收藏本站
《南京医科大学》 2019年 硕士论文
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

食管鳞状细胞癌circRNAs表观遗传生物标志物的筛选及功能研究

施佩仪  
【摘要】:背景与目的:食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤,是许多发展中国家重要的健康相关问题。中国是食管癌发病率和死亡率最高的国家之一,以食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)为主要亚型。虽然近年来食管癌的诊断和治疗方法已有较大进展,但多数患者确诊时已是中晚期,导致预后未见显著改善,5年生存率低于30%,主要原因是食管癌在早期阶段大多没有明显的临床症状,缺乏简便、无创的早期诊断方法。因此,寻找一种非侵入性、灵敏度和特异性高、简便易行的生物标志物,将能有效提升食管癌早期发现和早期诊断率,改善患者预后。环状RNA(circular RNA,circ RNA)是一大类具有调节能力的内源性非编码RNA(non-coding RNA,nc RNA),通过反向剪接形成的闭合环状结构,使其不易受RNA外切酶的影响,具有细胞外稳定性和进化保守性,在调控基因表达中发挥重要作用。近年来的研究显示circ RNA与多种疾病的发生有关,具有作为疾病诊断或预后生物标志物的潜力。然而,迄今为止,关于circ RNA在食管癌发生和发展中作用的研究较少。方法:本研究采用三阶段研究设计,第一阶段使用高通量circ RNA芯片,检测7对食管鳞状细胞癌组织和相邻正常癌旁组织的配对样本,筛选差异表达的circ RNA,筛选标准:表达量差异倍数(fold change,FC)≥2倍;组间比较P0.05。绘制热点图,构建差异性circ RNA表达谱,选择差异倍数最大的候选circ RNA进行第二阶段验证研究。第二阶段共收集69对食管鳞状细胞癌组织和相邻正常癌旁组织样本、44例食管鳞状细胞癌患者的血浆和44例健康对照血浆样本,通过实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)对候选circ RNA进行表达水平检测,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC),计算曲线下面积(area under the curve,AUC),评价候选circ RNA对食管鳞状细胞癌的诊断价值。第三阶段,选择两种食管癌细胞系(TE-1、KYSE-150)和一种正常食管上皮细胞系(HET-1A),探讨候选circ RNA在不同细胞株中的表达差异。构建circ RNA过表达载体,转染至食管鳞状细胞癌细胞系TE-1、KYSE-150中,观察对细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡等能力的影响。采用生物信息学技术预测候选circ RNA对应的潜在结合mi RNA,并采用双荧光素酶报告基因进行验证。结果:第一阶段,针对芯片检测结果,基于筛选标准(FC≥2且P0.05),共发现744个差异表达的circ RNA,其中469个上调,275个下调。hsa_circ_0030162是所有下调的circ RNA中表达量差异最高的(FC=12.1)。选择该circ RNA进行第二阶段扩大样本q RT-PCR验证。结果表明,hsa_circ_0030162在食管鳞状细胞癌组织中表达水平显著低于对应的癌旁组织(t=4.365,P0.001),同时也观察到食管鳞状细胞癌患者血浆中hsa_circ_0030162的表达水平也显著低于健康对照(t=3.940,P0.001)。如应用组织hsa_circ_0030162作为诊断标志物,则AUC为0.740(95%CI:0.637-0.843),灵敏度为73.91%,特异性为56.52%。如使用血浆hsa_circ_0030162作为诊断标志物,则AUC为0.736(95%CI:0.632-0.839),灵敏度为75.00%,特异性为61.36%。如果联合应用组织和血浆中hsa_circ_0030162作为诊断标志物,则AUC为0.789(95%CI:0.707-0.890),灵敏度和特异度分别为81.81%、65.91%。体外细胞实验表明,hsa_circ_0030162可抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验证实hsa_circ_0030162可结合mi R-125a-3p/mi R-218-5p,而mi R-125a-3p/mi R-218-5p是参与肿瘤发生发展的非编码RNA。