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《南京中医药大学》 2010年
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JNK通路在急性胰腺炎相关性肺损伤的作用机制及丹参酮ⅡA的干预作用研究

刘明东  
【摘要】: 研究背景 急性胰腺炎是以胰腺间质水肿、出血、腺泡细胞空泡变性、坏死及炎症细胞浸润为病理特征、病变程度不一、结局难以预料的急性炎症性疾病。急性胰腺炎常伴有全身炎症反应,约20%发展为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP),其病死率可高达30%-50%。随着国人生活习惯和饮食结构的变化,我国急性胰腺炎(包括重症胰腺炎)的发病呈现增高的趋势。因此,SAP是目前我国常见的、严重威胁人类健康的重大疾病。 急性胰腺炎相关性肺损伤(acute pancreatitis-associated lung Injury, APALI)是急性重症胰腺炎最早出现、最常见、也是最为严重的全身并发症。急性胰腺炎相关性肺损伤发病机制复杂,近年来很多实验性研究集中在炎性细胞和炎性介质激活途径上,一般认为肺损伤是全身炎症反应在肺部的局部表现,而肺脏由于其组织特异性易于发生炎性损伤。积累的大量证据表明胰腺实质中活化的单核巨噬细胞、多核粒细胞释放的TNF-α、LI-1和IL-6等多种促炎细胞因子不仅有助于启动急性胰腺炎局部炎症的形成和发展,而且也是导致包括肺损伤在内全身炎症反应的重要细胞因子,促炎因子的过表达不仅加重了急性胰腺炎的损伤程度,同时也加重了胰腺炎相关性肺损伤的的严重程度。所以降低重症胰腺炎肺组织中炎症因子的水平一直是人们研究如何治疗急性胰腺炎相关性肺损伤的方向。大量的动物实验证明,降低全身或肺组织中炎性细胞因子的水平对急性胰腺炎相关性肺损伤具有治疗作用。但是在急性胰腺炎相关性肺损伤的发病过程中引起肺组织中炎性细胞因子水平增加的原因和机制目前尚不清楚,只有在发病机制上找到原因才能给我们对急性胰腺炎相关性肺损伤的治疗带来理论指导,从而大大降低急性重症胰腺炎的死亡率。 最近,JNK信号通路在急性胰腺炎发病中所起的作用越来越受到人们的关注。研究显示,在急性胰腺炎的动物模型中,JNK信号通路被激活,JNK信号通路的激活与炎症因子密切相关,JNK信号通路被激活是胰腺损伤的早期事件,运用JNK通路特异性阻断剂SP600125,可以通过抑制JNK信号通路的激活来下调TNF-α、ICAM-1、IL-1β等促炎症因子的表达,明显减轻胰腺的病理损害,对急性胰腺炎具有治疗作用。由此可见JNK信号通路在急性胰腺炎的发病过程中起着重要的作用。同时人们发现JNK信号通路的激活在肺损伤的发病过程中起着重要的作用,体外动物实验表明,JNK信号通路的激活在镍、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤中起着重要的作用,而且应用特异性JNK信号通路阻断剂对肺损伤的治疗,特别是脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(一种被认为与急性胰腺炎相关性肺损伤有相同的发病途径)的治疗均取得了一定的效果。但到目前为止,JNK信号通路在急性胰腺炎相关性肺损伤中的作用机制尚不清楚。 本实验分为两个部分:第一部分JNK通路在急性胰腺炎相关性肺损伤的作用及其机制;第二部分:丹参酮ⅡA对急症胰腺炎相关性肺损伤的干预作用。 第一部分:JNK通路在急性胰腺炎相关性肺损伤的作用及其机制 目的 本研究旨在观察JNK信号通路在牛磺胆酸钠诱导的大鼠急性出血坏死性胰腺炎肺组织中的激活情况,并探讨JNK信号通路激活与肺组织损伤程度的相关性;同时应用特异性JNK通路阻断剂SP600125,进一步证实JNK信号通路激活在急性胰腺炎相关性肺损伤发病过程中所起的作用。 方法 SD大鼠72只,分为3组,每组24只。S组:假手术对照组,24只大鼠,开腹后翻动大鼠十二指肠并轻触胰腺数次,缝合腹部;SAP组:以1ml/kg的剂量逆行胰胆管注射灭菌5%牛磺胆酸钠,诱导大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型,这种模型类似于人类的重症胰腺炎;SP600125干预组:在急性出血坏死性胰腺炎大鼠模型诱导前30分钟,以15mg/kg的剂量通过腹腔注射SP600125;每组分3小时、6小时、12小时和24小时4个时间点,各时间点大鼠数目为6只。按计划于各时间点处死大鼠,收集血清及胰腺和肺组织。