收藏本站
《浙江大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

兔骨髓间充质干细胞片(MSCs)包裹新型rhBMP-2-硫酸钙支架修复兔大段尺骨缺损的实验研究

王玉路  
【摘要】:研究背景: 随着我国经济和交通的高速发展,高能量的各种车祸伤创伤等所导致的骨缺损越来越多;以及骨组织感染、肿瘤切除和发育异常等疾病等导致的骨缺损发病率也在增高。这不仅给患者和社会带来沉重的经济负担,而且也严重影响患者的生活质量,是临床治疗的难题。目前,临床多采用新鲜自体骨移植治疗,但由于骨来源的限制、二次损伤及治疗相关并发症等问题,限制了该方法的广泛应用。因此,研究新的治疗策略已十分必要。最近,组织工程技术的发展为治疗大段骨缺损提出了新的思路,即将活细胞体外培养扩增后接种于某些特殊支架材料上,以构建生物人工组织,植入受体后在局部微环境的作用下发挥细胞的成骨效应。 目的: 研究复合重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)硫酸钙支架体外对骨髓间充质干细胞分化的影响;其次,在体内,研究骨髓间充质干细胞(MSCs)包裹的复合重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)硫酸钙人工骨支架修复兔长骨骨缺损的作用与效果。 方法: 1.兔骨髓间充质干细胞的分离与培养:8周龄雄性新西兰大白兔15只,每只动物均行双侧髂骨骨髓穿刺抽取骨髓,体外密度梯度离心法联合细胞贴壁法分离培养扩增新西兰兔MSCs。2.支架对MSCs的成骨分化:将材料做成直径6mm,厚度2mm的圆盘状,放在培养板中,种上密度为5000个/cm2的细胞,常规进行贴壁培养7天、14天后对细胞的碱性磷酸酶含量进行测定。3.干细胞片的制作:将密度为50000个/cm2的细胞悬液用培养基连续培养2-3周,直至形成细胞薄片。将细胞片包裹在硫酸钙支架上备有。4.兔骨缺损修复:选用20只新西兰大白兔,制成单侧前肢15mm的尺骨骨缺损模型,随机分为四组:A组植入单纯硫酸钙支架;B组植入复合重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)硫酸钙支架;C组植入经骨髓间充质干细胞(MSCs)包裹的硫酸钙支架;D组植入骨髓间充质干细胞(MSCs)包裹的复合重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)硫酸钙支架。在术后4周随机处死动物,作下列检测:大体观察、X线检查、microCT、组织学检测、X线片的计算机图像分析、microCT的骨量分析、组织切片的计算机图像分析并对以上结果进行统计学分析。 结果: 1.体外7天测得碱性磷酸酶含量(nmol/s/mg蛋白)为:rhBMP-2-硫酸钙支架组含量为0.51±0.08,比单纯的硫酸钙组(含量为:0.30±0.03)明显升高(p0.05);在14天时,碱性磷酸酶含量rhBMP-2-硫酸钙支架组(1.22±0.21)明显高于单纯硫酸钙组(0.424±0.04),P0.05;但是,在两个时间点上无论是rhBMP-2-硫酸钙支架组还是单纯硫酸钙支架组的碱性磷酸酶含量都明显高于单纯培养瓶组(P0.05)。2.标本大体观察:A组缺损大部分由纤维组织连接;B组与c组大体上区别不大,两组的缺损外缘和中间有很多纤维组织,紧靠挠骨处和两个断端周围都有一定量的骨组织存在;D组缺损几乎都被大量骨组织替代;3.X线检查示:B组与C组无明显差别,但是都优于A组(p0.05);D组优于B组和C组(P0.05)。X线评分所示:D组B组≈C组A组。4.micro CT与骨量分析:在四周后,各组硫酸钙大部分都已经吸收,A组骨组织非常有限;而B组和C组CT扫描显示有大量骨痂生成,但是在缺损中心以及远离挠骨一侧的缺损处骨量很少,并且髓腔结构不明显;在D组,大量骨痂形成,并且骨缺损已经成骨性愈合,可见大部分髓腔阴影。CT骨量分析示:B组与C组无明显差别,但是都优于A组(p0.05);D组优于B组和C组(P0.05)。5.组织学切片与组织学半定量:组织切片结果与microCT相似,组织半定量也显示B组与C组无明显差别,但是都优于A组(p0.05)。 结论: 1.证明硫酸钙支架是生长因子rhBMP-2的良好载体,并可以作为间充质干细胞片附着的良好支架。2.骨髓间充质干细胞片的移植可以有效地促进新骨的生成及骨缺损的愈合。3.rhBMP-2复合硫酸钙诱导成骨的作用也非常明显。4.结论也说明MSCs片包裹的rhBMP-2-硫酸钙支架由于具有成骨的三要素细胞、诱导因子以及支架结构,可以有效地促进新骨的生成,对于长段骨缺损的修复将发挥很大的作用。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R683;R318.08

