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《南京师范大学》 2014年
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基于aptamer-光子晶体微球液相芯片技术检测农产品中多种真菌毒素的研究

孙越  
【摘要】:真菌毒素是粮食等农产品中常见的污染物,而且农产品中常常同时存在多种真菌毒素,这对人类健康已造成严重威胁。目前,国内外关于真菌毒素的检测方法较多,但它们往往存在工作量大、成本高,试剂损耗多等不足。本论文选取了具有代表性的真菌毒素(赭曲霉毒素A和伏马毒素B1)作为检测对象,利用三维光子晶体微球作为液相芯片载体,基于核酸适配体识别技术和荧光分析技术建立一种高通量、高灵敏度、低成本并可同时检测多种真菌毒素的新方法。具体开展的工作如下: (一)利用实验室自制微流控装置,制备出尺寸均一、大小可控的二氧化硅光子晶体微球,利用光纤光谱仪测量不同种微球的反射峰位置,实现微球编码。试验对微球表面的功能化进行了研究,以增强其与生物分子的结合能力,并且使功能化后微球的荧光背景达到最低,减小误差,使有利于下一步的检测研究。 (二)以光子晶体微球为液相芯片载体,基于核酸适配体技术和荧光分析技术建立了农产品中的赭曲霉毒素A(OTA)的检测方法。通过对试验反应条件的优化,最终确定OTA-aptamer序列浓度为400nmol/L,其荧光标记互补序列浓度为500nmol/L,杂交条件为37℃下反应2h,OTA结合反应条件为37℃下反应1h。利用最佳反应条件,制作出OTA的单重检测标准曲线,线性范围为1-0.001ng/mL,线性方程为y=992.61+224.35x,R2=0.994。特异性试验结果显示,方法特异性强,与黄曲霉毒素B1(AFB1)、伏马毒素B1(FB1)并无明显交叉反应。最后在三种不同农产品中添加不同浓度的OTA进行回收率测定,其回收率分别为:大米73.73±2.39%~106.90±5.37%、玉米90.67±5.27%~125.17±2.31%、小麦87.91±5.26%~119.55±7.82%。 (三)在研究(二)的基础上,建立了农产品中的两种毒素(OTA、FB1)的同时检测方法。通过将微球表面包被不同的毒素-核酸适配体序列,并使其与相应荧光标记互补序列杂交,形成微球-适配体-互补链复合物,然后将其同时置于混合样品中进行两种毒素的检测。最终确定OTA、FB1这两种毒素的检测线性范围分别为:1-0.01ng/mL、1-0.001ng/mL;线性方程分别为:y=1054.35+322.89x(R2=0.986)、y=1491.68+410.88x(R2=0.994)。然后在谷物中添加不同浓度的OTA、FB1进行回收率测定,回收率范围分别为:81.8±6.28%~116.38±7.60%、76.58±5.96%~122.32±2.89%。最后使用本实验方法对21份谷物样品进行了检测,同时用ELISA方法进行对照,两种方法结果经统计学分析显示无显著性差异(P0.05)。
【学位授予单位】:南京师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:TS207.5;O657.3

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 林维宣,田苗;单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定啤酒中伏马毒素B_1、B_2[J];食品科学;2001年02期
2 赖卫华,熊勇华,陈高明,许杨;应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究[J];食品科学;2005年05期
3 邓省亮;赖卫华;许杨;;胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B_1的研究[J];食品科学;2007年02期
4 廉慧锋;赵笑天;王蓉珍;宋欢;林勤保;;超高效液相色谱-串联质谱法同时测定玉米、花生、麦仁中的9种真菌毒素[J];食品科学;2010年20期
5 李慧;李少华;王鸣刚;邵宁生;;以完整细胞为靶子的SELEX技术研究进展[J];生物技术通讯;2009年06期
6 快素兰,章俞之,胡行方;光子晶体的能带结构、潜在应用和制备方法[J];无机材料学报;2001年02期
7 邱茂锋,刘秀梅,王玉华,张朝武;某食管癌高发区人群伏马菌素摄入量及尿二氢神经鞘氨醇/神经鞘氨醇比值的调查[J];卫生研究;2001年06期
