造模后第3天分别在代谢笼中收集24小时尿标本,随后处死小鼠留取肾组织标本。使用ELISA方法检测24小时尿蛋白排泄量,普通病理观察肾小球形态改变,电镜观察足细胞超微结构改变,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学染色法观察WT1的蛋白表达和定位情况,间接免疫荧光和免疫组织化学染色观察肾组织synaptopodin的表达变化情况。体外实验以小鼠永生化足细胞为研究对象,采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测足细胞WT1基因和蛋白的表达变化,利用嵌套培养板Boyden小室采用BCA蛋白检测方法检测白蛋白的漏出量变化。 结果: (1)与正常对照组相比,PAN组小鼠24h尿蛋白排泄量升高(*P 0.05), HGF降低PAN肾病小鼠尿蛋白排泄量,差异具有统计学意义(*P 0.05)。 (2)光镜染色结果显示PAN组与对照组相比肾小球结构未见明显异常,透射电镜结果显示,在PAN组大量足细胞足突融合,甚至脱落,而在注射HGF质粒的小鼠组,足细胞的足突融合程度和范围轻于PAN组。 (3)蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色结果显示,PAN组WT1的表达低于正常对照组,H+P组与PAN组相比WT1表达增加。 (4)正常对照组synaptopodin呈连续线状分布,而在PAN组的synaptopodin的染色强度降低,线性染色中断甚至消失。而synaptopodin的表达分布在H+P组基本恢复。 (5)体外实验结果示HGF缓解PAN诱导的WT1 mRNA和蛋白表达的降低,同时,Boyden小室结果显示,PAN处理组白蛋白漏出增多,而HGF减少足细胞损伤引起的白蛋白的漏出。 结论: 给予外源性HGF干预能够降低PAN肾病小鼠的大量蛋白尿,减轻PAN介导的足细胞损伤,改善足突融合,提示HGF对足细胞的保护性作用可能通过上调WT1的表达来实现的。
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R692

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