收藏本站
《南京医科大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

异种关节软骨与MSCs体外共同培养的实验研究

王结果  
【摘要】:背景: 小儿骨科临床工作中,由于某些先天性原因造成的组织器官不同程度的缺损和畸形,治疗这类疾病最大的困难就是缺乏合适的移植物,特别是新生儿可以用于自体移植的组织更是非常有限,所以一般认为自体移植在新生儿期并不适用。如果用假肢代替自体移植物又容易导致感染,况且儿童处在生长发育的关键时刻,假肢并不能伴随身体自动生长,所以其应用也受到了很大限制。细胞生物学和生物材料技术的进步促进了应用组织工程技术修复关节软骨缺损技术的发展,软骨细胞和干细胞都被证明可以用来重建受损的关节软骨。近来有人提出在围生期进行手术的设想,医生如果诊断出胎儿有先天性的组织缺损可以于围生期进行经母体的胎儿手术,取出胎儿组织细胞在体外进行培养,细胞伴随胎儿的生长也在不断生长分化,那么在胎儿出生后的新生儿期就可以利用体外培养的组织为患儿进行自体移植手术。但是此类治疗方法最大的困难仍然是缺乏细胞来源问题。细胞可以单独或结合生物材料应用于修复软骨缺损。已经成功的应用扩增培养的自体软骨细胞,扩增软骨细胞形成的类似软骨组织和生物材料技术通过体内移植的方式修复受损的关节软骨。然而研究结果表明这种方法并不是很理想,一是由于供体组织和供体部位病变的限制,二是无法获得所需要的大量的软骨细胞。三是在体外培养时软骨细胞会向成纤维细胞分化。另一方面,来自于骨髓的间充质干细胞已被证实可以在不同的诱导方法下向软骨细胞,成骨细胞和脂肪细胞方向分化。因此,间充质干细胞将会成为组织工程学中非常有用的细胞来源。在体外试验中,高浓度间充质干细胞在已知成分培养基中可以被诱导向软骨细胞方向分化。但是,随着间充质干细胞传代次数的增加其向软骨分化的潜能明显的降低。如果细胞生存环境中没有足够的因素帮助维持足够的分化潜能,间充质干细胞在经过多次传代以后很难向软骨细胞方向分化。传代培养的间充质干细胞需要一些强有力的诱导信号促进其向软骨细胞方向分化.将间充质干细胞和成熟的软骨细胞共培养不仅解决了诱导信号问题也解决了细胞来源问题。本实验中,我们将间充质干细胞和成熟软骨细胞在体外混合培养并分析相关的效应。 目的: 通过将异种关节软骨与MSCs体外共同培养后分析两种细胞的效应,初步了解在共培养时两种细胞之间的作用机制,为解决组织工程学修复软骨缺损时细胞数量不足和细胞去分化现象提供一种可靠的细胞培养方法,促进组织工程学修复软骨缺损的进一步研究。 设计、时间及地点: 分组对照观察,于2008-10 /2009-10在南京医科大学儿科学实验室完成。 材料: 选用2-3月龄健康白兔,人股骨骨髓。 方法:分别在体外分离培养人MSCs和兔软骨细胞,分离培养成功后取第2代软骨细胞和第3代间充质干细胞进行分组实验:共分五组,分别为人MSCs单独培养,人MSCs和兔软骨细胞两种细胞分别按1:1,1:2,2:1的比例分为3个组,第5组为兔软骨细胞单独培养,分别在培养1、2、3、4周后抽取mRNA用RT-PCR的方法分析两种细胞的一些特异性指标来确定在共培养时是哪种细胞在起作用,机制是什么。 主要观察指标:人MSCs体外扩增诱导分化后与兔的关节软骨细胞按一定的比例共培养后,通过RT—PCR的方法分析观察共培养中的细胞比例、Ⅱ型胶原基因的表达、共培养试验组中的总Ⅱ型胶原、SOX9表达。 结果:MSCs和关节软骨细胞分别以1:2、1:1、2:1的比例共培养后细胞增殖比例没有明显的变化;在共培养中MSCs和兔软骨细胞的比例为2:1的样本其Ⅱ型胶原与Ⅰ型胶原表达的比例较其它试验组增高;高比例的MSCs促进Ⅱ型胶原的表达;总Ⅱ型胶原和SOX9在MSCs和关节软骨细胞分别为1:2、1:1、2:1的试验组中依次增高。在共培养中MSCs和关节软骨细胞为2:1的比例试验组中明显促进软骨细胞基质的表达。 结论:共培养当中MSCs以直接的或间接的旁分沁的方式影响软骨细胞形成和正向调节软骨细胞的表达。
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R329

