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《南京医科大学》 2008年
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东亚钳蝎毒素对神经元离子通道作用的研究

汪溪洁  
【摘要】: 第一部分:东亚钳蝎毒素的分离纯化和性质鉴定 应用经典色谱的方法分离纯化东亚钳蝎毒素,经过柱层析(SephadexG-25,SephadexG-50,CM Sephadex C-25)得到六个粗毒组分(BmK221~226),再通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)最终获得两个多肽:BmK2255和BmK2256。 运用ESI-MS对两个多肽的分子量进行测定,结果显示BmK2255的分子量为7223.0Da,BmK2256分子量为7036.85Da,且均为单一性多肽。Edman降解测序法结果显示BmK2255的全长序列为VRDGYIADDK NCAYF CGRNA YCDEE CIING AESGY CQQAG VYGNACWCYK LPDKV PIRVS GECQQ,与已发现的bukatoxin(BKTx)的氨基酸序列一致;BmK 2256(暂定名为BmKNJX11)的前15个氨基酸残基序列为GRDAY IADSE NCTYT,与已发现的MakatoxinⅠ和BmK9(3)-2前15个氨基酸残基完全一致。 第二部分:东亚钳蝎毒素对大鼠背根神经节动作电位的作用 以大鼠背根神经节DRG神经元为标本,运用全细胞膜片钳技术在电流钳记录模式下,成功记录到了动作电位(AP)后,加入了钠通道特异性阻断剂河豚毒素(TTX),结果显示AP的发放频率和幅值被明显抑制,用外液冲洗后部分恢复。在此基础上研究了bukatoxin和BmKNJX11对AP的作用,发现20,40μg/ml bukatoxin和BmKNJX11均使单个AP的时程延长,幅值减小,80μg/ml bukatoxin和BmKNJX11使DRG神经元几乎不发放动作电位。 第三部分:东亚钳蝎毒素对神经元钠通道的作用 以大鼠DRG神经元为标本,研究了BmKNJX11对TTX敏感型(TTX-S)和TTX非敏感型(TTX-R)钠电流(I_(Na))的作用。结果表明:BmKNJX11以浓度依赖和电压依赖的方式抑制TTX-S I_(Na)和TTX-R I_(Na)。40μg/ml BmKNJX11使TTX-S I_(Na)激活曲线和失活曲线均向超极化方向移动,衰减时间常数τ变大,复活时间延长,可激活通道数目减少,使TTX-R I_(Na)激活曲线向去极化方向移动,失活曲线向超级化方向移动,衰减时间常数τ变大,复活时间延长,可激活通道数目减少,这可能是导致DRG神经元兴奋性降低,动作电位发放频率和幅值减小的原因。 采用Real-Time RT-PCR技术分别研究bukatoxin对PC12细胞钠通道亚型Na_v1.3和Na_v1.8mRNA表达的影响,发现,bukatoxin预处理30min后,PC12细胞Na_v1.3 mRNA的表达增高,但随着时间的延长,Na_v1.3 mRNA表达下降;而Na_v1.8 mRNA的表达下降,随着时间的延长,Na_v1.8 mRNA表达下降得更加明显,但7hr时Na_v1.8mRNA表达有所回升。 第四部分:东亚钳蝎毒素对大鼠背根神经节钾通道的作用 以大鼠DRG神经元为标本,运用膜片钳技术研究了bukatoxin和BmKNJX11对电压门控钾离子通道的作用。结果表明:80μg/mlbukatoxin对全钾电流(I_K)、延迟整流钾电流(I_(KDR))、瞬时外向钾电流(I_A)无明显作用;80μg/ml BmKNJX11对I_K(主要成分为I_(KDR)和I_A)有轻微的抑制作用,使I_A减小至加药前的85.3±1%,I_(KDR)减小至加药前的78.12±2%。 第五部分:东亚钳蝎毒素对大鼠背根神经节GABA_A受体的作用 运用全细胞膜片钳技术在急性分离的大鼠DRG神经元上依次加入1~1000μmol/L GABA诱导出一内向电流,该电流随着GABA浓度增大而增大,且在-100~0 mV范围内为负向电流,在0~+40 mV范围内为正向电流,翻转电位为0 mV,表明该电流具有浓度依赖性,且在-100mV~+40mV内具有电压依赖性。在记录到稳定的I_(GABA)后,加入GABA_A受体的特异性拮抗剂荷包牡丹碱(bicuculline,Bic),电流明显被抑制,而加入特异性激动剂四氢吡啶甲酸(isoguvacine,ISO)后,电流明显增大,证明所记录到的电流为GABA激活电流。 在建立了配体门控离子通道记录方法的基础上,研究了bukatoxin和BmKNJX11对GABA激活电流的作用。结果显示bukatoxin对大鼠DRG神经元I_(GABA)有浓度依赖性的抑制作用,半数抑制浓度(IC_(50))为42.26μg/ml,Hill系数(h)为2.01。BmKNJX11对I_(GABA)有浓度依赖性的兴奋作用,半数有效浓度(EC_(50))为60.4μg/ml,Hill系数(h)为3.4。