结论:食管鳞状细胞癌中存在circ RNA差异表达谱,其中hsa_circ_0030162的表达水平在食管鳞状细胞癌中显著降低。功能学研究表明,hsa_circ_0030162在调节细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡中发挥着重要作用,与mi R-125a-3p/mi R-218-5p等肿瘤相关非编码RNA具有结合位点。研究结果提示,hsa_circ_0030162等circ RNA作为表观遗传生物标志物,在食管鳞状细胞癌诊断和预后方面具有潜在应用价值,有可能成为食管癌干预和治疗研究新的靶点。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前17条
1 刘林秀;薛丽燕;;食管鳞状细胞癌远处转移相关指标的研究进展[J];癌症进展;2017年11期
2 刘亮;左静;武中林;王光大;倪晓辰;赵丽;左连富;;肺耐药相关蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与多药耐药的相关性[J];中国老年学杂志;2016年17期
3 吴阳;余红民;;中性粒细胞与淋巴细胞比值在食管鳞状细胞癌患者预后评估中的价值[J];中外医学研究;2015年13期
4 孙晓宏;房福元;李卉;尹娜;庞作良;李惠武;;MMP-2和MMP-9在食管鳞状细胞癌患者癌组织中的表达及其意义[J];吉林大学学报(医学版);2015年04期
5 田秋红;曾锦生;陶雪勤;;胃肠间质瘤伴食管鳞状细胞癌的临床病理分析[J];中国现代医学杂志;2014年07期
6 Song Y;Li L;Ou Y;崔淼;许春伟;张博;;食管鳞状细胞癌基因组改变的确认[J];临床与实验病理学杂志;2014年11期
7 贺志仁;宋海滨;古伟光;胡建新;罗海涛;徐敏;;术后放化疗在局部晚期食管鳞状细胞癌中的临床应用研究[J];现代生物医学进展;2013年20期
8 ;中国人群食管鳞状细胞癌多个易感基因位点获确认[J];生命的化学;2012年05期
9 马明全;金庆文;刘向明;姜宏景;尚晓滨;于振涛;;奥沙利铂联合多西他赛治疗晚期复治食管鳞状细胞癌的临床观察[J];山东医药;2010年49期
10 马新义;陶仪声;马莉;;食管鳞状细胞癌中基质金属蛋白酶-1与血管内皮生长因子-C的表达及意义[J];蚌埠医学院学报;2010年08期
11 高艳锋;陈鲤翔;陈科;郑祥艳;祁元明;翟明霞;李永欣;;4.1B蛋白在食管鳞状细胞癌中的异常表达及其分子机制[J];肿瘤;2009年01期
12 王少彬;陈俊辉;陈理明;沈忠英;程本坤;;食管鳞状细胞癌中热休克蛋白10和60的表达及其意义[J];国际肿瘤学杂志;2006年02期
13 Katada C;Muto M;Manabe T;郝筱倩;;食管鳞状细胞癌内镜下黏膜切除术后的局部复发[J];世界核心医学期刊文摘(胃肠病学分册);2005年08期
14 霍勤,洪玫,王洪涛;扶正通噎汤配合放疗治疗中晚期食管鳞状细胞癌疗效观察[J];四川中医;2003年09期
15 赵小刚,董红,王翠玲,姜兴涛,由清涌;食管鳞状细胞癌bcl-2和Bax的表达及意义[J];山东医药;2003年33期
16 张洵,支会英,张健,王秀琴,周传农,吴旻,孙耘田,刘芝华;钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人食管鳞状细胞癌中的表达[J];中华肿瘤杂志;2003年04期
17 石殿鹏,李道堂,钟伟霞,杨瑞森,孙兰平,王颖;食管鳞状细胞癌VEGF的表达及意义[J];山东医药;2002年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘连科;朱陵君;顾艳宏;束永前;;食管鳞状细胞癌切除术后回肠转移1例[A];第三届中国肿瘤内科大会教育集暨论文集[C];2009年
2 王现亭;谢林森;贾莉婷;张展;;血管内皮生长因子在食管鳞状细胞癌患者血浆中的测定[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
3 徐卫国;张力建;谢玉泉;;血管内皮生长因子(VEGF)在原发性食管鳞状细胞癌中的表达及意义[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
4 叶菲;张澍田;孟欣颖;宗晔;朱圣韬;李鹏;周巧直;吕富靖;许彩民;;EGFR与COX-2联合阻断对食管鳞状细胞癌作用的体外实验[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
