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《南京中医药大学》 2015年
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黄芪甲苷干预人膝骨关节炎退变关节软骨细胞的效应及机制研究

汤晓晨  
【摘要】:目的:研究黄芪中的有效组成黄芪甲苷对KOA退变关节内炎症因子IL-1β及TGF-β1、 VEGF、Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因的mRNA表达影响。方法:提取确诊为KOA临床KELLGREN LAWRENCE分级标准Ⅲ-Ⅳ级患者,全膝置换术后的退变膝关节软骨,进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后,取第3代细胞,通过苏木素-伊红染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞比对,并进行VEGF、TGF-β1Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫荧光染色,观察软骨细胞退变情况后,分为6组(A组:软骨细胞+DMEM对照组;B组:软骨细胞加入25mmol/LAS;C组:软骨细胞加入50mmol/LAS;D组:软骨细胞加入75mmol/LAS;E组:软骨细胞加入100mmol/LAS;F组:软骨细胞加入500mmoI/LAS),取4h、8h、24h、48h、72h这5个时间点,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组退变软骨内软骨细胞VEGF、TGF-β1、Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因的mRNA表达情况。结果:在一定浓度、一定时间段内黄芪甲苷能提高软骨细胞TGF-β1、VEGF、Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因mRNA的表达,减少软骨细胞炎症因子IL-1β的表达,达到保护软骨,延缓关节软骨退变的作用,通过各不同时段不同浓度退变软骨细胞的甲苯胺蓝染色及不同时段、不同浓度退变软骨细胞的TGF-β1、VEGF、Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫荧光染色发现,在一定浓度、一定时间段内黄芪甲苷下退变软骨细胞的增殖及老化的情况明显减缓,而当黄芪甲苷浓度太高时,则进一步加速了退变软骨细胞的老化。结论:本论文中的一系列的实验证明,黄芪的主要组份黄芪甲苷能有效防治KOA,并对黄芪甲苷的作用机制提供了充分的理论依据,为临床推广使用提供了坚实的理论基础。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R285

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