手机知网App
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陶艳;李东旭;李延报;;可注射磷酸钙骨水泥的研究进展[J];材料导报;2011年03期
2 朱海霖;吴斌伟;冯新星;陈建勇;;丝素蛋白/硅酸钙复合纳米纤维的结构与性能[J];纺织学报;2011年06期
3 戴炜枫;何月英;黄浩燕;郎美东;;官能团化聚己内酯的合成与表征[J];高分子学报;2009年04期
4 戴炜枫;茹敏良;何月英;郎美东;;新型官能团化聚己内酯的研究进展[J];高分子通报;2008年09期
5 葛亮,苟三怀;可注射式人工骨研究进展[J];国外医学.骨科学分册;2005年04期
6 干耀恺;戴尅戎;汤亭亭;;临床细胞加工与细胞治疗[J];国际骨科学杂志;2007年01期
7 陈兴泳;唐洲平;唐荣华;;神经组织工程生物支架材料应用研究[J];神经损伤与功能重建;2007年01期
8 孙浩亮,郭大刚,徐可为,憨勇;仿生浸泡对磷酸钙骨水泥抗压强度的影响[J];硅酸盐学报;2005年01期
9 唐春晖;唐旭东;赖铁鹰;;LIM矿化蛋白-1与LIM矿化蛋白-3共转染骨髓间充质干细胞的基因表达[J];华西医学;2011年09期
10 王莹;李文媛;贾桦;佟晓杰;;黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响[J];解剖科学进展;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 陈硕平;潘玲玲;袁怡儇;袁良杰;;一种类石膏超分子胶凝材料[A];中国化学会2008年中西部地区无机化学、化工学术交流会会议论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩玮;移植胰岛细胞和骨髓单个核细胞治疗糖尿病实验研究[D];新疆医科大学;2010年
2 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
3 刘洪江;骨康含药血清对骨质疏松大鼠MSCs成脂分化调控因子PPARγ的影响[D];广州中医药大学;2011年
4 赵增辉;新型可降解生物活性复合材料聚氨基酸/硫酸钙修复骨缺损的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
5 于智莘;基于-C=O…H-N-氢键的有机小分子凝胶的自组织行为及性质研究[D];吉林大学;2011年
6 赵娜如;生物活性玻璃微纳米粉体的模板仿生合成及其性能研究[D];华南理工大学;2011年
7 赵勇;仿生合成丝素蛋白/羟基磷灰石复合支架材料的骨组织工程研究[D];四川大学;2006年
8 俞麟;可注射性水凝胶的合成、物理凝胶化及其用于药物缓释载体的研究[D];复旦大学;2006年
9 于学忠;骨植入型硫酸钙庆大霉素类释药系统的研制及其相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
10 崔旭;提高柠檬酸化硫酸钙生物活性的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 唐圣奎;丝素蛋白/聚己内酯复合超细纤维支架的制备及性能研究[D];浙江理工大学;2010年
2 徐静;Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定[D];吉林大学;2011年
3 双峰;可注射脱钙骨基质(DBM)修复兔桡骨缺损的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 程自申;可注射人工骨的制备及其在爆裂性骨折中的初步应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