【学位授予单位】:南京医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R114

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 毛霞,肖杭,谭智勇,石云,赵志奇,吉永华;东亚钳蝎毒素多肽纯化组份BmK AS-1对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠通道电流的作用[J];南京医科大学学报;2000年04期
2 谭智勇,吉永华;电压门控钠通道与背根神经元伤害性传入[J];生理科学进展;1999年03期
3 肖杭,毛霞,石云,谭智勇,赵志奇,吉永华;Modulation of BmKAS-1 and BmK1-3-2 to sodium channel in rat dorsal root ganglion neurons[J];Chinese Medical Journal;2001年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 许均华;吴英亮;罗锋;蒋达和;;蝎氯毒素结构、功能与应用研究[J];氨基酸和生物资源;2005年04期
2 赖仞,查宏光,张云;动物离子通道毒素与药物开发[J];动物学研究;2000年06期
3 金增强,姜晓钟,赵云富;三叉神经脱髓鞘与慢性神经痛[J];国外医学.口腔医学分册;2005年04期
4 龚忱;王智;;温度对拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶体躯分布的影响[J];湖南农业科学;2011年01期
5 安珊珊;汪溪洁;许鹏;孙芹;陈晓东;程洁;高蓉;肖杭;;东亚钳蝎毒素多肽对河豚毒素敏感型钠电流的作用[J];医学研究生学报;2009年06期
6 ;Two non-coding transcripts of toxins from the scorpion But-hus martensii Karsch: Evidence for the existence of NMD in scorpion venom gland cells[J];Chinese Science Bulletin;2002年01期
7 王瑞兰;梁宋平;;虎纹捕鸟蛛毒素虎纹毒素-Ⅲ对美洲蜚蠊神经细胞电压门控离子通道的影响(英文)[J];昆虫学报;2009年02期
8 华卫健,季庐娣,徐丽萍,陆茜;中国少棘蜈蚣毒对家蚕的毒性研究初报[J];江苏蚕业;2004年04期
9 朱顺义,曹志贱,李文鑫;两个东亚钳蝎毒素非编码转录本:蝎毒腺细胞存在NMD途径的证据[J];科学通报;2001年16期
10 徐仁伵,胡元元,张洪;致痫大鼠海马神经元氨基酸类物质含量变化的研究[J];临床神经病学杂志;2002年05期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵景霞;纳米氧化锌对海马神经元电生理特性的影响及对PC12细胞生物学效应的机制研究[D];南开大学;2010年
2 孟尔;电压敏感钠通道与捕鸟蛛毒素相互作用位点的研究[D];湖南师范大学;2011年
3 邢俊玲;背根节神经元超兴奋的电生理研究[D];第四军医大学;2000年
4 肖玉成;作用于电压门控钠通道的蜘蛛毒素的结构与功能研究[D];湖南师范大学;2004年
5 曹志贱;东亚钳蝎K~+通道毒素的克隆、表达及其结构与功能关系研究[D];武汉大学;2004年
6 段建红;藜芦碱在大鼠背根节神经元引起的慢波振荡和触发振荡[D];第四军医大学;2005年
7 王维玺;东亚钳蝎新型离子通道配体/调制剂的药理结合及其病理研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
8 盛继群;一种新的东亚钳蝎毒素BmTxKS4基因克隆及其功能鉴定研究[D];武汉大学;2004年
9 白占涛;实验性蝎蛰痛的行为学与细胞机制研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
10 柴志芳;新型钠通道调制剂BmK αIV的基因克隆、表达及功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 安珊珊;东亚钳蝎毒素多肽对大鼠背根神经节神经元离子通道的作用[D];南京医科大学;2009年
2 杨佳佳;三聚氰胺对大鼠海马CA1区神经元兴奋性的影响及其机制的研究[D];南开大学;2011年
