收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

杆状病毒早期感染对家蚕血淋巴细胞的影响以及宿主细胞的应激反应研究

王冠  
【摘要】:本实验以BmNPV-家蚕血淋巴细胞这一系统为研究对象,运用家兔免疫的方法获得病毒粒子的多克隆抗体再辅助二抗标记实现在In vivo的条件下标记病毒粒子,建立一个In vivo的条件下利用激光共聚焦技术实时研究病毒感染的新方法。运用BmNPV的病毒粒子实时采集的家蚕血淋巴细胞感染吸附后的一个小时计为0时间,激光共聚焦实时跟踪时间为1-3小时。跟踪研究病毒在感染早期对于宿主细胞的钙离子和线粒体的影响。 实验通过对正常与病毒感染细胞内以Fluo-3标记钙离子的荧光信号的实施跟踪,采集细胞范围内荧光信号数据,观察其变化过程。发现:在正常情况下家蚕血淋巴细胞内钙离子浓度的变化具有规则的波动性,振幅一致,周期较为恒定约为900s,且相邻的细胞具有相同的波动特征以及良好的同步性;在病毒感染的情况下,钙离子浓度总体上有所增加,且波动周期延长、浓度变化的灵敏度降低。说明病毒感染会影响正常条件下钙离子有规律的释放与聚集的过程,推测感染早期病毒携带的病毒编码的糖蛋白修饰质膜所造成的胞内一些细胞器(内质网、线粒体等)的膜通透性损伤性改变是胞内钙离子浓度增加,是钙离子聚集与释放过程失调的主要原因。病毒依赖细胞骨架的质-核运输过程也是钙离子浓度升高的一个因素。而相邻细胞钙离子浓度变化的一致性体现了通过钙离子而实现的细胞间信号传递过程。 实验通过与研究钙离子相同的病毒感染方式对正常与病毒感染细胞内以Rhodamine123标记线粒体的荧光信号的实施跟踪发现:线粒体的膜电位在细胞正常条件下也具有规则的波动性,周期恒定约为500s,但是在波形上与钙离子的波动有着比较大的差别,而在病毒感染的条件下线粒体的活性变化具有三种不同的紊乱形式。说明线粒体的膜电位可以反映线粒体膜上呼吸链的状态,即体现了线粒体功能状态以及活性。而其在病毒感染的条件下的三种不同的紊乱形式,体现了病毒与宿主细胞之间的相互作用的不同结果。推测为宿主细胞死亡、凋亡或为对病毒感染的可承受状态。对于三种状态的选择线粒体起了关键的作用。认为细胞内钙离子浓度的一段时间的升高易造成线粒体膜上钙离子超载,再加上线粒体自身受到的伤害,按照其损伤程度的不同,产生不同的结果,或损伤在可以承受的范围内则维持原有的状态,使得病毒得以持续感染;或损伤使得膜间质中的自由基,和一些凋亡前体 肴片邓佬吠,尹2004届 柳{全笋夕老戈 产次厉毒早筋澎奕刀紧菌恤球巴绷糟劣多瀚以资 按金绷脸甜应减反应研泞 释放至胞内引发对细胞的伤害以及凋亡的发生;或者损伤严重造成线粒体的活性过 低,没有足够的能量引发凋亡,则细胞死亡。不同的结果体现了线粒体在凋亡过程 中的重要性,以及病毒与宿主细胞的相互作用。 对感染不同时期淋巴细胞中三种保护性酶(CAT、户00、500)活力的测定结 果为:病毒感染引起体内一系列保护酶活性的相应升高,而随感染的进行到后期酶 活有所降低。说明在感染过程中线粒体受到损伤会产生大量自由基释放至胞内而激 活了清除自由基的相关酶。 综合以上可认为病毒感染早期就会对宿主细胞的产能系统、信号传导系统、保 护酶系统产生一定的影响,造成宿主细胞不同的应激反应。而宿主细胞的这些反应 对病毒感染过程亦有一定的反作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 吴小锋;曹翠平;鲁兴萌;;利用细菌转座子构建适于家蚕的Bac-to-Bac快速基因表达系统[J];蚕业科学;2006年02期
2 廖顺尧,刘运强,鲁成,周泽扬,向仲怀;家蚕线粒体基因组1.8kb片段的克隆及序列分析[J];蚕业科学;2002年01期
3 李卫国,王厚伟,牟志美,石连辉;昆虫重组杆状病毒获得技术研究展望[J];山东农业大学学报(自然科学版);2003年01期
4 王运湘,李镇,龙綮新,农广,王珣章;家蚕核型多角体病毒gp64基因的克隆和全序列测定[J];微生物学报;2000年01期
