基于甾类激素信号转导的药物筛选模型的建立
【摘要】：药物筛选模型是发现新药、证明药物作用途径与机制的重要条件之一。在漫长的药物实践过程中,涌现出大量用于新药筛选的各类模型,在新药发现和研究中发挥了积极作用。而且随着分子生物学、细胞生物学、生物信息学的发展,各种研究手段与方法不断更新,使药物筛选向着定向、微量、快速、简便的方向发展,应用这些药物筛选模型可显著加快药物发展的进程。
本研究顺应药物筛选的新动向,着眼于细胞水平,建立基于甾类激素信号转导的药物筛选模型,用来对传统中药成分进行初步分析,试图能够找到某些中药的活性成分。
1.基于雌激素与雄激素信号转导的报告载体的构建
我们参考相关文献,合成雌激素与雄激素的有效反应元件,分别装入pGL3-P的多克隆位点,构建出基于雌激素与雄激素信号通路的以荧光素酶为报告基因的载体。另外,我们也尝试用GFP作报告基因,从EGFP-N1质粒中克隆该基因,将其替换pGL3-P上的Luc+,构建出以GFP为报告基因的载体。结合雌激素与雄激素反应元件,同样构建出基于雌激素与雄激素信号通路的以绿色荧光蛋白为报告基因的载体。经酶切鉴定以及测序分析确定载体构建正确。
2.基于雌激素与雄激素信号通路的药物筛选模型的建立
将构建的质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞和人前列腺癌PC-3细胞,用雌激素和雄激素分别刺激,通过检测荧光素酶以及绿色荧光蛋白的表达量来验证模型的正确性和有效性。实验证明,雌激素信号通路的模型建立有效。我们选用该模型来分析治疗女性疾病的中药(代号CMZYC),发现在其传统的三种提取成分中,水溶成分能够引起通路的有效变化,而乙酸乙酯及乙醇提取成分对报告基因的表达变化不明显。据此,我们初步认为,水溶成分中存在着该种中药的活性成分。本实验为进一步分析该种中药的活性成分提供了依据。
3.中药CMZYC对肝癌细胞生长的影响
我们采用MTT、流式细胞术、细胞计数等实验手段,考察了三种中药提取成分对肿瘤细胞形态、生长增殖和细胞周期的影响。研究发现,10~(-2)母液浓度的CMZYC乙酸乙酯提取物能够显著抑制肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721的生长(P0.05),同时BEL-7402形态也发生变化,细胞变细变长,而SMMC-7721在
【关键词】：药物筛选模型 激素反应元件 报告基因 信号转导 MTT 流式细胞术 【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R96
【目录】：
- 摘要4-8
- 第一章 综述8-27
- 第一节 药物筛选模型进展8-18
- 一． 药物筛选技术的发展历程8-9
- 二． 药物筛选模型分类9-12
- 三． 基于检测报告基因的药物筛选模型12-15
- 四． 细胞水平药物筛选模型的应用15-16
- 参考文献16-18
- 第二节 甾类激素的信号转导与药物筛选模型18-27
- 一． 甾类激素的作用机制18-20
- 二． 雌激素与雄激素及其受体的信号转导通路20-22
- 三． 基于甾类激素信号转导的药物筛选模型22-23
- 四． 环境雌激素、雄激素的快速筛选23-24
- 参考文献24-27
- 第二章 基于雌激素与雄激素信号转导的报告载体的构建27-36
- 1． 材料与方法27-31
- 2． 实验结果31-32
- 3． 讨论32-33
- 参考文献33-36
- 第三章 基于雌激素与雄激素信号通路的药物筛选模型的建立36-45
- 1． 材料与方法36-38
- 2． 结果38-42
- 3． 讨论42-44
- 参考文献44-45
- 第四章 中药 CMZYC对肝癌细胞生长的影响45-55
- 1． 材料与方法45-46
- 2． 结果46-53
- 3． 讨论53-55
- 附录1 实验所用的主要材料与仪器55-57
- 附录2 在读期间发表论文57-58
- 致谢58-59
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