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《浙江大学》 2011年
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神经生长因子和通心络对骨髓间充质干细胞血管新生能力的影响

王雯霞  
【摘要】:【实验目的】建立体外血管新生模型,研究神经生长因子(NGF)和通心络预处理对骨髓间充质干细胞(MSCs)血管新生作用的影响,并探讨其可能的作用机制。 【实验方法】取80g雄性SD大鼠的骨髓,体外分离、扩增、培养MSCs. Matrigel实验建立体外血管新生模型。 NGF预处理MSCs:用不同浓度的NGF(Ong/ml,25ng/ml,50ng/ml,100ng/ml, 200ng/ml)处理MSCs 24h,观察MSCs在Matrigel中形成管腔样结构的能力。细胞计数绘制细胞生长曲线比较NGF 50ng/ml处理组MSCs与对照组的细胞增殖能力。应用Western Blot实验检测NGF是否可激活MSCs的PI3K/Akt信号通路,并用LY294002抑制PI3K的激活,及NGF是否可促进MSCs合成内皮细胞生长因子(VEGF)。Matrigel实验检测LY294002是否可阻断PI3K通路,从而检测NGF促进的MSCs血管新生作用是否与激活PI3K/Akt信号通路有关。 通心络预处理MSCs:用通心络50ug/ml和100ug/ml处理MSCs 24h,观察MSCs在Matrigel中管腔样结构的形成能力。用划痕实验和Transwell实验检测通心络是否可提高MSCs的迁移能力。用Western Blot实验检测通心络对MSCs合成VEGF、Flk-1、MMP-2、MMP-9和TIMP-2的能力。用明胶酶谱实验检测通心络对MSCs旁分泌pro-MMP-2和活性MMP-2能力的影响。 【实验结果】不同浓度的NGF均有促进MSCs在Matrigel中管腔形成的作用,其中NGF 50ng/ml的促进能力最强,此浓度处理组MSCs在Matrigel中形成的管腔长度为对照组的2.24倍(p0.05)。NGF处理组MSCs的VEGF表达情况与对照组相比没有明显变化。NGF处理组MSCs的细胞增殖能力明显高于对照组MSCs. Western Blot实验显示从预处理1h开始NGF可明显增加MSCs磷酸化Akt的水平,应用PI3K特异性阻断剂LY294002后发现NGF处理组增加的磷酸化Akt水平被逆转。Matrigel实验中LY294002可完全逆转NGF预处理所促进的MSCs管腔形成增加作用。证明NGF对MSCs的促血管新生作用可能与激活PI3K/Akt通路有关。 通心络50ug/ml与100ug/ml处理MSCs均可增加其在Matrigel中的管腔样结构的形成能力,通心络100ug/ml处理组MSCs其管腔长度为对照组的3.04倍(p=0.031)。通心络预处理可增加MSCs合成VEGF,但对VEGF的特异性受体Flk-1的表达没有明显影响。划痕实验和Transwell实验均证明通心络可提高MSCs的细胞迁移能力。Western Blot实验证明通心络可促进MSCs合成MMP-2,但MMP-9和MMP-2的活性抑制剂TIMP-2的表达与对照组相比没有显著差异。明胶酶谱实验进一步证明通心络可促进MSCs旁分泌pro-MMP-2和活性MMP-2,这对MSCs的细胞迁移和血管新生起重要作用。 [结论] 1、NGF和通心络预处理均可提高MSCs体外血管新生的能力; 2、NGF对MSCs表达VEGF没有明显影响; 3、NGF预处理对MSCs增殖能力的提高和激活PI3K/Akt信号通路等作用可能在NGF对MSCs血管新生的促进过程中发挥重要作用; 4、通心络可促进MSCs的迁移能力,并促进MMP-2的旁分泌和VEGF的表达,这与通心络的促MSCs血管新生作用密切相关; 5、通心络对MSCs MMP-9和TIMP-2的合成没有明显影响。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 王文,傅晓东,陈伟华,应健,王树海;通心络促血管生成作用的实验研究[J];疑难病杂志;2003年01期
2 廖名龙 ,郁杰 ,黄成斌;通心络胶囊治疗心血管疾病临床新进展[J];中国药物与临床;2002年04期
3 杨业新;叶连珍;何刚;梁新宇;梅元武;;通心络胶囊对大鼠局灶性脑梗死后微血管新生的影响[J];医药导报;2009年02期
