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《南京医科大学》 2012年
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甘草素(liquiritigenin)抑制裸鼠人宫颈癌HeLa细胞移植瘤生长及血管生成作用的研究

刘雨欣  
【摘要】:癌症位居我国城市居民死亡原因的首位、农村居民死亡原因的第二位,是目前导致人类死亡最常见的疾病,也是全球最主要的死亡原因,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。肿瘤是机体在各种致瘤因素的作用下,局部组织细胞发生过度的异常增生,由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病,其发生和发展与肿瘤周围的血管密切相关。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是近年来被广泛关注的与多种肿瘤发生、发展密切相关的细胞因子,可以刺激肿瘤周围微血管生长,从而促进肿瘤的生长和转移,被认为是抵抗血管生成治疗癌症的靶标。临床上许多抗肿瘤的药物被开发,但是当前抗肿瘤药物长期使用时大都有各种副作用,比如免疫力下降,血压升高,出血,胃肠穿孔等,所以从植物中提取天然,高效,无毒的抗肿瘤药物成为研究的热点。 大量研究表明,许多植物中含有的黄酮类化合物(flavonoids compounds)具有抗肿瘤作用,其中包括了抑制血管生成的作用,如槲皮素,姜黄素等都被证实具有良好的抗肿瘤作用。本实验研究对象甘草素是一种二氢黄酮类化合物,具有抗炎症和抗癌症等生物学功效。本实验室前期体外研究表明,甘草素能抑制人肝癌SMMC-7721细胞,并经过线粒体氧化应激通路诱导细胞凋亡,同时在体内,甘草素能有效抑制肝癌细胞H22荷瘤小鼠肿瘤的生长。此外在体外宫颈癌HeLa细胞中,甘草素具有抑制HeLa细胞的增殖和抑制血管生成的作用。然而,有关甘草素在体内是否具有抑制肿瘤血管生成的作用尚不清楚。在体外实验研究的基础上,本课题拟通过人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤模型,研究甘草素对肿瘤生长及血管生成的作用,探讨甘草素对血管生成相关靶向因子VEGF的调控作用。通过本课题的研究,进一步阐明甘草素抑制肿瘤生长及其血管生成的作用及其相关分子机制,为研究天然植物二氢黄酮单体化合物甘草素在肿瘤化学预防作用提供科学依据。 目的:建立裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤模型,初步探讨甘草素对裸鼠移植瘤生长的影响。 方法:本研究经体外培养HeLa细胞,建立裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤模型。随机将裸鼠分为4组,服用羧甲基纤维素钠溶剂的对照组、甘草素低剂量组、甘草素中剂量组、甘草素高剂量组,造模成功后每天经口给药,实验期间每天称量裸鼠体重和每组饲料重量,每四天用游标卡尺测量裸鼠瘤体积,绘制动态变化生长曲线。四周后处死,眼眶采血,称取瘤重后,一部分甲醛固定制作石蜡切片,一部分置于液氮保存。并应用免疫组织化学的方法检测人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤中PCNA的表达水平。 结果:成功建立裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤模型。瘤块组织解剖学发现肿瘤切片为灰白色。使用不同剂量的甘草素(10mg/kg,20mg/kg,40mg/kg)处理荷瘤裸鼠后,裸鼠的瘤重与对照组相比均有降低,并呈剂量依赖效应。根据裸鼠移植瘤体积绘制出移植瘤动态变化生长曲线,实验组与对照组相比,在用药后均对移植瘤生长产生不同程度的抑制作用,呈剂量依赖效应。免疫组化显示,人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤组织PCNA表达减少,组间阳性细胞数统计分析显示,随甘草素剂量增加PCNA表达率逐渐下降。实验期间各组裸鼠的饮食、行为和精神状态并无明显异常,不同剂量甘草素组与对照组相比,给药前后各组裸鼠的摄食量和体重无显著性差异。 结论:甘草素能够抑制了裸鼠人宫颈癌HeLa细胞皮下移植瘤的生长,并且对裸鼠的摄食量和体重没有显著影响。 目的:探讨甘草素是否具有抑制裸鼠人宫颈癌HeLa细胞移植瘤血管生成作用,并初步研究其对血管生成相关靶向因子的调节作用。 方法:应用免疫组织化学的方法检测人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤中CD31、SMA、VEGF、TSP-1的表达作用;应用ELISA方法检测荷瘤裸鼠血清中VEGF、TSP-1蛋白表达水平;应用Western blot方法检测了人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤组织中VEGF、TSP-1蛋白表达水平。 结果:经免疫组化法测定,不同剂量的甘草素(10mg/kg,20mg/kg,40mg/kg)组移植瘤组织中CD31、SMA蛋白、VEGF蛋白表达均较对照组低,而TSP-1蛋白表达无明显变化。经统计学分析,与对照组相比差异具有显著性(P0.01),且呈剂量依赖效应。ELISA方法检测HeLa移植瘤裸鼠血清中VEGF/TSP-1表达水平,甘草素(10mg/kg,20mg/kg,40mg/kg)组与对照组相比VEGF表达下调,差异有统计学意义(P0.01),TSP-1表达无明显变化,说明甘草素可能通过VEGF靶点来抑制移植瘤血管生成作用。应用Western blot方法检测移植瘤组织中VEGF/TSP-1蛋白表达水平,结果表明甘草素抑制了移植瘤组织中血管生成相关因子VEGF的表达,并呈一定的剂量依赖效应,而对TSP-1表达影响不明显,所得结果与免疫组化和ELISA方法一致。 结论:甘草素可抑制裸鼠人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的血管生长作用,其作用机制可能与甘草素抑制血管生成相关因子VEGF的表达有关。
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R737.33

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