肺水肿严重程度以肺组织湿干重比表示;以碘一淀粉比色法测定血清淀粉酶,ELISA方法测定肺组织TNF-α水平和工L-1β水平,H.E染色用于胰腺和肺组织损伤的病理学评价,采用分光光度计测定肺组织中髓过氧化酶(MPO)、免疫组化方法测定肺组织中ICAM-1表达,用Westernblot方法对肺组织中JNK和PJNK进行蛋白定量。 结果 假手术对照组3hr、6hr、12hr、24hr血清淀粉酶分别为501±85、512±91、518±94和532±86,胰腺病理损伤评分为0;肺脏病理损伤评分为0,肺湿干重比为2.29±0.10、2.22±0.23、2.17±0.11和2.31±0.13;肺脏MPO活性为1.33±0.56、1.56±0.43、1.51±0.23和1.47±0.48;肺组织IL-1β含量为80.3±21.2、92.3±23.5、87.3±19.4和89.7±22.1;肺组织TNF-α含量为70.6±21.2、67.6±19.8、68.4±19.5和74.5±22.6;肺组织ICAM-1免疫组化阳性积分S组0.11±0.01、0.17±0.02、0.14±0.02和0.16±0.09;PJNK相对光密度值为0.65±0.12。SAP组3hr、6hr、12hr、24hr血清淀粉酶分别为2506±215、3701±264、4101±411和3212±295;胰腺病理损伤评分8.24±0.63、10.65±1.02、14.00±0.96和14.09±0.75;肺脏病理损伤评分为3.0±0.4、4.7±0.7、7.5±0.3和6.5±0.7;肺湿干重比为3.52±0.42、3.96±0.15、4.53±0.08和4.26±0.12;肺脏MPO活性为5.64±0.76、6.44±0.77、7.19±0.83和7.36±0.71;肺组织IL-1β含量211.2±19.3、315.4±34.2、399.2±43.2和353.4±38.3;肺组织TNF-α含量为348.5±42.8、433.5±63.4、394.3±56.3和365.3±39.9;肺组织ICAM-1免疫组化阳性积分为0.8±0.09、104±0.11、1.44±0.12和1.22±0.13;PJNK相对光密度值为1.03±0.22、1.24±0.17、1.38±0.21、1.28±0.24。与假手术对照组相比,SAP组在各个时间点的血清淀粉酶、胰腺病理损伤评分和肺脏病理评分均显著增高(P0.05),我们成功的建立了重症胰腺炎相关性肺损伤的动物模型,SAP组个时间点的肺湿干重比、MPO活性、IL-1β含量、TNF-α含量、ICAM-1表达均明显增高,JNK蛋白总量无变化,但各时间点的PJNK蛋白均显著高于假手术对照组(P0.05)。应用特异性JNK信号通路阻断剂SP600125后,检测肺组织3hr、6hr、12hr和24hr肺脏病理损伤评分为2.1±0.3、3.2±0.2、6.0±0.7和4.0±0.3;肺湿干重比为SP600125组3.08±0.09、3.54±0.22、3.35±0.16和3.01±0.38;肺脏MPO活性为3.36±0.36、4.27±0.52、5.16±0.26和5.46±0.61(单位:u/g);肺组织IL-1β含量为154.3±11.2、221.4±21.5、289.4±23.4和267.7±15.1(单位:pg/mg)肺组织TNF-α含量为243.8±32.3、317.6±22.8、272.3±20.5和225.5±32.6(单位:pg/mg);肺组织ICAM-1免疫组化阳性积分为0.59±0.18、0.77±0.20、0.84±0.23、0.93±0.31;PJNK相对光密度值为0.69±0.14、0.58±0.22、0.85±0.17、0.18±0.05。与SAP组相比,SP600125组各个时间点的肺湿干重比、MPO活性、IL-1β含量、TNF-α含量、ICAM-1表达均明显降低,JNK蛋白无明显变化,但PJNK蛋白显著降低,同时肺脏病理损伤评分明显改善(P0.05)。通过相关性比较我们发现,肺组织PJNK表达与肺病理损伤评分存在显著相关性(P0.05)。 结论: 1、利用5%牛磺胆酸钠逆行大鼠胰胆管注射可建立良好的APALI动物模型,为研究APALI的机制及探讨防治策略提供了试验平台。 2、JNK通路激活是重症胰腺炎相关性肺损伤发病的早期事件,其激活可能参与了APALI的发生和发展。 3、应用JNK通路阻断剂对急性胰腺炎相关性肺损伤有治疗作用, 第二部分:丹参酮ⅡA对急症胰腺炎相关性肺损伤的治疗作用 目的 评价传统中药丹参酮的有效单体丹参酮ⅡA对大鼠急性胰腺炎相关性肺损伤是否具有治疗作用,并初步探讨其治疗机理。 