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《南京师范大学》 2005年
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拮抗性芽孢杆菌F53抑制茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)的研究

王慧萍  
【摘要】:本研究利用离体抑菌圈法从茄子病健植株根际土壤筛选出对黄萎病原菌(Verticillium dahliae)抑菌效果明显的芽孢杆菌F53菌株,对该菌株进行发酵条件优化试验,初步探讨其发酵液的稳定性、发酵液中抑菌活性物质的性质,对黄萎病原菌的抑菌机理及温室人工接种黄萎病原菌的茄子幼苗盆栽试验,同时,通过生理生化试验及16SrDNA序列分析对菌株进行鉴定。 在菌种筛选过程中,发现F53菌株具有较强的平板抑菌能力,固体培养条件下能够分泌几丁质酶及β-1,3-葡聚糖酶。抑菌谱试验表明,该菌株抑菌范围较广,能够对多种所用指示菌株产生较明显的抑制生长作用。 为了获得F53菌株的最佳发酵条件,通过碳、氮源正交试验及培养条件的优化,得出最佳培养基配方为(%):蔗糖0.3,玉米淀粉0.3,蛋白胨1.0,豆饼粉0.3,NaCl 0.5,FeSO_4 0.002,MgSO_4 0.04;最佳培养条件为:培养基起始pH值7.0~8.0、250mL三角瓶装液量50mL、摇瓶速度150r/min、接种量4%、温度34℃,培养时间48h,这为该菌株的发酵罐放大试验提供了理论性依据。 发酵液稳定性试验结果表明,该菌株发酵液热、酸碱、蛋白酶及贮藏的稳定性均较好,发酵液经100℃处理100min,在pH3.0~10.0的条件下放置48h,蛋白酶K及胰蛋白酶处理一定时间,4℃冰箱中保存6个月,其抑菌活性基本不变。 发酵液分别用10%~100%饱和度(NH_4)_2SO_4盐析,(NH_4)_2SO_4饱和度为70%时,所沉淀出来的粗蛋白对黄萎病原菌抑菌圈最大,发酵液未能够检测到几丁质酶酶活,β-1,3-葡聚糖酶活性不需要诱导。 抑菌机理的研究表明,该菌株发酵液能够抑制黄萎病原菌的菌丝生长和孢子萌发。温室人工接种黄萎病原菌的茄子幼苗盆栽试验表明,该菌株芽孢制成的菌剂防治效果达到46.3~75.8%。 通过形态特征、平板培养特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析等对F53菌株进行鉴定,初步将其归为类芽孢杆菌属(Paenibacillus)。
【学位授予单位】:南京师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S436.411

【参考文献】
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