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《南京医科大学》 2003年
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骨髓基质细胞定向心肌细胞分化用于心肌重建的实验研究

卢新政  
【摘要】: 心肌异常性疾病如心肌梗死、心肌病是临床常见病。成年心肌细胞通常缺乏再生能力,心肌细胞坏死或凋亡后,少量再生难以满足心肌修复需要,导致心室重构、心律失常并最终出现心力衰竭。常用的治疗手段包括内科药物治疗、介入治疗和外科手术治疗均难以解决上述问题。心脏移植术是从根本上解决上述问题的方法,但受到供体来源、免疫因素的限制。细胞移植是治疗心肌梗死后心力衰竭的新方法,近年受到关注。 早期,有学者采用异体细胞包括胎心细胞和胚胎干细胞进行心肌移植试验取得一定的效果,但其应用受到免疫学及伦理因素的影响。 以后,有学者试用自体细胞移植以修复梗死心肌。自体心肌细胞来源受限而难以实施。自体骨骼肌细胞、平滑肌细胞移植能部分改善心脏功能,但这些细胞的耐疲劳性差。骨骼肌原细胞(卫星细胞)具有干细胞的部分功能,不能分化为心肌细胞。 骨髓中基质细胞是一种多能干细胞,在一定条件下可以定向分化为心肌细胞,这为骨髓细胞移植治疗心脏疾病提供了依据。自体BMSCs移植具有以下优点:(1)BMSCs具有多向分化功能,理论上可以分化多种中胚层细胞,色括具有收缩功能的心肌细胞及血管内皮细胞;(2)不存在免疫因素的影响;(3)自体取材方便,无伦理学争议;(4)BMSCs还是良好的细胞载体,同时携带目标基因进行转染治疗;(5)尚无引起肿瘤方面的证据。目前认为,BMSCs是较为理想细胞移植材料。 南京医科大学博士学位论文 本研究探讨了骨髓基质细胞的分离、培养、增殖、体外定 向分化条件、分化细胞结构功能变化,以及自体骨髓基质细 胞移植对急性心肌梗死动物模型的影响。共分三部分论述: 一、骨髓质细胞的体外分离、培养及增殖的研究。 建立 BMSCS的分离培养方法,证实贴壁法培养的 BMSCS能稳 定生长,传代细胞适应性强,增殖较快,超微结构和细胞周期表现 出较早期细胞特点。与传统培养方法相比,该法操作简单、实用性 强,可用于 BMSCS的体外实JirBf究。中药单体人参皂武 Rg;对体外 培养猪骨髓狮细胞具有增殖作用。 二、大鼠骨髓狮细胞定向。G肌细胞分化的研究 分离培养大鼠骨髓基质细胞,并以5-氮胞菩诱导后,分别观察 其形态结构、。C肌特异性蛋白(卜时蛋白重链、心房利钠肽)表 达、p肾上腺素能受体的表达、细胞内钙离子及钙波的变化情况。 结果表明,5-氮胞菩诱导能促使大鼠骨髓基质细胞聚积呈肌管样结 构,细胞体积变小、细胞器增多、核浆比例减少、出现肌小节;表 达卜肌球蛋白重链基因、心房利钠肽基因及p受体,p-肌球蛋白 重链基因表达水平可被乳鼠心室肌细胞的上清培养液所增加;细胞 内钙离子浓度增加,出现钙火花、钙震荡及钙波动等类似心肌细胞 内的钙信号现象。提示在卜氮胞替的诱导下,骨髓龈细胞有向心 肌样细胞分化的趋势,而心肌细胞的微环境可以增加这种作用。未 发现诱导后的细胞有自主搏动及细胞间的闰盘结构。 三、猪自体骨髓基质细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究 采用PTCA球囊堵闭冠状动脉LAD建立猪急性。C肌梗死动物模 型。分离培养增殖自体骨髓基质细胞并以 DAPI标i乙 然后移植于 梗死。。肌组织中。结果表明,植入的骨髓基质细胞能够成活,并在 一定程度上改善了宿主动物的。C脏功能及生存状况。
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R541

【参考文献】
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