5 李爱玲,徐安英,沈兴家,唐顺明,张志芳,潘沈元;家蚕、野桑蚕线粒体Cyt b基因片段序列分析及分子进化研究[J];蚕业科学;2004年01期
6 汝少国,姜明,李永棋,刘晓云;中国对虾(Penaeus chinensis)肝胰腺上皮细胞质中杆状病毒增殖的电镜观察[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);1996年01期
7 包人月;吴金美;;蚕的细胞凋亡相关基因及其检测技术[J];蚕桑通报;2006年02期
8 汝少国,李永祺,姜明,刘晓云;中国对虾(Penaeuschinensis)杆状病毒的装配和包涵体形成过程研究[J];青岛海洋大学学报;1996年04期
9 崔红娟,陈克平;家蚕生物反应器表达外源基因[J];生物技术;1999年03期
10 黄自然;;蚕病的分子生物学研究进展(上)[J];中国蚕业;1988年04期
11 王厚伟,牟志美,崔为正,李卫国,王彦文,高绘菊;昆虫激素与杆状病毒[J];山东农业大学学报(自然科学版);2000年04期
12 肖庆利,张志芳,何家禄;鸡贫血病毒VP1和VP2蛋白在家蚕中的联合表达[J];生物工程学报;2001年03期
13 黄建芳,张知良,赵宝华,胡清海,肖庆利,张志芳,何家禄;鸡贫血病毒VP1和VP2蛋白在家蚕中的联合表达[J];动物医学进展;2002年03期
14 尹新明;安世恒;江志伟;胡鹏;;家蚕核型多角体病毒ORF 75基因的克隆及表达[J];河南农业大学学报;2007年05期
15 黄自然,卢蕴良;家蚕血细胞的种类及其演变过程[J];蚕业科学;1963年03期
16 孙承铣,陆潜珍;家蚕夏秋季添水饲养的理论探讨[J];蚕业科学;1965年03期
17 ;防止农药“敌杀死”引起家蚕中毒[J];湖北农业科学;1984年05期
18 李敏棠,顾懋治,李载平,黄可威,陆有华;家蚕DNA对家蚕核多角体病的诱发作用[J];遗传学报;1984年04期
19 王裕兴,马俊,潘民和,邹凤竹,牟志美;家蚕浓核病病毒流行病学的探讨[J];蚕业科学;1988年01期
20 ;《蚕业科学》(季刊)第17卷总目次[J];蚕业科学;1991年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵红平;;家蚕蚕茧与蚕丝的生物力学研究[A];北京力学会第十六届学术年会论文集[C];2010年
2 刘艳艳;池旭娟;方向明;阚雪芹;苏媚;刘文倩;王海玲;谈建中;;家蚕蛋白激酶C受体基因Bmrack的克隆及序列分析[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
3 李兵;许雅香;卫正国;陈玉华;沈卫德;;生产高品位生丝家蚕新品种(苏秀×春丰)的选育[A];中国蚕学会第六届家蚕和柞蚕遗传育种学术研讨会论文集[C];2009年
4 宋方洲;常平安;张平波;易发平;马永平;;家蚕Fib-H、Ser-1基因探针在家蚕和中国野桑蚕的对比荧光原位杂交(FISH)研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
5 宋方洲;常平安;张平波;易发平;马永平;;家蚕Fib-H、Ser-1基因探针在家蚕和中国野桑蚕的对比荧光原位杂交(FISH)研究[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
6 黄科;李春峰;范晓东;刘文明;周泽扬;;家蚕gapdh基因的克隆及分析[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
7 张彩霞;鲍忠赞;周前凯;魏广兵;徐世清;司马杨虎;;家蚕正反交SAGE表达分析[A];中国蚕学会第八届暨国家蚕桑产业技术体系家(柞)蚕遗传育种及良种繁育学术研讨会论文集[C];2011年
8 苏金明;吴伟尉;司马杨虎;;家蚕试验小区雌雄比例差异性调查及分析[A];中国蚕学会第八届暨国家蚕桑产业技术体系家(柞)蚕遗传育种及良种繁育学术研讨会论文集[C];2011年
