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《南京中医药大学》 2011年
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健脾解毒方治疗原发性肝癌的临床和机理研究

陆原  
【摘要】:原发性肝癌(PLC)是临床最常见的恶性肿瘤之一,是我国第2位恶性肿瘤致死原因。主要治疗方法有手术、介入和中医药等。因大部分PLC患者确诊时,已属中晚期,失去手术机会,故目前治疗采用经皮肝动脉栓塞化疗术(TACE)为主。尽管TACE术可以一定程度地缩小瘤体、改善PLC预后,但对患者生存期和生活质量方面的疗效并不理想。而中医药具有独特优势,从整体进行辨证论治,扶正祛邪,标本兼顾,是治疗肝癌的有效方法。 健脾解毒方(JJP)是导师刘沈林教授基于对肝癌中医发病机制的总结,结合多年临床实践得出的经验方。由太子参、茯苓、炒白术、薏苡仁、半枝莲、莪术、地鳖虫、白花蛇舌草、山慈菇、炙甘草组成,具有健脾益气,解毒散结之功效,临床疗效确切。本研究临床部分为探索肝癌中西医优化治疗方案,实验部分为求进一步探讨该方抗肝癌的机理。 临床研究部分 目的观察JJP联合介入治疗PLC的疗效及对生存期、生活质量的改善情况 方法按照随机平行对照的方法,将66例肝癌患者随机分为对照组和治疗组2组,每组33人。对照组采用TACE治疗为主,治疗组采用TACE+健脾解毒方,疗程为3个月。疗程结束后,观察症状、证候、瘤体、血常规、肝功能等指标以及Child-pugh分级、KPS积分、安全性评价,以及随访6月和12月观察生存率。数据采用统计学处理。 结果 1.2组患者治疗前年龄、性别、病情、基线症状无统计学差别,P0.05,具有可比性。 2. TACE术联合JJP治疗可以明显改善肝癌患者的症状、证候、血细胞水平及肝 功能,与对照组比较,P0.01或P0.05,有显著差异。3.联合治疗组在Child-pugh分级、KPS积分、生存期方面均有显著改善,与对 照组比较,P0.05,有明显差异。 4.2组患者在瘤体缩小方面的比较,P0.05,差异无统计学意义。 5.联合治疗组显示出良好的安全性。 结论TACE术联合JJP治疗PLC,可减毒增效,提高生存质量,延长生存时间,从而改善肝癌患者的预后。发挥中医药优势,弥补TACE治疗远期疗效不佳的缺点,为中西医结合治疗PLC提供了一定的依据。 实验研究部分 目的探讨JJP体外抗肝癌的效应和作用机制。 方法用血清药理学方法,按低、中、高3种浓度制备JJP含药血清,分别作用于人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721细胞,并以生理盐水血清为阴性对照组,5-FU血清为阳性对照组,用光学显微镜、透射电镜观察JJP血清作用后,2种肝癌细胞形态和超微结构的变化;用MTT法检测JJP血清对2种肝癌细胞增殖的抑制率;流式细胞仪、AnnexinV/PI染色法、荧光显微镜检测JJP血清对2种肝癌细胞的凋亡作用;Transwell法检测JJP血清对2种肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响;用RT-PCR法,在mRNA水平检测JJP血清对HepG2和SMMC-7721细胞中CD44和VEGF基因表达的影响。 结果 1.光镜下,经不同浓度JJP含药血清作用,HepG2和SMMC-7721细胞形态均出现死亡或凋亡改变,增殖程度受到明显抑制,与阴性对照组相比,(P0.01),并具有浓度和时间依赖性。电镜下的超微结构显示,JJP血清作用后,肝癌细胞出现典型的凋亡表现,其中高剂量组表现更加明显。 2.JJP血清对HepG2细胞增殖的抑制率:(按低、中、高浓度排列)24h分别为20.52%,46.47%,59.45%;48h为26.47%,57.97%,67.84%,与阴性对照组相比有明显差异(P0.01),JJP血清对SMMC-7721细胞的抑制率:24h为41.7%,59.42%,70.15%;48h为49.29%,69.04%,73.04%。与阴性对照组相比有明显差异(P0.01)。其中JJP血清作用48h后,对SMMC-7721细胞的抑制率与阳性对照组5-FU血清抑制率接近。 3.JJP血清对HepG2细胞的凋亡率分别达到9.23±0.51%,19.67±2.48%,40.6±1.77%;对SMMC-7721的凋亡率分别为:9.27±0.71%,14.77±1.62%,25.67±2.37%,与阴性对照组相比有明显差异(P0.01)。荧光显微镜下,经AnnexinV/PI染色,随着JJP血清作用时间的延长渐出现早期、晚期凋亡细胞和坏死细胞的荧光染色表现。 4.JJP血清对HepG2细胞的迁移抑制率为:36.63%,42.57%,64.35%。与阴性对照组相比均(P0.01);对SMMC-7721细胞的迁移抑制率为32.46%,49.12%,58.77%,与阴性对照组相比均有明显差异(P0.01或P0.05)。JJP血清对HepG2细胞的侵袭抑制率为:23.07%,46.15%,69.23%,与阴性对照组相比有明显差异(P0.01)。JJP血清对SMMC-7721细胞的侵袭抑制率为31.25%,52.08%,64.58%,与阴性对照组相比有明显差异(P0.01或P0.05) 5.JJP血清对HepG2细胞CD44的相对光密度比值为1.68±0.15,1.63±0.27,1.39±0.53,与阴性对照组比较有明显差异(P0.01或P0.05),高剂量JJP组比值超过阳性对照组(P0.05)。JJP血清对HepG2细胞VEGF相对光密度比值为0.92±0.02,0.89±0.26,0.72±0.03,中、高剂量组与阴性对照组相比有明显差异(P0.01或P0.05)。JJP血清对SMMC-7721细胞CD44的相对光密度比值为1.81±0.06,1.78±0.04,1.69±0.38,中、高剂量组与阴性对照组相比有明显差异(P0.01或P0.05),JJP血清对SMMC-7721细胞VEGF的光密度比值为0.99±0.06,0.94±0.18,0.89±0.07,与阴性对照组相比有明显差异(P0.05或P0.01)。 结论JJP含药血清体外可以抑制肝癌细胞增殖,并诱导其凋亡,抑制肝癌细胞侵袭迁移能力。JJP含药血清抗肝癌的效应,可能与通过下调CD44和VEGF基因的表达,从而达到抑制肝癌侵袭转移及血管生成有关。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285

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