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《南京中医药大学》 2012年
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青藤碱联合甲氨蝶呤抑制类风湿关节炎骨破坏的作用及机制研究

丁从珠  
【摘要】:目的 探讨青藤碱(Sinomenine, SIN)联合甲氨蝶呤(Methotrexate, MTX)抑制类风湿关节炎骨破坏的作用及机制。 方法 实验一 建立Ⅱ型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型,随机分为模型组(生理盐水灌胃)、青藤碱组(正清风痛宁120mg/kg.d,灌胃)、MTX组(1mg/kg.w,腹腔注射)、联合组(正清风痛宁+MTX组,正清风痛宁120mg/kg.d和MTX1mg/kg.w),另设7只作为正常对照组。首次免疫注射第21天开始给药。采用关节评分法评估关节炎症程度;并用ELISA法分析大鼠血清中OPG、RANKL、IL-17、IL-1α、IL-6、MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达水平;大鼠关节HE染色的组织病理变化及免疫组化比较RANKL、OPN表达的变化。 实验二 从RA患者滑膜组织分离培养FLS,用不同质量浓度的SIN(1,0.1,0.01,0.001mg/ml)与MTX(1,0.1,0.01,0.001mg/ml)单独或联合干预。用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用半定量RT-PCR的方法检测FLS中NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的mRNA表达水平。 实验三 从健康人外周血中分离PBMC,用不同质量浓度的S1N(1000,100,10uM)与MTX(10uM)单独或联合干预,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖情况;用RANKL (60ng/ml)、M-CSF (20ng/ml)诱导PBMC分化成破骨细胞(OC),加入不同质量浓度的SIN与MTX单独或联合干预,第15d终止培养,ELISA法测定各加药组细胞上清液中分泌的MMP-9水平;同时细胞固定行TRAP染色,观察药物干预对于OC分化的影响;用定量RT-PCR的方法检测PBMC中破骨细胞分化转录因子NFATc1mRNA的表达水平。 结果 实验一 1.造模后,大鼠关节炎肿胀程度在第21d最为明显,然后逐渐消退,在第35d左右会出现第2个炎症高峰。SIN组、MTX组和联合组均可减轻关节肿胀,与造模组比较,关节炎指数评分在第46d均有明显下降(P0.05)。 2.与模型组比较,MTX组、联合组可明显抑制大鼠血清IL-1α的表达水平(P0.05),IL-6表达水平也有下降,但差异无统计学意义(P0.05);与MTX组比较,联合组IL-1α、IL-17水平显著降低(P0.05)。 3.与模型组比较,SIN组、联合组都可明显抑制血清MMP-3和MMP-13的产生,MTX组MMP-13水平降低,差异均有统计学意义(P0.05);与MTX组相比,联合组血清MMP-3的表达水平下降(P0.05)。 4.与模型组比较,SIN组、MTX组和联合组外周血OPG水平均明显升高,MTX组可降低血清RANKL的表达水平,三组OPG/RANKL的比值显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与MTX组相比,联合组OPG/RANKL比值升高(P0.05)。 5.与正常组比较,模型组炎性组织侵润关节腔隙,使得腔隙变窄。SIN组、MTX组和联合组均能改善炎性细胞的侵润,联合组能更有效抑制CIA大鼠滑膜关节炎症与组织破坏。 6.与正常组比较,模型组滑膜组织OPN、RANKL蛋白表达显著增高(P0.05);与模型组比较,联合组、MTX组、SIN组均能降低OPN、RANKL蛋白的表达(P0.05);与MTX组相比,联合组OPN、RANKL蛋白的表达明显下降(P0.05)。 实验二 1.各不同质量浓度药物组对RA FLS的增殖均有显著的抑制作用(P0.05);但在0.001mg/ml至1mg/ml的浓度范围内,同种药物干预组(SIN单用、MTX单用、SIN与MTX联合)的抑制作用与药物浓度并无明显正相关性;SIN0.1mg/ml+MTX0.1mg/ml组较其他非联合用药组对RAFLS的抑制作用显著增强(P0.05)。 