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《南京医科大学》 2005年
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心室成纤维细胞向心肌样细胞转化用于心肌重建的实验研究

汤成春  
【摘要】:第一部分 5-氮胞苷诱导体外培养大鼠心室成纤维细胞向心肌样细胞转化的研究 第一节 大鼠心室成纤维细胞的分离、培养 目的:探讨大鼠心室成纤维细胞分离、培养的方法。方法:无菌条件下剪取SD大鼠乳鼠心室肌,采用胰酶消化的方法获取心室肌细胞,差速贴壁法分离心室成纤维细胞,进行体外培养、扩增,并观察所培养细胞的形态。结果:心室成纤维细胞在体外生长、增殖良好,刚分离出的心室成纤维细胞呈类圆形、三角形或多角形,生长缓慢;24h时细胞体积增大,呈三角形或多角形;48h-72h逐渐成梭形;消化传代后细胞生长速度加快,30min后开始贴壁,12h后贴壁完全,生长开始加速,细胞逐渐呈梭形平行排列,约3-4d即可传代一次。结论:胰酶消化、差速贴壁法是一种适合的心室成纤维细胞的培养方法。 第二节 5-氮胞苷诱导体外培养大鼠心室成纤维细胞向心肌样细胞转化 目的:研究5-氮胞苷诱导体外培养大鼠心室成纤维细胞的转归。方法:SD大鼠(清洁级)乳鼠10只,采用胰酶消化、差速贴壁法分离、培养心室成纤维细胞;取第3代细胞处于亚融合状态时用于实验,共分为7组:对照组、5-氮胞苷2.5,5,7.5,10,15,20μmol/L诱导组;实验前24h换为无血清培养基,并在培养基中加入不同浓度的5-氮胞苷,作用24h后洗去5-氮胞苷,继续完全培养基中培养2wk;相差显微镜及透视电镜观察对照组和诱导组细胞的形态;免疫组化、RT-PCR法检测细胞肌球蛋白重链β(β-MHC)、肌钙蛋白I(cTn I)及连接蛋白43的表达。结果:对照组心室成纤维细胞呈梭形均匀生长,平行排列,胞浆内线粒体少,粗面内质网丰富,可见微丝,未见
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R541

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【参考文献】
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【共引文献】
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