5 谢林森;;食管鳞状细胞癌患者血浆中血管内皮生长因子的测定[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
6 李光;张海峰;徐妙生;王全红;;食管鳞状细胞癌染色体9q12-21杂合性丢失[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年
7 乔学英;周志国;王薇;高献书;王雅棣;杨香然;张钧;霍俊杰;王静;刘欣;张萍;万欣;;不同临床靶体积适形放疗对食管鳞状细胞癌失败方式及预后的影响[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年
8 刘俊峰;王义舫;高杨;王福顺;曹富民;李保庆;王其彰;;食管鳞状细胞癌淋巴结转移与预后的关系[A];中国第九届全国食管癌学术会议论文集[C];2009年
9 邹霜梅;郑闪;吕宁;;食管鳞状细胞癌癌前病变分子遗传学异常改变的研究[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年
10 韩鹏黎;孙蕾;吕朋举;龚芬芬;马超;朱怡然;夏天;曹巍;;三种纳米颗粒对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2015年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈泉;MiR-148a在食管鳞状细胞癌中的功能和调控机制研究[D];苏州大学;2018年
2 陈少慕;RMP在食管鳞状细胞癌增殖中的作用机制研究[D];苏州大学;2018年
3 齐博;miR-30a-3p/5p表达失调促进食管鳞状细胞癌发生和发展的作用及分子机制研究[D];郑州大学;2017年
4 张蕾;MGMT基因及TP53基因结构改变与食管鳞状细胞癌[D];中国协和医科大学;2002年
5 夏书华;食管鳞状细胞癌的蛋白质组学研究[D];中国协和医科大学;2002年
6 吕英义;食管鳞状细胞癌侵袭和转移的相关分子生物学研究[D];山东大学;2006年
7 乔学英;食管鳞状细胞癌和贲门腺癌放射治疗临床靶体积的病理及临床研究[D];河北医科大学;2007年
8 崔元涛;抑癌基因Mig-6在食管鳞状细胞癌中的作用及机制研究[D];天津医科大学;2017年
9 吴捷;食管鳞状细胞癌肿瘤病理长度的预后和预测意义[D];浙江大学;2015年
10 葛晓晴;miR-193a-5p下调ERBB2表达抑制食管鳞状细胞癌侵袭的机制研究[D];郑州大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张一鸣;CD47和SIRPα在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义[D];郑州大学;2019年
2 黄小梅;长非编码RNA G077640在食管鳞状细胞癌中的作用及机制研究[D];西南医科大学;2019年
3 梁宝磊;趋化因子受体CCR7对食管鳞状细胞癌组织血管生成调控作用机制研究[D];遵义医科大学;2019年
4 施佩仪;食管鳞状细胞癌circRNAs表观遗传生物标志物的筛选及功能研究[D];南京医科大学;2019年
5 郑文靖;早期食管鳞状细胞癌患者外周血中外泌体lncRNA的表达和文献综述[D];深圳大学;2018年
6 周雅丽;PAQR3与食管鳞癌脉管生成的关系[D];郑州大学;2019年
7 赵凯;术前外周血炎症反应指标与Ⅰ-Ⅲ期食管鳞状细胞癌的临床病理及预后关系[D];郑州大学;2019年
8 范煜;术前外周血NLR和PLR与食管鳞状细胞癌患者预后的相关性研究[D];郑州大学;2019年
9 王伟;ICAM-3及LFA-1的表达与食管鳞状细胞癌浸润、转移的关系[D];郑州大学;2019年
10 刘世娜;MAGE-A11在食管鳞状细胞癌中的表达及表观调控机制研究[D];河北医科大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 黄金娟;中大绘出广东食管鳞状细胞癌遗传变异图谱[N];科技日报;2016年
2 记者 李斌 顾瑞珍 李亚红;多种常见高发癌可超早期无创检测[N];新华每日电讯;2015年
3 本报记者 武建玲;科技进步助推郑州发展惠及百姓生活[N];郑州日报;2015年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978