方法 SD大鼠72分为3组,每组24只。S组:假手术对照组,24只大鼠,开腹后翻动大鼠十二指肠并轻触胰腺数次,缝合腹部;SAP组:以lml/kg的剂量逆行胰胆管注射灭菌5%牛磺胆酸钠,诱导大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型,这种模型类似于人类的重症胰腺炎;丹参酮ⅡA组:在急性出血坏死性胰腺炎大鼠模型诱导前30分钟,以20mg/kg的剂量通过腹腔注射丹参酮ⅡA。每组分3小时、6小时、12小时和24小时4个时间点,各时间点大鼠数目为6只。按计划于各时间点处死大鼠,收集血清及胰腺和肺组织。肺水肿严重程度以肺组织湿干重比表示;以碘一淀粉比色法测定血清淀粉酶,ELISA方法测定肺组织TNF-α水平和IL-1β水平,H.E染色用于胰腺和肺组织损伤的病理学评价,采用分光光度计测定肺组织中髓过氧化酶(MPO)、免疫组化方法测定肺组织中ICAM-1表达,用Westernblot方法对肺组织中JNK和PJNK进行蛋白定量。 结果 S组肺湿干重比为、2.12±0.23、2.15±0.11和2.33±0.23;肺脏MPO活性为1.23±0.26、1.66±0.33、1.54±0.21和1.42±0.28;肺组织IL-1β含量为82.3±11.2、95.3±21.5、82.3±18.4和92.7±21.1;肺组织TNF-α含量为72.6±11.2、69.6±13.8、69.4±12.5和77.5±21.6;肺组织ICAM-1免疫组化阳性积分S组0.11±0.01、0.17±0.02、0.14±0.02和0.16±0.09;SAP组肺脏病理损伤评分为3.1±0.3、4.6±0.6、7.6±0.3和6.6±0.7;肺湿干重比为3.62±0.43、3.98±0.35、4.54±0.28和4.27±0.12;肺脏MPO活性为5.66±0.66、6.47±0.73、7.21±0.84和7.41±0.72;肺组织IL-1β含量212.2±18.3、319.4±32.2、402.2±41.2和357.4±34.3;肺组织TNF-α含量为351.5±41.8、443.5±53.4、397.3±51.3和365.3±37.9;肺组织ICAM-I免疫组化阳性积分为0.81±0.09、1.14±0.11、1.45±0.12和1.26±0.13。应用丹参酮ⅡA干预后,我们检测肺组织中3hr、6hr、12hr和24hr时间点各项指标的结果分别为:肺湿干重比为3.17±0.29、3.24±0.22、3.49±0.26和3.21±0.38;肺组织MPO活性为4.03±0.39、4.75±0.55、5.66±1.26和5.45±0.719(单位:u/g);肺组织IL-1β含量为174.3±15.2、211.4±17.5、297.7±21.4和277.9±15.6(单位:pg/mg);肺组织TNF-α含量为253.8±27.3、337.6±22.3、312.3±22.5和311.5±32.6(单位:pg/mg);肺组织ICAM-1免疫组化阳性积分为0.63±0.15、0.82±0.19、1.01±0.23和0.96±0.31;肺脏病理损伤评分为2.2±0.3、3.6±0.2、6.3±0.7和5.1±0.3;PJNK相对光密度值为1.15±0.08、1.05±0.23、1.34±0.18、0.74±0.16。与SAP组相比,PJNK蛋白显著减少(P0.05),肺组织湿干重比、肺组织中MPO活性、细胞因子IL-1β和TNF-α的含量、肺组织中ICAM-1的表达均显著性减少(P0.05),同时肺脏病理损伤评分显著改善(P0.05)。 结论 1、丹参酮ⅡA对实验动物的APALI具有治疗作用 2、抑制JNK信号通路可能是丹参酮ⅡA治疗作用的重要机制
【学位授予单位】:南京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R576;R285

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【引证文献】
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4 郑育聪;;SPIO标记兔骨髓间质干细胞急性胰腺炎家兔体内移植的活体示踪研究[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年
