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《南京中医药大学》 2011年
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补肾方剂诱导骨髓间充质干细胞增殖分化的理论和实验研究

谭峰  
【摘要】:研究目的:本研究在中医学“肾藏精”理论指导下,结合现代干细胞生物学研究成果,分析中医学“先天之精”与干细胞的相关性,以及肾精与骨髓间充质干细胞之间的内在联系;观察补肾方剂对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响,探讨其调控骨髓间充质干细胞增殖、分化的分子机制,以期为探索“肾藏精”理论的科学内涵以及补肾方剂的临床应用提供理论和实验依据,为中医药在干细胞领域的深入研究提供新的思路。 研究方法: 1.理论研究:通过系统整理与总结中医学“精”、“先天之精”、“肾精”等理论以及现代干细胞研究的成果,采用比较分析的方法,对干细胞的“先天之精”属性以及“肾精”与间充质干细胞的相关性进行全面的分析,从干细胞层面探讨补肾法治疗肾精亏虚相关疾病的可能机理。 2.实验研究:采用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞;采用细胞形态学、细胞生长曲线、细胞周期、细胞表面标示检测相结合的方法,对培养的rBMSCs进鉴定;采用MTT法分别检测六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸—四首经典补肾方剂水提液对体外培养的rBMSCs细胞毒性及增殖的影响;采用ALP活性检测补肾方剂水提液对体外培养的rBMSCs骨向分化的影响;采用Western bloting检测经补肾方剂水提液干预后体外培养的rBMSCs BMP-2蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR检测经补肾方剂水提液干预后体外培养的rBMSCs Runx2 mRNA的表达。 研究结论: 1.理论研究:中医学理论之“先天之精”学说与干细胞之间无论来源还是功能均具有极高的相似性,而“肾精”与间充质干细胞的关系尤为密切,间充质干细胞可以看作“肾精”功能体现的主要物质基础,补肾方剂治疗肾精亏虚的效应机理可能与调控间充质干细胞增殖、分化等生物学行为有关。 2.实验研究: (1)全骨髓贴壁法分离的rBMSCs符合BMSCs的生物特性,建立的rBMSCs体外培养体系可满足实验要求。 (2)四首经典补肾方剂(六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸)水提液均可促进体外培养的rBMSCs增殖,且补肾阴(滋肾益精)方剂的作用强于补肾阳(温肾益精)方剂。 (3)四首经典补肾方剂水提液均可促进体外培养的rBMSCs向成骨细胞分化,且补肾阳(温肾益精)方剂的作用强于补肾阴(滋肾益精)方剂。 (4)四首经典补肾方剂水提液均可上调体外培养的rBMSCs中BMP-2的水平以及Runx2 mRNA的表达,而且补肾阳(温肾益精)方剂的作用强于补肾阴(滋肾益精)方剂,这与补肾方剂水提液诱导rBMSCs向成骨细胞分化的结果相一致,提示这可能是补肾方诱导rBMSCs向成骨细胞分化的作用机制。 (5)补肾阴方与补肾阳方在诱导rBMSCs增殖、分化方面表现出一定的趋向性,即补肾阴方在诱导rBMSCs增殖作用方面优于补肾阳方,而在诱导rBMSCs分化方面补肾阳方优于补肾阴方,由此提示补肾阳法与补肾阴法对rBMSCs增殖、分化作用的差异可能是其产生不同治疗效果的作用机制。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285

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【引证文献】
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【参考文献】
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7 龚建文;从P38信号通路探讨中药骨康方对去势大鼠MSCs成骨分化的机制研究[D];广州中医药大学;2011年
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9 刘洪江;骨康含药血清对骨质疏松大鼠MSCs成脂分化调控因子PPARγ的影响[D];广州中医药大学;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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8 嵇玲瑛;部位、年龄对hBMSCs活性的影响及倍半萜促hBMSCs成软骨分化的临床实验研究[D];广州中医药大学;2011年
9 李春光;骨碎补总黄酮联合淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响[D];重庆医科大学;2011年
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【同被引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【二级引证文献】
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5 陈世娟;补肾固齿清热方改善牙种植术后骨结合状况的临床疗效观察[D];湖南中医药大学;2012年
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