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《南京中医药大学》 2010年
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胃安宁合剂对人胃癌裸鼠原位移植瘤抑制作用的活体成像观察及其分子机制的研究

陆建伟  
【摘要】: 目的 1.以红色荧光标记的人胃癌细胞裸鼠胃原位移植肿瘤模型为实验对象,探讨健脾活血解毒方(胃安宁合剂)对胃癌的抑瘤效应和对裸鼠的毒性。 2.探讨胃安宁合剂对胃癌组织环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)、端粒酶活性表达和细胞凋亡的影响,分析胃安宁合剂抗瘤的可能机制。 方法 1.用红色荧光蛋白逆转录病毒转染载体PT67-pLNCX-DsRed-2转染人胃癌NUGC-4细胞,将DsRed标记的胃癌NUGC-4细胞接种到裸鼠胃壁上,建立裸鼠原位癌模型。将荷瘤裸鼠随机分成:G1,空白对照组;G2,5-氟尿嘧啶(5-FU)阳性药物组;G3:胃安宁合剂大剂量组;G4,胃安宁合剂小剂量组,共4组,每组8只裸鼠。在原位移植0、7、14、28天时,分别用荧光影像系统测量各组肿瘤体积。在第7天开始治疗后的4周内,观察各组裸鼠平均体重变化。第35天,进行开放荧光影像检查,观察原发肿瘤和各部位的转移状况,随后切除原发肿瘤,称重。 2.将肿瘤组织切片后,用免疫组织化学SP法,检测肿瘤组织中的COX-2蛋白表达水平和端粒酶活性;用TUNEL法检测细胞凋亡率。 结果 1.在原位移植14天时,5-FU阳性药物组和胃安宁合剂大剂量组的肿瘤体积均显著小于空白对照组(p=0.0146,0.0080);28天时取得了同样的结果(p=0.0035,0.0001)。胃安宁合剂小剂量组的肿瘤体积与空白对照组没有差异。胃安宁合剂大剂量组和5-FU阳性药物组的原发肿瘤重量显著低于空白对照组(p=0.012,0.016)。胃安宁合剂小剂量组的原发肿瘤重量与空白对照组无差异。胃安宁合剂大剂量组和5-FU阳性药物组的淋巴结、脾脏、肝脏转移数以及转移灶总数少于空白对照组,但无统计学差异。胃安宁合剂小剂量组与空白对照组相似。开始治疗后的4周内,各组裸鼠平均体重变化无显著性差异,说明各组都没有明显的药物毒性。 2.空白对照组的COX-2蛋白阳性表达率(87.5%)均显著高于胃安宁合剂大剂量(25.0%)和小剂量组(25.0%)(p=0.041)。5-FU阳性药物组COX-2蛋白阳性表达率(62.5%)低于空白对照组,但无统计学差异(p=0.569)。 3.胃安宁合剂大剂量组端粒酶阳性表达率(12.5%)低于空白对照组(100.0%)(p=0.001),同样显著低于5-FU阳性药物组(87.5%)(p=0.01);胃安宁合剂小剂量组端粒酶阳性表达率(50.0%)也低于空白对照组,但无统计学差异(p=0.077)。 4.胃安宁合剂大剂量组癌细胞凋亡率(0.64±0.05%)显著高于空白对照组(0.53±0.09%)和5-FU阳性药物组(0.50±0.09%)(p=0.007;p=0.001),胃安宁合剂小剂量组(0.52±0.05%)与空白对照组无差异(p=0.742)。 结论 1.胃安宁合剂对胃癌原位移植瘤有明显的抑瘤效果,对肿瘤转移有一定抑制作用,效果与5-FU相当,抑瘤效果显示出剂量效应,高剂量组的抑瘤效应高于低剂量组。胃安宁合剂没有明显的毒副作用。 2.胃安宁合剂具有下调胃癌细胞的COX-2蛋白表达水平和端粒酶活性、诱导细胞凋亡的功效,可能是其发挥抑瘤效应的机制之一。
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
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