2.流式细胞仪检测各组凋亡细胞百分率结果显示:空白对照组25.3%,MTX组(MTX0.1mg/ml)28.4%,SIN组(SIN0.1mg/ml)32.3%,联合组(MTX0.1mg/ml+SIN0.1mg/ml)34.7%。各加药组凋亡细胞百分率均高于空白对照组,但SIN组和联合组明显诱导RAFLS凋亡(P0.05);与MTX组比较,联合组凋亡细胞百分率有明显增多(P0.05)。 3.RT-PCR结果显示:与空白组比较,MTX组(MTX0.1mg/ml)、SIN组(SIN0.1mg/ml)、联合组(MTX0.1mg/ml+SIN0.1mg/ml) RANKL电泳条带均弱;联合组OPG电泳条带较空白组强。联合组能够有效下调RA FLS的RANKL mRNA表达,并上调其OPG mRNA表达(P0.05)。 实验三 1.加药组对PBMC增殖的影响,MTT结果显示各浓度组药物(包括联合给药),在不同药物组处理细胞48h后,并未影响细胞的增殖(P0.05)。 2.加药组对OC的分化均有不同程度的抑制作用,ELISA结果显示,高浓度SIN与MTX(SIN1000uM+MTX10uM)合用时,能够明显抑制MMP-9的分泌,其他给药组分泌的MMP-9未显示出差异;该浓度的药物处理诱导分化的PBMC, TRAP染色后显微镜下观察分化成熟的OC数目,结果显示联合组(SIN1000uM+MTX10uM)与对照组和单独用药组比较OC数目显著减少,差异有统计学意义(P0.05)。 3.RT-PCR结果显示:与对照组及MTX组比较,给药24h后,SIN联合MTX(SIN1000uM+MTX10uM)能够有效下调PBMC中的NFATcl mRNA表达(P0.05)。 结论 实验一 SIN与MTX联合给药对CIA大鼠关节肿胀有明显的防治效应,能够较好地控制炎症发生发展,可能与其对血清IL-1、IL-6、IL-17等抑制作用有关;协同提高外周血OPG、OPG/RANKL比值、抑制MMP-3和MMP-13的产生;抑制关节血管翳的形成和炎性因子的侵润,下调滑膜组织RANKL及OPN的表达水平。提示SIN联合MTX对类风湿关节炎的软骨和骨有协同骨保护作用。 实验二 本实验表明SIN与MTX联用对RAFLS具有协同抑制效应,并可能由此实现对RAFLS介导的骨破坏的治疗作用。 实验三 本实验表明SIN与MTX联用通过抑制外周血中单核细胞NFATc1基因的表达,减少MMP-9分泌,从而抑制OC的分化,而且该抑制作用有药物浓度依赖关系。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R593.22

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1 景丽娟;王美美;;RANKL/OPG系统与大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎发病的关系及~(99)锝-亚甲基二膦酸盐的干预作用[J];中国药科大学学报;2011年03期
2 许文亚;金实;;金实治疗类风湿关节炎经验[J];辽宁中医杂志;2010年06期
3 林小军;蔡小燕;叶静华;;青藤碱治疗类风湿关节炎临床观察[J];湖南中医药大学学报;2009年08期
4 李萍;王霖;王文杰;;甲氨蝶呤对破骨细胞的作用及机制研究[J];药学学报;2008年10期
5 娄玉钤;;风湿病“虚、邪、瘀”理论浅析[J];中医杂志;2008年07期
6 马洪玉;霍永利;马小顺;;针药综合疗法辨治类风湿性关节炎临床观察[J];中医药临床杂志;2008年03期
7 李萍;刘力;王文杰;;类风湿性关节炎中破骨细胞基质金属蛋白酶9的研究进展[J];医学综述;2008年08期
8 陈光星;王培训;刘清平;童娟;沈晓燕;黄清春;陈纪藩;;青藤碱对胶原诱导型关节炎免疫抑制作用的机制研究[J];现代免疫学;2008年02期
9 刘芳;;中药熏洗治疗与护理类风湿关节炎[J];湖北中医杂志;2007年10期
10 董宏生;胡荫奇;于孟学;王玉明;李莉;董占斌;;甲氨蝶呤对类风湿关节炎骨破坏和修复的实验研究[J];北京医学;2007年07期
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1 周峰;;植物蛋白相互作用的研究方法[J];贵州农业科学;2014年05期
2 张明德;刘汝怀;叶锦华;;基于稀土有机—无机杂化纳米发光材料的制备分析[J];化工管理;2013年12期
3 汪鲁;宋桂兰;;荧光素-曙红Y能量转移荧光猝灭法测定微量白蛋白研究[J];分析科学学报;2012年02期
