DNA序列、ISSR标记在药用植物种质鉴别中的应用
【摘要】：本文运用rDNA ITS区序列对花椒及其混淆品、花椒的野生居群、泽泻的野生居群进行了鉴别,并对它们的亲缘关系进行了探讨。花椒ITS区序列总长度为619-620bp,长度变异较少,与其混淆种长度仅相差4bp。花椒各居群中,rDNA ITS区碱基序列有15个变异位点、12个信息位点、3个特异性识别位点。与其混淆品间的碱基差异则较为显著,多达71个变异位点。依据花椒ITS区的序列特征可以准确鉴别各居群的花椒及其混淆品;亲缘关系密切的花椒居群在地理位置上也非常靠近。泽泻rDNA ITS区的碱基序列总长度确定为640bp,江泽泻和建泽泻的ITS区碱基序列完全一致,川泽泻与建泽泻(江泽泻)在rDNA ITS区碱基序列有2个稳定的变异位点,分别位于ITS1和ITS2区段。依据泽泻rDNA ITS区的序列特征可以进一步鉴别川泽泻和建泽泻,为泽泻居群的鉴别提供可靠的分子标记。
运用trnL-F区序列对花椒及其伪品进行了鉴别。花椒cpDNA trnL-F间隔区序列为370bp、AT百分比为62.2%。尽管花椒的果实在外部形态,物理特性上与伪品差异较小,但在cpDNA trnL-F间隔区序列上却存在着一定的差异。该序列在属以下的分类阶元中同源性极高,可达100%。根据cpDNA trnL-F间隔区碱基序列的差异,能有效地鉴别花椒属以上分类阶元的伪品。
针对铁皮石斛ISSR反应的特点,建立了适用于铁皮石斛ISSR-PCR分析的反应体系和条件。利用锚定PCR法,从76个ISSR引物中筛选出10个多态性丰富的引物进行ISSR扩增。共获得127个DNA片段,其中多态性片段115个,占总带数的90.3%,选择其中的5个引物扩增出的9个多态性DNA片段作为鉴定标记,能够准确区分供试的8个铁皮石斛居群,由此建立了铁皮石斛8个野生居群的ISSR分子指纹标记。
【关键词】：rDNAITS cpDNA tmL-F ISSR 花椒 泽泻 铁皮石斛 居群 DNA分子鉴别
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：S567
【目录】：
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：S567
【目录】：
- 摘要5-6
- Abstract6-8
- 第一章 文献综述8-25
- 第一节 中药鉴别的历史和现状8-10
- 1.中药鉴别的历史8-9
- 2.中药鉴别的现状9-10
- 第二节 药用植物DNA分子标记鉴定研究10-14
- 1.限制性扩增片段长度多态性标记(Restriction fragment length polymorphic DNA marker，RFLP)10-11
- 2.随机扩增多态性DNA标记(Random amplification of polymorphic DNA marker，RAPD)11-12
- 3.扩增片段长度多态性标记(amplified fragment length polymorphic DNA marker，AFLP)12
- 4.简单重复序列扩增(simple sequence repeats，SSR)12-13
- 5.简单重复序列间扩增(inter-simple sequence repeats，ISSR)13-14
- 6.DNA序列测定14
- 第三节 rDNA ITS区特征及在植物研究中的应用14-18
- 1.18S-26S rRNA基因的结构15
- 2.rDNA ITS区的变异特点15-16
- 3.rDNA ITS区序列在被子植物系统进化研究中的应用16
- 4.rDNA ITS区序列在药用植物道地性种质鉴别中的应用16-17
- 5.rDNA ITS区序列在同属相似种及药用植物混淆种鉴别中的应用17-18
- 第四节 ISSR分子标记技术及其在植物研究中的应用18-20
- 1.ISSR反应原理及特点18
- 2.ISSR技术实验操作18-19
- 3.ISSR技术在植物研究中的应用19-20
- [参考文献]20-25
- 第二章 DNA序列分析与药用植物鉴别25-44
- 第一节 花椒及其混淆品的rDNA ITS区序列分析与鉴别25-32
- 材料和方法25-27
- 结果27-30
- 讨论30-32
- 第二节 花椒与混淆品的cpDNA trnL-F间隔区的序列鉴别32-35
- 材料和方法32-34
- 结果34
- 讨论34-35
- 第三节 利用rDNA ITS序列鉴别泽泻的种质35-41
- 材料和方法36-37
- 结果37-40
- 讨论40-41
- [参考文献]41-44
- 第三章 ISSR在铁皮石斛居群差异分析中的应用44-57
- 第一节 铁皮石斛ISSR指纹标记方法的建立与优化44-50
- 材料和方法44-45
- 结果与讨论45-50
- 第二节 铁皮石斛野生居群的ISSR分子指纹标记的研究50-54
- 材料与方法50-51
- 结果51-53
- 讨论53-54
- [参考文献]54-57
- 附录Ⅰ57-60
- 附录Ⅱ60-62
- 附录Ⅲ62-64
- 附录Ⅳ64-65
- 致谢65
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