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《南京中医药大学》 2011年
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宁心痛颗粒干预模型兔动脉粥样硬化易损斑块的作用及机制研究

吴同启  
【摘要】:目的:1.观察宁心痛颗粒(由黄芪、川芎、葛根、毛冬青、细辛组成)对动脉粥样硬化易损斑块的稳定作用;2.探讨宁心痛颗粒稳定易损斑块的机制。 方法:42只新西兰大白兔随机分为A、B1、B2、B3和B4组,A组6只,给予普通饲料喂养。B1、B2、B3和B4组每组9只,给予高脂饲料喂养,两周后采用球囊损伤腹主动脉,第10周末于球囊损伤部位转染野生型p53基因,12周末处死,处死前48h、24h分别予两次药物(中国斑点蝰蛇毒和组胺)触发建立兔动脉粥样硬化易损斑块模型。第3周起B1、B2、B3组分别予宁心痛颗粒高剂量(宁心痛颗粒2g-kg-1d-1)、宁心痛颗粒常规剂量(宁心通颗粒lg-kg-1·d-1)、血脂康胶囊60mg·kg-1·d-1)干预,B4组作为模型组,不予药物干预。各组分别于实验开始时和处死前取空腹血检测总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,计算LDL-C/HDL-C、TG/HDL-C及TCH/HDL-C值;各组分别于实验开始时和药物触发前、药物触发后(处死前)取空腹血检测血浆纤维蛋白原(Fib)水平,并用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清超敏C反应蛋白(hs-CRP).白介素6(IL-6)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制物1(TIMP-1)、细胞间黏附分子1 (ICAM-1)、血管细胞黏附分子1 (VCAM-1)水平。各组均以普通病理观察斑块形态,测量纤维帽厚度(FCT)及内膜-中膜厚度(IMT),并计算FCT/IMT比值;透射电镜观察斑块局部的超微结构;用免疫组化(IHC)观察斑块核因子κB (NF-κB)、单核细胞趋化因子1 (MCP-1)、MMP-1、TIMP-1、ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达情况。采用蛋白印迹技术(Western Blot)检测斑块局部NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1的蛋白表达水平。采用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR)检测斑块局部核因子KB抑制蛋白(IκB)、MCP-1、MMP-1、TIMP-1、VCAM-1的mRNA表达量。采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察斑块局部平滑肌细胞凋亡情况。 结果: 1.使用新西兰大白兔,通过高脂喂养加球囊损伤,外源性p53基因转染,中国斑点蝰蛇毒(CRVV)和组胺触发,成功地建立了动脉粥样硬化易损斑块的动物模型。 2.B1组、B2组、B3组实验兔斑块IMT低于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组、B2组、B3组斑块的FCT及FCT/IMT比值均高于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组斑块IMT、FCT及FCT/IMT比值与B3组比较差异无统计学意义(P0.05);B1组、B3组FCT/IMT比值高于B2组,差异有统计学意义(P0.05)。 3.透射电镜显示B1、B2、B3、B4组实验兔斑块局部细胞超微结构无明显差异。 4.高脂饲料喂养12周后,B1、B2、B3和B4组实验兔TCH、TG、LDL-C和HDL-C水平较A组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);B1组TCH、TG、LDL-C水平低于于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B3组TCH、LDL-C、HDL-C水平低于于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组、B2组、B3组LDL-C/HDL-C、TG/HDL-C及TCH/HDL-C比值与B4组比较无明显差异(P0.05);B1组TCH、TG、LDL-C、HDL-C水平与B3组相当,差异无统计学意义(P0.05);B1组TCH水平低于B2组,差异有统计学意义(P0.05)。 5.触发前、触发后(处死前)B1、B2、B3、B4组实验兔血浆纤维蛋白原水平较入组时升高,差异有统计学意义(P0.05);B1组、B2组、B3组触发前和触发后血浆纤维蛋白原水平均稍低于B4组相同时间点纤维蛋白原水平,差异无统计学意义(P0.05);三者组间比较,差异亦无统计学意义(P0.05)。 6.触发前及触发后,B1、B2、B3、B4组实验兔血清hs-CRP、IL-6、MMP-1、TIMP-1、ICAM-1、VCAM-1水平均较基线升高,差异有统计学意义(P0.05)。药物触发后B1、B3组血清hs-CRP、IL-6、MMP-1、TIMP-1、ICAM-1、VCAM-1水平低于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1、B3组间比较,差异无统计学意义(P0.05);触发后B1组hs-CRP、IL-6、TIMP-1水平低于于B2组,差异有统计学意义(P0.05)。 7.IHC显示Bl、B2、B3、B4组实验兔斑块局部NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1、ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达水平较A组正常血管明显升高,差异有统计学意义(P0.05);B1组、B3组斑块局部NF-κB、MCP-1、MMP-1、ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达水平低于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组斑块局部TIMP-1的蛋白表达水平低于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组斑块局部NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1、ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达水平与B3组比较差异无统计学意义(P0.05);B1组斑块局部NF-κB、ICAM-1的蛋白表达水平低于B2组,差异有统计学意义(P0.05)。 8. Westem Blot显示B1、B2、B3、B4组实验兔斑块组织NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1的蛋白表达水平均高于A组,差异有统计学意义(P0.05);B1组、B2组、B3组斑块组织NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1的蛋白表达水平均低于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组斑块组织NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1的蛋白表达水平与B3组水平相当,差异无统计学意义(P0.05);B1组斑块组织NF-κB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1的蛋白表达水平低于B2组,差异有统计学意义(P0.05)。 9. Real-time PCR显示B4组实验兔斑块组织IκB、MCP-1、VCAM-1、MMP-1、TIMP-1的nRNA表达水平高于A组,差异有统计学意义(P0.05);B1组、B3组斑块组织IκB、MCP-1、MMP-1、TIMP-1的mRNA表达水平低于于B4组,差异有统计学意义(P0.05),B3组斑块组织VCAM-1的mRNA表达水平低于B4组,差异有统计学意义(P0.05),B1组斑块组织VCAM-1的mRNA表达水平与B4组比较差异无统计学意义(P0.05);B1组斑块组织IκB, MCP-1、MMP-1、TIMP-1的mRNA表达水平与B3组比较差异无统计学意义(P0.05);B1组斑块组织IκB、MMP-1的mRNA表达水平低于B2组,差异有统计学意义(P0.05)。 10. TUNEL显示B1组、B2组、B3组实验兔斑块局部平滑肌细胞凋亡率均低于B4组,差异有统计学意义(P0.05);B1组凋亡率稍低于B3组,但差异无统计学意义(P0.05)。 结论:宁心痛颗粒对模型兔动脉粥样硬化易损斑块具有一定的稳定作用。宁心痛颗粒能够通过调节脂质代谢,影响相关的细胞因子、黏附分子、基质金属蛋白酶等炎性介质表达,抑制炎症反应,抑制VSMC凋亡,从而降低AS斑块IMT,增加FCT及FCT/IMT比值,达到稳定模型兔动脉粥样硬化易损斑块的目的。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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