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《南京医科大学》 2019年
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FOXO3a上调Mxi1-0促进缺氧后内皮细胞凋亡

武珍  
【摘要】:目的:通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧模型,研究缺氧诱导内皮细胞凋亡与血管疾病之间的潜在机制,探讨HIF-1α及FOXO3a在HUVEC缺氧模型中诱导Mxi1-0表达以及细胞凋亡中的作用。方法:缺氧处理HUVEC,转染小干扰RNA(siRNA)分别沉默HIF-1α(siHIF-1α)、FOXO3(siFOXO3)的基因表达。通过CCK-8检测细胞活力,TUNEL法检测HUVEC的凋亡,Western blot检测HIF-1α、FoxO3a、Mxi1-0的蛋白表达水平,RT-PCR检测Mxi1-0的mRNA水平,免疫荧光检测FoxO3a的亚细胞定位,ChIP分析HIF-1α与FoxO3a在Mxi1-0启动子区域的富集。结果:本研究发现缺氧刺激上调Mxi1-0表达并触发HUVECs凋亡。此外,缺氧刺激诱导FOXO3的活化,转染siFOXO3抑制缺氧诱导的Mxi1-0表达以及HUVEC凋亡。使用ChIP检测证实FOXO3a可与Mxi1-0启动子区域结合。最后,我们发现转染siHIF-1α抑制缺氧诱导的HIF-1α表达以及HUVECs中FOXO3a/Mxi1-0轴的激活和HUVEC细胞凋亡。综上所述,本研究阐明了缺氧诱导HUVEC凋亡中的HIF-1α/FOXO3a/Mxi1-0的信号传导途径。实验数据还表明,在HUVEC缺氧模型中,HIF-1α是FOXO3a介导Mxi1-0上调和细胞凋亡的必要成分。结论:缺氧刺激诱导FOXO3a与Mxi1-0启动子的结合;触发HIF-1α依赖性的FOXO3a介导的Mxi1-0上调和HUVEC细胞凋亡。
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