4 王雅静;张征;肖林久;谢颖;;828nm近红外光激发下Ho~(3+)掺杂NaYF_4的上转换发光性质[J];过程工程学报;2012年01期
5 吴勇;;软化学合成方法在稀土材料中的应用[J];太原城市职业技术学院学报;2011年12期
6 高源;乔光明;李娜;禚林海;唐波;;光敏剂在癌症诊断和治疗中的研究新进展[J];分析化学;2011年12期
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8 林海凤;王海波;印琰;;PDP用YGB红色荧光粉的制备技术研究现状[J];化工新型材料;2010年11期
9 韩朋德;黄啸谷;张乐;王丽熙;张其土;;轻稀土掺杂对SmBO_3相组成及反射率的影响[J];南京工业大学学报(自然科学版);2010年06期
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1 贺芸芬,李志国,朱基千;掺稀土氟化物玻璃上转换发光材料发展概况[J];硅酸盐通报;2004年03期
2 王敏,王玉军,朱慎林;制备纳米BaSO_4的W/O微乳液体系组成及稳定性[J];化工学报;2003年10期
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5 徐胜前;徐建华;;类风湿关节炎骨破坏的机制和治疗措施研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年18期
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8 董志锋;;类风湿关节炎骨破坏研究进展[J];世界最新医学信息文摘;2018年18期
9 吕伟;厉小梅;;类风湿关节炎骨代谢研究进展[J];中国骨质疏松杂志;2012年06期
10 董宏生;胡荫奇;于孟学;王玉明;李莉;董占斌;;甲氨蝶呤对类风湿关节炎骨破坏和修复的实验研究[J];北京医学;2007年07期
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2 王雪彤;艾拉莫德对类风湿关节炎患者骨代谢作用的研究[D];吉林大学;2017年
3 吕兴华;青藤碱上调microRNA-124对小鼠肾缺血再灌注损伤保护效应的研究[D];兰州大学;2018年
4 刘艳;青藤碱和甲氨蝶呤预防类风湿关节炎的实验研究[D];大连医科大学;2005年
5 张英丰;微透析法进行青藤碱贴剂透皮特性及药物动力学的研究[D];广州中医药大学;2006年
6 程维明;青风藤化学成分及青藤碱大鼠体内代谢研究[D];沈阳药科大学;2005年
7 张立;青藤碱对实验性糖尿病大鼠肾脏保护作用机制的研究[D];吉林大学;2007年
8 杨惠琴;青藤碱关节腔注射对骨关节炎兔细胞因子及软骨结构的影响[D];湖北中医学院;2007年
9 曾彦英;青藤碱治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的药效学研究及机制探讨[D];南京医科大学;2007年
10 赵毅;青藤碱对RA患者树突状细胞免疫功能的影响及机制研究[D];第一军医大学;2007年
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1 李成;正清风痛宁联合甲氨蝶呤干预类风湿关节炎骨破坏的机制研究[D];南京中医药大学;2011年
2 张梦颖;青藤碱联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎的疗效及其作用机制的探究[D];南京中医药大学;2013年
3 孙玥;青藤碱联合甲氨蝶呤对胶原诱导关节炎大鼠关节损害及体外破骨细胞分化的影响[D];南京中医药大学;2012年
4 任晓斌;云南白药对实验性类风湿关节炎与牙周炎相关性干预研究[D];昆明医学院;2011年
5 魏勇;骨痨愈康丸联合免疫抑制剂治疗类风湿关节炎骨破坏的临床研究[D];甘肃中医药大学;2017年
6 赵帅;类风湿关节炎患者血清中破骨细胞相关受体的临床意义[D];中国医科大学;2010年
7 张琳英;和痹方联合甲氨蝶呤治疗早期类风湿关节炎的疗效观察[D];山东中医药大学;2015年
8 李吉隆;脂肪细胞Rankl表达对破骨细胞发育和骨稳态的调节作用[D];天津医科大学;2017年
9 丁淼淼;RANKL在类风湿关节炎与骨关节炎滑液中与浓度变化分析[D];辽宁中医药大学;2010年
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