9 代方银;童晓玲;沈以红;罗亭玉;伴野丰;鲁成;向仲怀;;家蚕体形突变第2数珠蚕(mf-2)的遗传学研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(2)[C];2009年
10 陆叶;张孝林;郑小坚;薛仁宇;曹广力;贡成良;;IL-28A在家蚕BmN细胞及蛹体中的表达[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(2)[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 于红松;家蚕黑色素合成途径基因的分子进化[D];西南大学;2011年
2 沈兴家;BmNPV和AcMNPV egt 基因启动子特性及家蚕海藻糖酶基因启动子活性的滞育激素调节研究[D];中国农业科学院;2004年
3 王鑫;杆状病毒复制和基因表达的表观遗传学调控研究[D];复旦大学;2010年
4 杨章女;BmNPV ORF9和ORF56基因功能分析[D];浙江大学;2008年
5 沈以红;家蚕几种组织的EST及基因表达特征分析[D];西南农业大学;2003年
6 王芳;杆状病毒几丁质酶基因功能分析[D];浙江大学;2004年
7 林旭瑷;杆状病毒泛素、多角体基因启动子分析及表达系统的应用[D];中国农业科学院;2006年
8 甘玲;家蚕脑组织基因表达谱和神经肽及肽样基因的功能研究[D];西南大学;2011年
9 谭祥;家蚕嗅觉相关谷胱甘肽-S-转移酶BmGSTD1的结构与功能[D];西南大学;2012年
10 汪琳;外源基因在家蚕中靶向整合及线粒体载体研究[D];西南农业大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王冠;杆状病毒早期感染对家蚕血淋巴细胞的影响以及宿主细胞的应激反应研究[D];南京师范大学;2004年
2 江志伟;家蚕核型多角体病毒ORF75基因的克隆及表达[D];河南农业大学;2006年
3 刘运强;家蚕线粒体基因组全序列测定及分析[D];西南农业大学;2001年
4 黄永燕;家蚕赤蚁突变的分子定位及淡赤蚁(ch~p)的分子基础初探[D];西南大学;2010年
5 刘淑梅;家蚕体主要药用活性成份的研究[D];浙江大学;2004年
6 曾凤辉;家蚕新基因BmEm4的克隆,表达与功能研究[D];浙江理工大学;2010年
7 江艳;BmCycH基因及其在家蚕中表达特性的研究[D];浙江理工大学;2010年
8 夏学春;人乙肝前表面抗原preS1和重组表面抗原SS1在家蚕中的表达[D];浙江大学;2001年
9 陈大霞;家蚕AFLP标记连锁图谱的构建与分析[D];西南农业大学;2003年
10 潘晔;家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂(Bmserpin-2)和类成虫盘生长因子(BmIDGF)的亚细胞定位及组织表达分析[D];江苏大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 李国 实习生 杨海霞;家蚕基因研究的意义到底有多大[N];工人日报;2009年
2 记者 刘传书 冯竞;我家蚕基因研究又获重要成果[N];科技日报;2009年
3 赵强社;家蚕中毒的防治[N];山西科技报;2003年
4 本报记者 邓力;家蚕基因破译派上大用场[N];农民日报;2003年
5 本报记者 吕媛;基因控制家蚕生男不生女[N];北京科技报;2004年
6 通讯员 王治奇 记者 夏桂廉;西南农大拥有家蚕基因序列世界第一[N];光明日报;2002年
7 ;家蚕的病虫害防治[N];河北科技报;2003年
8 如皋市蚕桑站 孙杰;家蚕传染病的防治[N];江苏科技报;2001年
9 秦得利;家蚕基因组研究成为竞争热点[N];农民日报;2002年
10 记者 贾少强;桑蚕基因揭开家蚕起源奥秘[N];深圳商报;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978