5 周兵;张齐放;;一例急性胰腺炎儿童行ERCP术的护理体会[A];中华护理学会全国儿科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2009年
6 吴承智;高晖;何亦工;;89例急性胰腺炎诊断治疗的体会[A];2000年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2000年
7 李玲;;急性胰腺炎护理[A];全国神经内外科专科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2004年
8 周蒨;陈焱;;妊娠合并急性胰腺炎3例[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
9 姜莉芸;耿嘉蔚;;中西医结合治疗急性胰腺炎34例临床观察[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
10 苏勇泉;;急性胰腺炎发病早期的CT诊断[A];第十三届全国临床医学影像学术会议论文汇编[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 崔乃强;发生急性胰腺炎的原因[N];农村医药报(汉);2004年
2 杨莹丹;暴食暴饮与急性胰腺炎[N];民族医药报;2006年
3 周芳;“管住嘴”预防急性胰腺炎[N];吉林日报;2007年
4 常山;节假日当防急性胰腺炎[N];中国中医药报;2006年
5 魏开敏;暴饮暴食当心急性胰腺炎[N];中国中医药报;2008年
6 北京天坛医院 朱丽丽;多种因素诱发急性胰腺炎[N];保健时报;2008年
7 河北医科大学第二医院消化科 姜慧卿;暴饮暴食易患急性胰腺炎[N];健康报;2010年
8 付唆林;春节聚餐谨防急性胰腺炎[N];家庭医生报;2007年
9 姜诚;酗酒者易遭遇急性胰腺炎[N];大众卫生报;2007年
10 龚经文;急性胰腺炎的九大病因[N];家庭医生报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘明东;JNK通路在急性胰腺炎相关性肺损伤的作用机制及丹参酮ⅡA的干预作用研究[D];南京中医药大学;2010年
2 张馨木;重组人Elafin对实验性大鼠急性胰腺炎作用的研究[D];吉林大学;2007年
3 刘洪斌;急性出血坏死性胰腺炎肺损伤发病机制及中药治疗的实验研究[D];天津医科大学;2004年
4 徐浩铜;急性胰腺炎伴胰周积液向胸腔引流通道的影像解剖学研究[D];第三军医大学;2012年
5 赵佳正;P物质和硫化氢在评价急性胰腺炎严重程度中的作用[D];中南大学;2012年
6 茹永新;红景天对博莱霉素诱导的大鼠肺损伤干预作用实验研究[D];天津中医学院;2004年
7 申翼;基质金属蛋白酶-9与体外循环肺损伤的研究[D];第二军医大学;2005年
8 杨玉花;甲醛吸入染毒致大鼠肺损伤的蛋白质组学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
9 董春山;异丙酚对机械通气肺损伤影响的动物实验研究[D];新疆医科大学;2006年
10 李永文;急性胰腺炎患者血清中miR-216a的表达及其临床意义的研究[D];中南大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 栾正刚;急性胰腺炎肺损伤中转录调节因子作用的实验研究[D];中国医科大学;2003年
2 熊玉宝;MIP-2在大鼠急性胰腺炎肺损伤发病机制中的作用[D];苏州大学;2004年
3 梁勇;巨嗜细胞移动抑制因子(MIF)在大鼠急性胰腺炎发病机制中的作用[D];四川大学;2004年
4 王蒙;奥曲肽对急性坏死性胰腺炎多器官损伤保护机制研究[D];吉林大学;2005年
5 崔玉顺;延边地区603例急性胰腺炎病因及预后危险因素的调查分析[D];延边大学;2010年
6 江志俊;急性胰腺炎病情严重程度与预后的早期评估指标探讨[D];福建医科大学;2010年
7 刘尧;胰蛋白酶原激活肽与高迁徙率族蛋白1在急性胰腺炎大鼠模型中的表达及意义[D];遵义医学院;2010年
8 尹朝;BISAP对急性胰腺炎预后的评估价值[D];山东大学;2010年
9 郭洁;三种评分标准对急性胰腺炎病情严重程度及预后评估的比较[D];福建医科大学;2011年
10 程勇;大鼠急性胰腺炎细胞凋亡异常及Fas/FasL系统表达的研究[D];武汉大学;2004年
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