5 陈茜;HAMSC分化过程的生物力学特性及纳米金对血管生成抑制作用的研究[D];暨南大学;2011年
6 任宇;山羊脂肪间充质干细胞的体外分离培养与定向分化[D];内蒙古大学;2011年
7 潘丽;HSV-1感染大鼠骨髓间充质干细胞及形成潜伏感染的初步研究[D];天津医科大学;2008年
8 刘传江;骨髓间充质干细胞在治疗大鼠慢性胰腺炎中的作用[D];山东大学;2011年
9 卢姗姗;复合明胶微球的α-TCP/α-CSH骨水泥支架的制备及载药研究[D];天津大学;2010年
10 赵喆;纳米骨胶的实验研究[D];广州医学院;2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘源!710032西安,金岩!710032西安,George L Tipoe,Thomas YH Lau,赵宇!710032西安;突变受体阻断NIH3T3细胞中rhBMP-2诱导的信号转导[J];中华口腔医学杂志;2000年06期
2 侯劲松;含rhBMP-2聚合物胶囊促进鼠股骨缺损骨再生[J];国外医学.口腔医学分册;2000年03期
3 胡强,艾玉峰,熊猛,张琳西,汤苏阳;体外培养条件下rhBMP-2和TGF-β对兔MSC分化和增殖的影响[J];中国美容医学;2001年03期
4 李中,张成,陈国俊;骨髓间质干细胞治疗肌萎缩症的前景[J];临床神经病学杂志;2003年05期
5 林琳,蔡光先,刘柏炎;细胞外基质对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响[J];中国现代医学杂志;2005年11期
6 尉文华,毛天球,王贺忠,张忠有,陈富林;rhBMP-2、胶原、珊瑚复合人工骨植入智齿牙槽窝的临床研究[J];现代口腔医学杂志;2002年02期
7 徐建强,胡蕴玉,白建萍,吕荣,孙梁,王军;检测rhBMP-2/明胶复合材料的诱导成骨活性:修复兔长骨缺损的实验研究[J];中国临床康复;2002年02期
8 卢丙仑,冯志华,刘宝林,洪咏龙,汤苏阳;人重组骨形成蛋白-2对骨髓成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响[J];中国临床康复;2002年24期
9 陈槐卿,周江,唐艳娟;骨质疏松症与骨髓基质细胞[J];国外医学.内分泌学分册;2003年02期
10 陈平安;间充质干细胞在心肌梗死治疗中的作用[J];岭南心血管病杂志;2003年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高玲;唐黎华;苏笑霄;刘兴冰;吴勇强;;不同气氛下硫酸钙高温分解热力学分析[A];上海市化学化工学会2010年度学术年会论文集[C];2010年
2 崔旭;张伯勋;赵德伟;;三种不同方法制备的硫酸钙片植入修复兔桡骨节段性骨缺损的实验研究[A];2009年全国骨与关节损伤新技术研讨会暨第六届股骨头缺血性坏死修复与再造学习班论文汇编[C];2009年
3 蒋月桂;王宝彦;苟建重;宋健玲;孙斌;;rhBMP-2、Ⅰ型胶原和羟基磷灰石复合型材料作为生物活性盖髓剂的诱导活性研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
4 陈欣欣;朱智敏;;新型磷灰石-硅灰石生物活性玻璃陶瓷/硫酸钙复合材料的研究及制备[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
5 宋红浦;陆建伟;刘宏;张春;;微创可注射型硫酸钙治疗胸腰椎骨折[A];浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十四次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2008年
6 孔卫东;周志迎;赖仁发;;rhBMP-2/胶原膜复合物对大鼠矢状缝快速扩张复发的作用[A];第四军医大学口腔医院2004第七届全国口腔正畸学术会议论文汇编[C];2004年
7 宋红浦;陆建伟;刘宏;张春;;微创可注射型硫酸钙治疗胸腰椎骨折[A];2008年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2008年