8 江涛,李凤琴,王环宇,田静,高秀芬,宫慧之,王玉平,计融;赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究[J];中国公共卫生;2004年05期
9 王向红;刘涛;王忠斌;王硕;;高效液相色谱法同时测定谷物中的赭曲霉毒素和玉米赤霉烯酮[J];中国食品学报;2008年05期
10 谢丽伟;赵祥升;孔维军;王宇婷;胡一晨;欧阳臻;杨美华;;分子印迹聚合物固相萃取柱净化-HPLC-FLD测定人体尿液中的赭曲霉毒素A[J];药学学报;2014年04期
【共引文献】
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1 徐志;刘春华;李春丽;吴晓春;;咖啡中赭曲霉毒素A研究进展[J];安徽农业科学;2011年08期
2 曹立亭;许李丽;万向;王秋菊;马跃;;SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化[J];安徽农业科学;2012年06期
3 赵宏刚,韩小云,温激鸿,王刚;新型声学功能材料——声子晶体[J];材料科学与工程学报;2003年01期
4 赵宏刚,韩小云,温激鸿,王刚;空气中周期管阵列的声波禁带研究[J];材料科学与工程学报;2004年01期
5 赵丽,余家国,程蓓,赵修建;三维光子晶体的化学方法制备与应用[J];稀有金属材料与工程;2004年04期
6 祁光宇;智晓莹;任维维;黄银军;牟克斌;刘学荣;王宇;蒋韬;;胶体金免疫层析技术在动物源性食品中的应用[J];东北农业大学学报;2010年04期
7 陆清茹;;光子晶体的应用与研究[J];电脑知识与技术;2011年22期
8 邓惠中;贺建华;;饲料中霉菌毒素检测技术研究进展[J];饲料工业;2010年07期
9 康敏;许杨;何庆华;王丹;;膜基质免疫分析法同时检测玉米中伏马菌素B_1和呕吐毒素[J];分析化学;2012年03期
10 陈凯,盛秋琴,韩军,王晶;光子晶体及其应用研究[J];光电子技术;2003年01期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 张崟;曾庆孝;朱志伟;韩光赫;;黄曲霉毒素的快速检测方法[A];“科技创新与食品产业可持续发展”学术研讨会暨2008年广东省食品学会年会论文集[C];2008年
2 韦广琴;李中安;周常勇;;免疫胶体金技术在植物病理学研究中的应用综述[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
3 马寅生;赵正苗;韩京朋;景滢滢;;检测呕吐毒素的胶体金试纸卡的研制[A];2013年饲料毒理学术报告会暨饲料毒理学专业委员会第五届全国代表大会材料集[C];2013年
4 冯楠;;食品中85种真菌毒素、生物碱、农药筛查技术研究[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第29分会:公共安全化学[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 管笛;黄曲霉毒素M_1单克隆抗体及检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
2 李岩松;玉米中伏马菌素免疫学快速筛检方法研究[D];吉林大学;2011年
3 张爱华;赭曲霉毒素A免疫检测方法的研究与呕吐毒素生物转化菌NJA-1的鉴定[D];南京农业大学;2010年
4 王希春;农产品中两种真菌毒素蛋白质芯片检测技术的研究[D];南京农业大学;2010年
5 马弘舸;瞬态电磁脉冲的时域伪谱方法:研究、改进及应用[D];电子科技大学;2005年
6 沈杰;Ⅰ.射频溅射制备纳米二氧化钛薄膜及其光致特性研究 Ⅱ.含非线性缺陷层的一维光子晶体研究[D];复旦大学;2005年
7 翦知渐;用右手、左手材料制成的光子晶体的光学特性的研究[D];湖南大学;2007年
8 李增宁;河北省不同地区粮食赭曲霉毒素A污染情况及OA致细胞损伤作用的研究[D];河北医科大学;2007年
9 张辉;单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性及胶体金试纸研制[D];吉林大学;2008年
10 黄飞;周期性结构声学特性及其算法研究[D];华中科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯倩倩;赭曲霉毒素A人工抗原构建及其多克隆抗体的制备[D];华中农业大学;2010年