3 陈健;东亚钳蝎毒素Martentoxin的分离纯化与功能研究[D];南京医科大学;2011年
4 陈玉立;龙血竭及其成分龙血素B镇痛机理的研究[D];中南民族大学;2010年
5 杨光;鞘内注射氧化槐定碱的镇痛作用及对中枢GABAA受体的影响[D];宁夏医科大学;2011年
6 金炜;GABA_B受体在神经干细胞C17.2中的分子机制及功能研究[D];华中科技大学;2011年
7 段建红;受损背根节神经元放电峰峰间期的慢波振荡[D];第四军医大学;2002年
8 陈哲明;Brugada综合征分子遗传学研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
9 杜娃;自发性癫痫大鼠脑内电压门控性钠通道α亚基mRNA的改变[D];中国医科大学;2004年
10 刘清萍;1.串联质谱在蛋白质组研究中的应用 2.敬钊缨毛蛛毒素-Ⅶ结构与功能研究[D];湖南师范大学;2004年
【二级参考文献】
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1 贾凌云,吉永华;电压门控Na~+通道亚型及其功能——新的研究热点[J];生理科学进展;1999年02期
2 肖杭,毛霞,谭智勇,石云,张建伟,程健,赵志奇,吉永华;东亚钳蝎毒素多肽BmK AS-1对大鼠皮肤痛觉的影响[J];中国药理学与毒理学杂志;2000年04期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 孙凤蓬,宋于刚,张亚历;大鼠壁细胞K~+离子通道特性的研究[J];解放军医学杂志;2005年11期
2 王如兴;李肖蓉;陈燕芬;吴小庆;来利红;蒋文平;;ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠心室肌细胞动作电位的影响[J];中国微循环;2008年05期
3 程志军;王英伟;;钠离子通道亚单位与神经性疼痛[J];上海交通大学学报(医学版);2006年03期
4 李红旗;廖大清;王儒蓉;;辣椒素对不同年龄大鼠内脏感觉神经元上辣椒素受体通道的影响[J];华西医学;2011年02期
5 王劼,刘才栋,沈馨亚,彭裕文;大鼠背根神经节内kv2.1 mRNA和kv4.2 mRNA的表达[J];解剖学研究;2004年01期
6 安珊珊;汪溪洁;许鹏;孙芹;陈晓东;程洁;高蓉;肖杭;;东亚钳蝎毒素多肽对河豚毒素敏感型钠电流的作用[J];医学研究生学报;2009年06期
7 张韶辉;张延琳;王文权;曹雪红;赵立波;王嘉陵;;体外培育牛黄镇痛作用的电生理机制[J];中国药理学通报;2008年08期
8 刘亚利;黄维;高恩泉;叶本兰;;小鼠肾近曲小管上皮细胞顶侧膜钾通道的膜片钳研究[J];第三军医大学学报;2006年01期
9 裴德安,李庚山,蒋锡嘉,许家琍,刘伟宏;关附甲素对单个心肌细胞钠通道的阻断作用[J];中国心脏起搏与心电生理杂志;1995年04期
10 陈悦;黄霞;卫琮玲;;葛根素对豚鼠乳头肌动作电位及延迟整流钾电流的影响[J];中国药学杂志;2006年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 匡方;肖玉成;梁宋平;;海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ和-Ⅳ对电压门控钠钾通道的抑制活性研究[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
2 唐立新;范双喜;文任乾;江芳;徐姗姗;邓顺美;马春杰;唐运革;;大鼠精原干细胞的分离纯化[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
3 王韶屏;王建安;骆荣华;;大鼠骨髓间充质干细胞钾通道电生理特征[A];2007年浙江省心电生理与起搏学术年会论文汇编[C];2007年
4 匡方;肖玉成;梁宋平;;海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ和-Ⅳ对电压门控钠钾通道的抑制活性研究[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
5 郑秉杰;刘耀华;赵世光;;细胞外钾离子与脑血管痉挛的关系[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
6 汪溪洁;程宏;张红;程洁;高蓉;肖杭;;铅对急性分离和培养的大鼠海马神经元延迟整流钾通道的影响[A];中国毒理学会第四届全国学术会议论文(摘要)集[C];2005年
7 匡方;肖玉成;梁宋平;;海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ和-Ⅳ抑制钠钾通道的活性研究[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
