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小菜蛾抗性品系和敏感品系的cDNA代表性差异分析

王淑珍  
【摘要】:小菜蛾Plutella xylostella(L.)属鳞翅目菜蛾科,是十字花科蔬菜的主要害虫之一。由于在生产上用药频繁,加之小菜蛾生活史的特殊性,它对多种杀虫剂都产生了抗药性,己成为世界上最难防治的害虫之一,所以对小菜蛾的抗性机理研究就显得尤为重要。 本研究采用改进的cDNA代表性差异分析法(cDNA Representational Difference Analysis,cDNA RDA)方法,根据本实验室的实际情况,利用小菜蛾敏感品系cDNA作为“驱赶”来源,小菜蛾抗溴氰菊酯品系、抗杀虫双品系、抗杀螟丹品系的cDNA分别作为“检测”来源,筛选出了小菜蛾抗药性品系和敏感品系间的差异性表达片断。 四轮杂交后,在三种抗药性品系中均有一条200bp左右的差异扩增片段产生。将差异扩增片段克隆于pMD18-TVector(Takara)提供的载体上,转入DH5α菌株,氨苄筛选,菌落PCR鉴定阳性克隆,随机挑选10个测序并分别送入NCBIBLASTN进行同源性比较。主要研究结果如下: 1、在小菜蛾溴氰菊酯抗性和敏感品系的cDNA RDA中,得到1个序列与已知泛素基因有较高同源性的序列。 2、根据几个物种泛素基因的保守区序列设计一对引物,以小菜蛾溴氰菊酯抗性品系、敏感品系的cDNA分别为模板做PCR扩增都得到了与已知泛素基因有较高同源性的片段,两者的氨基酸序列中仅有三个不同,其中N变为K尤为值得注意。 3、在小菜蛾杀虫双抗性和敏感品系的cDNA RDA中,得到1个序列与28S rRNA基因有较高同源性。 4、在小菜蛾杀螟丹抗性和敏感品系的cDNA RDA中,得到1个序列与ACV合成酶基因有较高同源性。


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