4 ;Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by myo-cardial medium under hypoxic conditions[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年09期
5 ;Effects of Tongxinluo-facilitated cellular cardiomyoplasty with autologous bone marrow-mesenchymal stem cells on postinfarct swine hearts[J];Chinese Medical Journal;2007年16期
6 杨跃进;赵京林;孟亮;田毅;荆志成;吴永建;尤士杰;杨伟宪;陈纪林;高润林;陈在嘉;;中药通心络(超微粉碎)对猪急性心肌梗死再灌注后无再流的影响[J];中国中西医结合杂志;2006年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢志贤;高正章;;通心络胶囊联合卡托普利治疗高血压合并冠心病的疗效观察[J];临床合理用药杂志;2012年03期
2 何晓;;通心络胶囊联合倍他乐克治疗冠状动脉心肌桥临床观察[J];临床合理用药杂志;2012年20期
3 李丽英;;套入式血管生成的研究进展[J];四川生理科学杂志;2011年01期
4 尹梅;高海青;李保应;程梅;吴守彩;王昊;;通心络对糖尿病大鼠心肌RAGE、NF-κB的影响[J];山东大学学报(医学版);2011年08期
5 贾雷;王彦厚;;鸡胚绒毛尿囊膜在血管生成活性研究中的应用[J];齐鲁药事;2006年06期
6 方穗雄;;通心络对冠心病患者Hcy和ADMA的影响[J];山东医药;2009年44期
7 李建辉;初少莉;姬开达;李华;;胰岛素对人脐血内皮祖细胞生物活性的影响[J];上海交通大学学报(医学版);2008年08期
8 孙承波;梁春;吴宗贵;任雨笙;潘晓明;贺治青;;通心络对晚期糖基化终产物诱导的内皮祖细胞存活的影响及其机制[J];上海医学;2008年10期
9 李佶;倪爽;;益气活血化瘀通腑方对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响[J];上海中医药大学学报;2006年02期
10 丁晓蓉;查青林;吕爱平;;利用文本挖掘技术探索类风湿性关节炎与冠心病异病同证的科学基础[J];世界科学技术(中医药现代化);2011年01期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 吴宝;;络病理论与心肌缺血/再灌注无复流机制[A];北京中医药学会络病专业委员会2010学术年会青年论坛暨急性冠脉综合征(ACS)规范化治疗与中西医结合治疗进展培训班学术论文集[C];2010年
2 岳敏;范沛;巫玮;王玉珏;顾为望;;国内实验用小型猪循环系统疾病动物模型研究进展[A];第九届中国实验动物科学年会(2010新疆)论文集[C];2010年
3 祝光礼;周凡;;冠心病的现代实验研究及中医药研究进展[A];浙江省中西医结合学会心血管病专业委员会换届、第五次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2005年
4 祝光礼;周凡;;冠心病血管新生与中医药[A];浙江省中西医结合学会心血管病专业委员会第六次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2006年
5 张海涛;杨跃进;吴以岭;程宇彤;康晟;赵京林;孟亮;田毅;张燕婉;叶珏;孟宪敏;;通心络预给药2h对猪急性心肌梗死再灌注后心肌微血管内皮结构完整和无再流的保护作用[A];首届中西医血管病学大会论文汇编[C];2013年
6 张海涛;杨跃进;程宇彤;康晟;赵京林;孟亮;田毅;张燕婉;叶珏;;通心络预给药2h对猪急性心肌梗死再灌注后心肌无再流和细胞因子变化的影响[A];首届中西医血管病学大会论文汇编[C];2013年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田嵘榛;参麦注射液对脑缺血再灌注大鼠血管再生神经细胞增殖影响的实验研究[D];成都中医药大学;2010年
