收藏本站
《浙江大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征及上皮-间质转变的体外研究

焦洁  
【摘要】:上皮细胞通过细胞极性和细胞间粘附和紧密连接而发挥功能,但同时也限制了迁移的能力。研究发现,上皮细胞在一些因素的作用下,可发生细胞极性和细胞间粘附或紧密连接的丢失,并得浸润性游走迁移能力,被称为上皮间质转变(epithelial to mesenchymal transition),即EMT。EMT与恶性上皮性肿瘤的发生发展密切相关。近年来发现,肿瘤干细胞(Cancer stem cells, CSCs)也具有EMT能力。我们的前期研究已成功分离、鉴定了上皮性卵巢癌肿瘤干细胞样细胞(CSC-LCs),并初步发现了该细胞的EMT特征。尽管卵巢癌细胞化疗耐药与上皮间质转变之间的关系已经有相关文献报道,且肿瘤干细胞的耐药能力也在先前的研究中得到了证实,但是对卵巢癌肿瘤干细胞本身如何发生EMT的研究还有待完善。原癌基因Cyclin D1在维持肿瘤细胞未分化状态及非锚着悬浮生长中发挥着关键的作用,且多项研究发现Cyclin D1与多种实体肿瘤的远处转移及预后不良密切相关,我们推测该基因在维持卵巢癌肿瘤干细胞自我更新和EMT能力中可能发挥着重要作用。本研究以卵巢腺癌细胞系3AO为模型,从细胞增殖、细胞凋亡、干细胞相关基因表达分析等对CD24-表型细胞的肿瘤干细胞特征进行更深一步的验证,并对CD24-细胞的形态学、生物学特性及Cyclin D1可能的作用进行观察研究。旨在阐明卵巢腺癌细胞系3AO中肿瘤干细胞样细胞的间质细胞特征并具备EMT能力,而Cyclin D1参与其中并发挥了重要作用,提示肿瘤干细胞样细胞的EMT过程参与卵巢癌的侵袭转移的重要性。 第一部分人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征的体外研究 目的: 通过比较CD24-与CD24+细胞的增殖、凋亡能力和分析干细胞相关基因Bmi-1和Oct-4的表达,阐明人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征。 方法: 利用无血清微球体培养法获得3AO肿瘤干细胞样悬浮球体,利用流式细胞分选法分选CD24-及CD24+细胞亚群,采用MTT法检测增殖能力,PE-FITC-PI三色荧光标记法检测不同亚群细胞耐受化疗药物诱导凋亡的能力,Real-time PCR法检测干细胞相关基因Bmi-1和Oct-4的表达。 结果: 1.3AO细胞能在无血清条件下形成自我更新的悬浮球体; 2.3AO细胞中CD24-亚群在低血清状态下比CD24+亚群具有更强的增殖能力; 3.3AO细胞中CD24-亚群比CD24+亚群更能够耐受卡铂诱导的晚期凋亡; 4.CD24-细胞高表达干细胞标记物Bmi-1,并且该基因随着细胞分化表达下调; 5.Oct-4在CD24-和CD24+细胞中表达没有差异,但能随着细胞分化表达下调。 结论: 1.CD24-细胞能够在低血清环境中持续增殖,并且能够耐受化疗药物卡铂诱导的细胞凋亡,提示该表型细胞具有干细胞高增殖力的特性。 2.干细胞标记物Bmi-1在CD24-细胞高表达,且随着分化表达下调,提示Bmi-1在维持卵巢癌CSC-LCs的自我更新能力中的作用具有特异性。 3.干细胞标记物Oct-4在CD24-、CD24+细胞均高表达,且均能随着分化表达下调,在维持以CD24-为表型的卵巢癌CSC-LCs的自我更新能力中的作用不具备特异性。 第二部分Cyclin D1参与维持卵巢癌肿瘤干细胞样细胞EMT能力的体外研究 目的: 探讨Cyclin D1在维持3AO细胞系中肿瘤干细胞样细胞EMT能力中的作用及可能的机制。方法: 观察新鲜分选的CD24-和CD24+细胞在分化培养基条件下细胞形态的变化,划痕试验检测富集CD24-表型的悬浮球体细胞的迁移能力,Real-time PCR法检测EMT相关分子E-cadherin和Vimentin的表达。合成特异性靶向Cyclin D1的siRNA,转染入3AO球状细胞中,沉默Cyclin D1的表达,观察沉默后3AO悬浮球状细胞增殖、凋亡、迁移能力的变化以及EMT相关分子的表达改变。 结果: 1.CD24-细胞的形态具有间质细胞特点,随着分化重新形成铺路石样形态; 2.富集CD24-表型的悬浮球体细胞具有更强的迁移能力; 3.CD24-细胞缺失表达粘附分子E-cadherin,并且随着细胞分化重新获得表达; 4.CD24-细胞高表达波形蛋白Vimentin,并且随着细胞分化表达下调。 5. Cyclin D1沉默后球状细胞增殖能力下降; 6. Cyclin D1沉默后球状细胞迁移能力下降; 7. Cyclin D1沉默后球状细胞凋亡能力增加; 8. Cyclin D1沉默后伴随着EMT相关分子N-cadherin和Vimentin的表达下调; 结论: 1.CD24-细胞具备EMT表型,并且该表型随着细胞分化会发生逆转。 2. Cyclin D1能促进卵巢癌肿瘤干细胞样细胞增殖、迁移,抑制其凋亡,并诱导EMT相关表型改变,提示Cyclin D1参与维持卵巢癌肿瘤干细胞样细胞的EMT能力。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R737.31

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;仁济医院首次成功分离卵巢癌干细胞[J];上海交通大学学报(医学版);2008年08期
2 ;“仁济”首次成功分离卵巢癌干细胞[J];上海交通大学学报(医学版);2008年09期
3 王静,王修杰;脑肿瘤干细胞的生物学特性[J];中华神经医学杂志;2005年10期
4 宁武;;肿瘤干细胞的潜在作用[J];国际药学研究杂志;2008年02期
5 王小利;任军;;肿瘤干细胞与肿瘤治疗的新靶点[J];药物与人;2008年04期
