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香菇多糖硫酸酯的制备纯化、鉴定及生物学活性的研究

王亚辉  
【摘要】:香菇多糖具有提高免疫能力、抗病毒、抗肿瘤等生物学活性,在临床上得到广泛的应用。近年来香菇多糖硫酸酯由于具有良好的抗病毒作用,从而受到人们的关注。目前,对香菇多糖硫酸酯的研究主要集中于其抗病毒活性,而对其抗肿瘤作用未见详细报道。 本实验主要对硫酸酯化、理化性质及生物学活性三部分内容进行了研究。在酯化工艺方面对氯磺酸—吡啶法加以改进,采用逐步升温的条件合成香菇多糖硫酸酯。实验结果显示,吡啶和氯磺酸比例6∶1,反应温度在65~90℃,反应时间为1.5~2h,得到了取代度较高的衍生物;以离子交换DEAE-52柱层析,分子筛Sephadex G-75、Sephadex G-100柱层析对产物进行了分离纯化,得到分子量不同的两个组分LNTS_1和LNTS_2;由于LNTS_1含量极高且水溶性好,我们选取其进行分离纯化及进行进一步研究。通过离心冻融及琼脂糖凝胶电泳鉴定了样品LNTS_1的纯度,通过紫外光谱学和红外光谱学分析及硫酸钡比浊法,对产物进行硫酸基鉴定和结构鉴定。结果显示,经过硫酸化,香菇多糖带上硫酸基团,取代度为0.86;由于酯化的影响,香菇多糖改变了构象及溶解度等理化性质。通过高效凝胶示差色谱测定,我们得到的香菇多糖硫酸酯的重均分子量为8.2678万,分子量分布宽度为1.5855;经过硫酸化,香菇多糖的分子量分布变窄,分子量较为均一和集中。在生物学活性方面,检测了香菇多糖和硫酸酯清除超氧阴离子、羟自由基的活性,并研究了其对体外培养的人宫颈癌细胞HeLa、人白血病细胞U937、人白血病细胞K562和人肝癌细胞Bel-7402的生长的影响。结果显示,酯化前香菇多糖不具有清除超氧阴离子作用,而酯化后具有很强的清除超氧阴离子的作用;酯化前具有较强清除羟自由基的作用,酯化后在低浓度下也表现出清除羟自由基的作用,但高浓度时易与反应体系中细胞色素C络合,形成沉淀。LNT对于体外培养的几株肿瘤细胞的生长未产生明显影响;LNTS_1对人肝癌细胞Bel-7402的增殖具有显著的抑制作用,而对其他几个细胞株未产生影响。


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