2 荆阳;麻杏芎葶合剂对哮喘大鼠气道神经—免疫炎症影响的实验研究[D];成都中医药大学;2010年
3 李向东;缺血预适应、辛伐他汀和通心络减轻猪急性心肌梗死再灌注后心肌无再流和再灌注损伤的机制研究[D];北京协和医学院;2011年
4 王晶晶;鼻咽纤维血管瘤血管内皮细胞比正常血管内皮细胞具有更强的迁移和侵袭能力[D];复旦大学;2011年
5 舒礼良;人参皂苷Rb1动员骨髓内皮祖细胞防治兔自体静脉移植物再狭窄的实验研究[D];郑州大学;2011年
6 杨维娜;重组AAV-Endostatin治疗人宫颈癌裸鼠模型的实验研究[D];天津医科大学;2011年
7 王艳春;独参汤强化骨髓间充质干细胞心肌移植治疗心肌梗死的实验研究[D];辽宁中医药大学;2011年
8 王祺;独参汤联合骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死大鼠的相关研究[D];辽宁中医药大学;2011年
9 高莹;骨髓间充质干细胞联合独参汤对大鼠急性心肌梗死及细胞凋亡的影响[D];辽宁中医药大学;2011年
10 汤苏阳;VAC对创面血管生成、神经肽分泌和修复细胞凋亡基因表达的影响[D];第四军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曹明勇;骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠左心室功能和室性心律失常的影响[D];南京医科大学;2010年
2 杨培灵;不同血运重建方式介入治疗冠状动脉多支病变的临床研究[D];郑州大学;2010年
3 郑莉萍;大鼠外周血内皮祖细胞培养及鉴定的实验研究[D];郑州大学;2010年
4 牛媛媛;再生汤对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响[D];河南中医学院;2010年
5 陈卫星;新血府逐瘀软胶囊对缺血心肌大鼠心肌血管新生的影响[D];山东中医药大学;2010年
6 郭清保;高糖诱导氧化应激对大鼠内皮祖细胞VEGFR表达的影响[D];泸州医学院;2011年
7 马强;“脑神经血管单元”体外模型的构建及梓葛冻干粉对其缺氧缺糖损伤的保护研究[D];西南大学;2011年
8 鹿见香;祛银颗粒对KGF诱导的HaCaT细胞增殖及分泌TNF-α的影响[D];北京中医药大学;2011年
9 杨晓鸣;益气活血法治疗缺血性脑卒中恢复期的临床观察[D];广州中医药大学;2011年
10 常丽萍;通心络对局灶性脑缺血大鼠微血管新生及其代偿作用的实验研究[D];河北医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张曼,周爱儒,汤健;血管发生和发展的分子机制[J];生理科学进展;1999年01期
2 韩会萍,张秀荣;通心络胶囊对不稳定型心绞痛患者内皮功能的影响[J];现代中西医结合杂志;2004年03期
3 卓凤巧;通心络胶囊治疗顽固性心力衰竭的疗效观察[J];心血管康复医学杂志;2001年04期
4 张映琦,周华东;通心络胶囊治疗颈动脉粥样硬化的疗效观察[J];中国医院药学杂志;2001年10期
5 廖维靖 ,杨万同 ,刘淑红 ,范明 ,杨运煌 ,刘买利;线栓阻断大鼠大脑中动脉制作缺血性脑损伤模型的改良[J];中华物理医学与康复杂志;2002年06期
6 赵明中,高承梅,张宇洋,汪家瑞;通心络胶囊对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响[J];中华心血管病杂志;2000年03期
7 肖文良,戴华,姜志安,张晓光,赵书健,耿小勇,邰炜彦;通心络胶囊对不稳定性心绞痛患者血管内皮细胞保护作用的研究[J];中华心血管病杂志;2002年05期
8 张晓燕;通心络胶囊治疗高脂血症疗效观察[J];浙江医学;2001年11期
9 邢影,徐忠信,莽靖,钱佳利;大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤血管内皮细胞生长因子表达的研究[J];中国危重病急救医学;2005年03期
10 赵明中,高承梅,张宇洋;通心络胶囊对实验性心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[J];中国中医基础医学杂志;2000年01期
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