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 田力;梁晓鹏;田晓晔;汪卓;李娜;;骨髓间充质干细胞在诱导液条件下向软骨细胞的定向诱导分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年38期
2 赵基栋;祝建中;苗宗宁;钱寒光;彭伟;;TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的实验研究[J];实用临床医药杂志;2005年11期
3 李丽艳;杜江;黄金中;;兔软骨细胞诱导人脐血间充质干细胞成软骨的可行性[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年49期
4 柳菁;宇丽;许超;;间充质干细胞向软骨细胞表型分化的研究进展[J];中国生物工程杂志;2011年06期
5 王开友;张鲁平;王颖;潘琪;;血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响[J];中国矫形外科杂志;2007年19期
6 付勤;王广斌;邴佩旭;李斌;傅永慧;;几丁质支架对间充质干细胞成软骨分化中Ⅱ型胶原表达的影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2007年04期
7 付勤;王广斌;邴佩旭;李斌;傅永慧;;几丁质支架对体外间质干细胞成软骨分化的影响[J];中国骨质疏松杂志;2007年09期
8 李中华;栾保华;;体外诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究[J];山东大学学报(医学版);2008年02期
9 陈润良;刘磊;田卫东;王涛;李声伟;;间充质干细胞复合藻酸盐凝胶体内成软骨分泌Ⅱ型胶原的代谢功能特征[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年10期
10 解继胜;黄海玲;唐毓金;陈维平;罗小琼;;人脐带血间充质干细胞分离培养及向软骨细胞的分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年16期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周红辉;万福生;;人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的实验研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
2 王巧稚;韩艺;赵宏贤;余鸿;刘广益;;当归诱导人脂肪间充质干细胞向神经细胞分化和毒性检测的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
3 王玉红;陈光辉;;地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
4 杜凤移;王皓;杨树龙;赵绘存;杨英;杨军;;纳米纤维支架对大鼠间充质干细胞向肝细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
5 郭勇;张西正;郭春;魏严;李瑞欣;徐晓莹;张永红;;脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化中心肌发育相关基因的表达[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
6 朱恒;江小霞;刘元林;张毅;毛宁;;间充质干细胞选择性调节破骨细胞发育和功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
7 张颢;陶艳玲;邱林;张伯龙;马军;陈志哲;刘拥军;韩忠朝;;一种具有免疫负调节功能的人脐带源间充质干细胞[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 杨少光;池颖;戎丽娟;邢文;卢士红;赵钦军;马凤霞;韩忠朝;;不同来源间充质干细胞诱导分化成血管内皮细胞的比较[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
9 李杰平;孔佩艳;李佳丽;朱丽丹;孔祥敬;曾东风;刘红;王庆余;彭贤贵;陈幸华;张曦;;纯化的自体CD34+细胞联合间充质干细胞治疗难治性克隆恩病一例并文献复习[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
10 罗高兴;程文广;黄正根;贺伟峰;袁顺宗;陈希炜;吴军;;应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面的实验研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王秋月 王琳;空军总医院采用间充质干细胞救治小脑萎缩[N];科技日报;2009年
2 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年
3 记者 李素锋;我市首例间充质干细胞移植手术取得成功[N];临汾日报;2009年
4 记者 邰举;韩用猪软骨细胞制成生物材料[N];科技日报;2008年
5 吴一福;西安交大:用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年
6 记者 王丹 通讯员 艾素;异染性脑白质营养不良治疗获突破[N];健康报;2010年
7 陈如为;骨关节炎折磨千万人软骨细胞缺氧是元凶[N];医药经济报;2000年
8 于峰;哪些运动有助孩子长高[N];中国中医药报;2008年
9 徐亚静;上海两项自然科学基金项目通过鉴定[N];中国医药报;2005年
10 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王亮;脂肪来源的间充质干细胞经软骨诱导后以复合支架修复兔关节软骨缺损的实验[D];吉林大学;2011年
2 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年
3 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年
4 熊卉;转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究[D];武汉大学;2010年
5 张展;鹿茸肽促进人脂肪来源间充质干细胞增殖及成软骨分化的研究[D];吉林大学;2011年
6 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年
7 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 周全;IGF-1诱导和促进脂肪间充质干细胞体内外软骨形成[D];中南大学;2008年
9 赵迎泽;BMP9通过MAPKs通路调控间充质干细胞成骨分化及其机制的初步研究[D];重庆医科大学;2010年
10 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王结果;异种关节软骨与MSCs体外共同培养的实验研究[D];南京医科大学;2010年
2 王昌耀;透明质酸对人骨髓来源间充质干细胞软骨分化的影响[D];青岛大学;2005年
3 张钰;体外诱导人胎盘间充质干细胞分化为软骨细胞的实验研究[D];中国医科大学;2008年
4 祝佳佳;人脐带间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究[D];山西医科大学;2007年
5 高晋芳;类风湿关节炎患者骨髓间充质干细胞增殖能力及向软骨细胞分化能力的研究[D];山西医科大学;2009年
6 李斌;大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究[D];中国医科大学;2005年
7 唐子滨;纳米级胶原基骨材料复合自体脂肪间充质干细胞用于兔后外侧脊柱融合的实验研究[D];河北医科大学;2010年
8 张福丽;间充质干细胞治疗肺动脉高压研究进展(附肺动脉高压发病机制进展)[D];山西医科大学;2011年
9 吴伟;蛋白质乙酰化修饰与间充质干细胞C3H10T1/2的成脂分化[D];暨南大学;2011年
10 章守琴;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外研究[D];昆明医学院;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026