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《南京师范大学》 2006年
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镉诱发肝细胞毒性及其胞内钙信号失调相互关系和硒的保护作用研究

王莎莎  
【摘要】:本文通过原代培养新生乳鼠肝细胞模型,运用细胞培养、荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜和生化分析等生物学技术,系统研究了镉负荷诱发肝细胞损伤以及肝细胞存活性、胞内MDA含量、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase和Na~+-K~+-ATPase活性以及胞内Ca_i~(2+)含量的变化,细胞培养上清液中LDH及AST的活性、白蛋白及Ca~(2+)含量变化,较为深入地探讨了镉导致的肝细胞胞内Ca_i~(2+)稳态失衡的可能机制;同时,还观察了硒干预镉诱发鼠肝细胞存活及其MDA含量和培养液中LDH活性的变化以及硒对镉暴露肝细胞内Ca~(2+)稳态变化的影响。结果如下: 1 新生乳鼠肝细胞原代培养方法的建立 无菌分离新生乳鼠肝脏组织,采用胶原蛋白酶消化法分离肝细胞并使用无血清培养液HepatoZYME-SFM对其进行体外培养,通过形态学及台盼蓝染色法鉴定,分离的肝细胞细胞完整,呈球形或椭球形,存活率在90%以上。说明该方法是比较理想的肝细胞培养法,为科学研究提供了细胞模型平台。 2 镉诱发肝细胞毒性及其胞内游离Ca~(2+)变化研究 原代培养乳鼠肝细胞,分为三个镉处理组和正常对照组,分别加入5、10、25μM CdCl_2染毒以及等量D-hank's溶液。结果显示:实验后12h,CdCl_2导致肝细胞存活剂量依赖性下降;培养上清液LDH和AST的活力升高或显著升高,并且白蛋白含量大大降低。在CdCl_2暴露12h后,细胞内MDA生成量增加处于较高水平,培养上清液Ca~(2+)含量显著下降。进一步观察显示,在CdCl_2暴露12h和24h后,肝细胞[Ca~(2+)]_i显著升高:胞内Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶及Na~+-K~+-ATP酶活力12h与对照组无明显差异,至24h下降或明显下降。提示:CdCl_2通过诱导肝细胞脂质过氧化和损伤,引发细胞存活下降和功能障碍而导致强烈毒性;镉暴露引发肝细胞[Ca~(2+)]_i异常增加可能是细胞损伤发展的重要机制,部分[Ca~(2+)]_i升高与胞外Ca~(2+)的进入有密切关系。 3 镉诱发肝细胞胞内游离Ca~(2+)堆积的机制探讨 原代培养乳鼠肝细胞,用Fluo-3/AM对生长良好的原代培养肝细胞闭光孵育,然后清洗并重悬肝细胞于有钙HBSS或无钙HBSS中,同时设计加或不加2-APB抑制剂(100μM)的情况,用激光共聚焦显微镜观察CdCl_2(10μM)急性暴露引起的胞内钙离子荧光强度变化。结果显示:在仅有钙的HBSS中,CdCl_2诱导肝细胞[Ca~(2+)]_i明显上升,包括开始的缓慢上升期和随后的持续升高期;在有钙的HBSS+2-APB中,CdCl_2仅引起一个无开始上升期的缓缓升高;在无钙的
【学位授予单位】:南京师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R363

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 袁燕;镉对大鼠大脑皮质神经细胞毒性损伤的机制[D];扬州大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 袁燕;镉对大鼠大脑皮质神经细胞毒性损伤的机制[D];扬州大学;2012年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前6条
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 江辰阳;镉致大鼠神经细胞凋亡的线粒体途径及NAC的保护作用[D];扬州大学;2014年
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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6 万颖;内质网应激通过SREBP-1c-FAS途径影响肝细胞脂质沉积[D];重庆医科大学;2013年
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8 张艳;同种异体肝细胞腹腔内移植联合ALR治疗大鼠急性肝衰竭的研究[D];重庆医科大学;2007年
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10 周红宇;瘦素对肝细胞甘油三酯的沉积及乙酰辅酶A羧化酶表达的影响[D];南华大学;2006年
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