2 刘畅;DY5000快速检测农产品中有毒有害物质方法验证[D];湖南农业大学;2010年
3 张兰根;光诱导光子晶格的制作及其光学特性研究[D];内蒙古师范大学;2011年
4 张印;Bragg带隙的研究及其二维光子晶格波导的光学特性的分析[D];内蒙古师范大学;2011年
5 陈发荣;氯霉素胶体金试纸条的研制[D];南昌大学;2011年
6 王磊;黄曲霉毒素B_1免疫学快速检测技术研究[D];河南科技大学;2011年
7 冯亚萍;二维Thue-Morse型准周期光子晶体的制作及光学特性的研究[D];宁波大学;2011年
8 李之佳;细菌对赭曲霉毒素A的脱毒研究[D];上海交通大学;2011年
9 许欣;湖羊早期妊娠诊断免疫胶体金层析试纸条的初步研制[D];南京农业大学;2010年
10 王立娟;黄曲霉毒素B_1对犬免疫机能的影响[D];南京农业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 虞伟,廖建辉,葛存旺,顾宁,武建国;胶体金纳米粒子及其蛋白标记物在电场中的泳动行为研究[J];微纳电子技术;2003年09期
2 邱茂锋,刘秀梅,王玉华,刘江;高效液相色谱法测定人尿中神经鞘氨醇和二氢神经鞘氨醇[J];分析化学;2000年04期
3 曾红燕;黎源倩;敬海泉;;高效液相色谱法测定粮食中玉米赤霉烯酮及其代谢物[J];分析化学;2006年03期
4 隋凯;李军;郑江;;多功能柱净化-高效液相色谱法检测谷物中的玉米赤霉烯酮[J];分析试验室;2006年01期
5 褚庆华;郭德华;王敏;王雄;沈建英;;谷物和酒类中赭曲霉毒素A的测定[J];中国国境卫生检疫杂志;2006年02期
6 邓舜洲;何庆华;章英;许杨;;竞争间接ELISA检测饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮[J];江西农业大学学报;2006年02期
7 许烨;马荣山;李军;;高效液相色谱法测定酒中的赭曲霉毒素A[J];酿酒;2006年02期
8 黄飚,陶文沂,张莲芬,时瑾,杨海麟,金坚;赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析[J];生物化学与生物物理进展;2005年07期
9 朱孟丽;高效液相色谱法对饲料中赭曲霉毒素的测定[J];中国饲料;2005年20期
10 赖卫华,熊勇华,陈高明,许杨;应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究[J];食品科学;2005年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈红艺,郭红莲,倪培根,张琦,程丙英,张道中;聚苯乙烯微粒光子晶体的反常透过特性[J];物理学报;2003年09期
2 云中客;蝴蝶与光子晶体[J];物理;2003年04期
3 陈凯,盛秋琴,韩军,王晶;光子晶体及其应用研究[J];光电子技术;2003年01期
4 张国范;光子晶体的数值模拟[J];光机电信息;2003年08期
5 杨旅云,邱建荣;光子晶体制备方法最新进展[J];激光与光电子学进展;2003年08期
6 林峰,彭景翠,李宏建,徐玉峰,李文华;光子晶体的研究进展[J];液晶与显示;2003年05期
7 冯志芳,王义全,许兴胜,江少林,郝伟,程丙英,张道中;光子晶体中双通道之间能量的转移[J];物理学报;2004年01期
8 栗岩锋,王清月,胡明列,李曙光,刘晓东,侯蓝田;光子晶体光纤色散的无量纲化计算方法[J];物理学报;2004年05期
9 赵丽,余家国,程蓓,赵修建;三维光子晶体的化学方法制备与应用[J];稀有金属材料与工程;2004年04期
10 朱志宏,叶卫民,季家镕,袁晓东,曾淳,张晚云;光子晶体的非严格周期性对其传输特性的影响[J];光学学报;2004年06期
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1 王京霞;崔丽影;田恩涛;江雷;宋延林;;大面积、高强度聚合物光子晶体的制备[A];中国化学会第27届学术年会第04分会场摘要集[C];2010年
2 葛建平;;胶体光子晶体的磁组装及显示性能研究[A];中国化学会第27届学术年会第04分会场摘要集[C];2010年
3 汪河洲;;光子晶体研究[A];全国第十二次光纤通信暨第十三届集成光学学术会议论文集[C];2005年