8 匡方;肖玉成;梁宋平;;海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ和-Ⅳ抑制钠钾通道的活性研究[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
9 张海林;;磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP_2)对钾离子通道的调节作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
10 张海林;;磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP_2)对钾离子通道的调节作用[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第一部分)[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;关木通对大鼠致癌性的实验研究[N];中国医药报;2003年
2 刘霞;诱导多功能干细胞让小鼠长出大鼠胰腺[N];科技日报;2011年
3 ;丹参能加快放创复合伤大鼠创面愈合[N];中国中医药报;2005年
4 ;新抗病毒抗生素17997在大鼠体内药代动力学和组织分布研究[N];中国医药报;2003年
5 郑健刚;杜元灏;石学敏;针刺能增加脑缺血大鼠脑血流量[N];中国医药报;2005年
6 ;刺五加皂甙对大鼠血管性痴呆有防治作用[N];中国中医药报;2005年
7 ;中药复方能逆转腹主动脉缩窄大鼠心肌肥大[N];中国中医药报;2005年
8 孙忻;人类首次获得克隆大鼠[N];科技日报;2003年
9 阿胜;死亡阴影下孕育生机无限[N];医药经济报;2002年
10 程源;父母吸烟会导致婴儿厌食[N];大众卫生报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 汪溪洁;东亚钳蝎毒素对神经元离子通道作用的研究[D];南京医科大学;2008年
2 张习春;脊髓痛觉可塑性的一氧化氮信号通路[D];复旦大学;2005年
3 高秀萍;β-淀粉样蛋白神经毒作用机制的研究:AβP31-35和AβP25-35对大鼠皮层及海马神经元K~+电流及细胞内Ca~(2+)水平的影响[D];山西医科大学;2004年
4 贾卫国;Ouabain对大鼠心室肌起搏通道的电生理及表达的影响[D];四川大学;2005年
5 王如兴;不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞电生理作用及对心肌和血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响[D];苏州大学;2007年
6 牛志电;铜对大鼠海马CAl区神经元A-电流和延迟整流钾电流的影响[D];中国科学技术大学;2006年
7 耿明英;伽玛刀照射对癫痫大鼠兴奋性痫性发作机制的干预[D];重庆医科大学;2007年
8 陈鹏慧;大鼠少突胶质细胞前体细胞的发育及细胞生物学特性的研究[D];第三军医大学;2008年
9 陆志科;竹叶生物活性成分提取分离及其抗菌活性研究[D];中南林学院;2004年
10 薛绍武;稀土对保卫、叶肉细胞钾通道以及气孔、蒸腾作用的影响[D];山西大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵丽萍;东亚钳蝎毒素活性多肽的分离纯化及对背根神经节神经元钠、钾离子通道的作用研究[D];南京医科大学;2005年
2 安珊珊;东亚钳蝎毒素多肽对大鼠背根神经节神经元离子通道的作用[D];南京医科大学;2009年
3 徐三华;东亚钳蝎毒素活性多肽对大鼠背根神经节神经元钠离子通道的作用研究[D];南京医科大学;2008年
4 汪溪洁;铅对大鼠海马神经元钾离子通道毒性作用的电生理研究[D];南京医科大学;2005年
5 王卫民;烟草根皮层细胞质膜上内向K~+通道的电生理特性及其调控[D];河南农业大学;2005年
6 姜涛;吗啡对大鼠外周神经动作电位和传导速度的影响[D];山东大学;2005年
7 谢金元;重组人红细胞生成素对大鼠背根神经节细胞钙通道的调节作用[D];华中科技大学;2006年
8 向芳;围产期大鼠血脂组成与乳腺炎症相关基因的表达变化研究[D];四川农业大学;2011年
9 吴芳庚;环境温度变化致大鼠小肠黏膜免疫屏障损伤的研究[D];南昌大学;2011年
10 董岩;脊髓EphB1/ephrinB1信号通路在大鼠胫骨癌痛中的作用及机制[D];复旦大学;2011年
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