8 赵风云;;大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为表皮细胞及皮损修复的实验研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
9 潘锋;柏树令;;骨组织工程MSCs及其种植载体的研究进展[A];中国解剖学会第八届组织学与胚胎学专业青年研讨会论文集[C];2004年
10 王泽红;袁致涛;乔景慧;韩跃新;;硫酸钙晶须制备及其应用[A];第十届全国粉体工程学术会暨相关设备、产品交流会论文专辑[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 魏妍平;MSCs研究列入豫重大攻关计划[N];中国医药报;2004年
2 于建港 邢燕霞;R4网络接口和电路域容灾技术[N];人民邮电;2005年
3 陶永周;州农业行政综合执法支队组织开展肥料市场专项执法检查[N];楚雄日报(汉);2008年
4 记者 雒建民;硫酸钙披上外衣变成了过磷酸钙[N];甘肃经济日报;2006年
5 张中桥;异体MSCs移植有利于梗死心肌功能修复[N];中国医药报;2004年
6 记者 张希;一道全国性环保难题在宁攻克[N];南京日报;2009年
7 宋继文;警惕以磷石膏为原料生产的“化肥”坑农[N];湖北科技报;2007年
8 王剑;兴华化工“三废”成“三宝”[N];黄石日报;2006年
9 记者  时玉田;治污缘何能挣钱?[N];莱芜日报;2006年
10 记者 马悍德 通讯员 张海满;青海破解钾肥生产除钙难题[N];科技日报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 汪炬;rhBMP-2对乳腺癌增殖、迁移及凋亡的影响[D];暨南大学;2010年
2 张铭杰;成人MSCs体外定向成骨分化及激素性股骨头坏死MSCs活性研究[D];广州中医药大学;2011年
3 王玮;RhBMP-2壳聚糖纳米微球及复合人工骨的制备和成骨活性研究[D];南方医科大学;2011年
4 刘欢叶;可注射性纳米晶羟基磷灰石/胶原/硫酸钙复合材料的实验研究[D];中国医科大学;2010年
5 王明波;载rhBMP-2活性肽微球及支架材料研究[D];清华大学;2011年
6 吴慧颖;转染HO-1基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗慢性心衰的实验研究[D];吉林大学;2012年
7 代飞;基因修饰人骨髓间充质干细胞作为骨组织工程异基因种子细胞的实验研究[D];第三军医大学;2004年
8 任晓光;在池沸腾和流动沸腾装置中处理表面上硫酸钙结垢过程研究[D];大连理工大学;1999年
9 温磊;脉冲电流刺激对MSCs与心肌细胞共培养层分化状态的作用研究[D];第三军医大学;2012年
10 李家一;自体骨髓间充质细胞心肌内移植治疗急性心肌梗死的实验研究[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王玉路;兔骨髓间充质干细胞片(MSCs)包裹新型rhBMP-2-硫酸钙支架修复兔大段尺骨缺损的实验研究[D];浙江大学;2011年
2 徐仁伟;焦炭及其杂质对硫酸钙热解过程影响的研究[D];华东理工大学;2011年
3 赖春花;rhBMP-2结合胶原膜在兔颅骨引导骨再生模型中的成骨效应研究[D];南方医科大学;2010年
4 周利民;添加剂对硫酸钙结晶过程的影响[D];天津轻工业学院;2000年
5 廖锋;rhBMP-2膜联合PDLLA-nano/HA夹板、螺钉固定——促进免下颌骨骨折愈合的实验研究[D];武汉大学;2004年
6 付国建;rhBMP-2对肩袖腱—骨界面损伤后愈合影响的组织学及生物力学研究[D];南方医科大学;2010年
7 李想;复合rhBMP-2磷酸钙骨水泥骨修复材料对缺损骨再生的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 陈广东;双相磷酸钙/半水硫酸钙/丝素蛋白/rhBMP-2骨水泥强化绵羊骨缺损椎体的体内实验研究[D];苏州大学;2011年
9 张文涛;rhBMP-2修饰的β-磷酸三钙/胶原材料诱导成牙性能的初步研究[D];浙江大学;2012年
10 许志贤;rhBMP-2复合AGS在大鼠腰椎横突间融合中的实验研究[D];福建医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026