4 顾忠泽;刘兆彬;赵祥伟;;可用于生物分子编码的自组装光子晶体[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年
5 王志兵;叶永红;;光子晶体中光学微腔的发光调制[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年
6 金崇君;张道中;程丙英;李兆霖;倪培根;;光子晶体的研究进展[A];第四届全国光学前沿问题研讨会论文摘要集[C];1999年
7 胡小永;张琦;刘元好;程丙英;张道中;;快速可调谐三维光子晶体[A];第六届全国光学前沿问题研讨会论文摘要集[C];2003年
8 康凯;黄世华;董力强;高长城;;强制沉积3D光子晶体的方法研究[A];第11届全国发光学学术会议论文摘要集[C];2007年
9 杜晓宇;郑婉华;张冶金;任刚;王科;邢名欣;陈良惠;;慢光在光子晶体弯曲波导中的高透射传播[A];第十六届全国半导体物理学术会议论文摘要集[C];2007年
10 尹苏娜;王彩凤;余子夷;陈苏;;基于微流控技术制备湿度敏感型光子晶体微珠[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年
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1 贾正根;光子晶体学俏然崛起[N];中国电子报;2001年
2 清华大学材料科学与工程系 周济;光子晶体:光信息时代的“半导体”[N];中国电子报;2005年
3 张孟军;攀登光子晶体高峰的人[N];科技日报;2004年
4 刘霞;美制成兼具电学光学性质的光子晶体[N];科技日报;2011年
5 丛林;聚合物光子晶体研究取得进展[N];中国化工报;2011年
6 华凌;耐上千摄氏度高温的光子晶体问世[N];科技日报;2012年
7 杨健;中科院取得光子晶体理论创新[N];人民日报;2003年
8 ;我国光子晶体中原子自发辐射特性研究获突破[N];中国高新技术产业导报;2006年
9 新华;可变色塑料薄膜开发成功[N];福建科技报;2007年
10 ;穿上变色塑料薄膜“新衣”,食品变质一看就知[N];新华每日电讯;2007年
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1 张飒飒;聚合物光子晶体的制备及其光学特性研究[D];山东大学;2008年
2 童凯;一维缺陷光子晶体及其温度特性的研究[D];燕山大学;2007年
3 刘占芳;复合结构光子晶体的制备与性质[D];吉林大学;2008年
4 胡真;光子晶体器件数值模拟的Dirichlet-to-Neumann方法[D];中国科学技术大学;2009年
5 沈晓霞;单双光子聚合法结合制备引入缺陷的光子晶体及其色散性质的研究[D];山东大学;2009年
6 任琳;金属纳米壳层光子晶体的制备及其对热辐射的调控[D];吉林大学;2010年
7 罗丹;光子晶体中的超透镜和超弯曲效应研究[D];天津大学;2010年
8 郭楚才;平板光子晶体的理论与实验研究[D];国防科学技术大学;2010年
9 侯金;硅基光子晶体带隙特性与波导研究[D];华中科技大学;2011年
10 李进;光子晶体应用于红外辐射光谱控制的探索研究[D];中国科学技术大学;2011年
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1 张琳;光子晶体构筑基元的制备和表面修饰[D];青岛大学;2009年
2 张世昌;正方柱光子晶体中电磁波的异常传输现象研究[D];湖南大学;2009年
3 李集思;一维金属介质光子晶体的光学特性和应用研究[D];吉林大学;2010年
4 方博;光子晶体中光脉冲的动态调控和色散关系研究[D];上海交通大学;2010年
5 雍振;光子晶体传输特性数值模拟的时域有限差分方法研究[D];西安石油大学;2009年
6 王自霞;激光全息光刻制作一维层状光子晶体及其激射研究[D];青岛科技大学;2010年
7 张勇勇;含磺酸基凝胶光子晶体在分析中的应用[D];天津大学;2010年
8 董广才;基于光子晶体辅助的锥形结构表面等离子体激元的研究[D];吉林大学;2011年
9 倪培根;三维光子晶体的制备及其非线性效应的研究[D];山东师范大学;2000年
10 张杰;平板光子晶体本征模式研究[D];国防科学技术大学;2003年
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