6 彭力,姚开泰;肿瘤干细胞研究进展[J];国际肿瘤学杂志;1986年05期
7 彭力;姚开泰;;抗癌药物杀伤瘤细胞群体和干细胞的研究(摘要)[J];肿瘤学杂志;1987年S1期
8 冯波,刘炳亚,陆爱国,郑民华;肿瘤干细胞与实体肿瘤[J];世界华人消化杂志;2004年04期
9 彭广新;李大鹏;;肿瘤干细胞与恶性肿瘤的靶向治疗[J];中国肿瘤临床;2006年07期
10 刘虹麟;娄晋宁;;肿瘤干细胞生物学特性的研究进展[J];医学研究杂志;2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 金润铭;;肿瘤干细胞及其生物学特点[A];基因开启未来:新时代的遗传学与科技进步——湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2009年
2 魏湲颜;江建海;;N-糖链在肿瘤干细胞中的功能和调控[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
3 张宏权;;肿瘤干细胞与肿瘤的侵袭与转移[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会报告集[C];2011年
4 曲学彬;李晶;赵春华;;慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫调节功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
5 全军民;汪静;卢菲;任骐;叶涛;张慧;;肿瘤干细胞特异性靶标的发现及小分子抑制剂的研究[A];中国化学会第28届学术年会第3分会场摘要集[C];2012年
6 姚晨;;肝癌与肝肿瘤干细胞的研究进展(综述)[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
7 王欣荣;单保恩;艾军;刘月彩;张超;张海谱;;无血清悬浮培养法富集小鼠乳腺癌系4T1中肿瘤干细胞的初步研究[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
8 李海英;贺晓;陶虹;郭克;冯丹妮;白洁;扈启宽;;甲基化抑制剂对肿瘤干细胞自我复制和致瘤性的影响[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
9 余茜颖;郭黎平;陆士新;;miR-203调控食管癌干细胞自我更新的研究[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
10 米彦军;符立梧;;Axitinib对肿瘤干细胞样细胞的作用及其机制研究[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 杨帆 实习生 杨周;“肿瘤干细胞研究”在渝实施[N];重庆日报;2009年
2 何雷;“973”计划肿瘤干细胞项目启动[N];健康报;2009年
3 衣晓峰 蓝建中;三氧化二砷可击杀肿瘤干细胞[N];医药经济报;2010年
4 记者 衣晓峰 靳万庆;三氧化二砷可击杀肿瘤干细胞[N];中国中医药报;2010年
5 吕斌;湖南湘雅医院发现肿瘤干细胞[N];医药导报(中药报);2004年
6 衣晓峰;三氧化二砷可杀伤肿瘤干细胞[N];中国医药报;2010年
7 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;肿瘤干细胞将成治癌新靶点[N];医药经济报;2003年
8 上海交通大学附属仁济医院副院长 陈芳源;克制肿瘤干细胞 血液肿瘤治疗新机制[N];健康报;2010年
9 胡卫娜;大爱铸就生命之盾[N];科技日报;2011年
10 高凡;化疗或是癌症复发根源[N];科学导报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马波;人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的分离鉴定及相关表面标志的初步研究[D];复旦大学;2011年
2 李艳;裸鼠荷人卵巢癌皮下移植瘤模型的建立及药效研究和基因突变的检测[D];天津医科大学;2012年
3 刘虹麟;肿瘤干细胞向不同肿瘤细胞分化的实验研究[D];中国协和医科大学;2009年
4 谷超;单克隆抗体A3D8对三种人卵巢癌CSC-LCs生物学行为的影响及机制的初步研究[D];天津医科大学;2012年
5 邹游;周期诱导联合化疗后耐药肿瘤细胞亚群与肿瘤干细胞相关性的研究[D];华中科技大学;2011年
6 吴国民;口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定[D];吉林大学;2011年
7 黄名威;乳腺癌MCF7细胞株中肿瘤干细胞的增殖及相关蛋白研究[D];广西医科大学;2010年
8 杜湧瑞;人卵巢癌干祖/细胞的分离、鉴定及抗CD44 单克隆抗体对其生物学行为影响的研究[D];天津医科大学;2009年
9 贾勇圣;Oct4对肿瘤干细胞成瘤能力和多向分化潜能的影响[D];北京协和医学院;2011年
10 李锋;肿瘤干细胞标记物检测对Ⅰ期肺癌患者术后复发的预测价值及机制学研究[D];浙江大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 焦洁;人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征及上皮-间质转变的体外研究[D];浙江大学;2011年
2 保秋萍;多发性骨髓瘤U266细胞株中肿瘤干细胞的分离及生物学特性的初步研究[D];昆明医学院;2011年
3 陈坤;人喉癌细胞系Hep-2中的肿瘤干细胞与放疗抵抗关系的初步研究[D];河北医科大学;2010年
4 孙晓彤;胃癌中肿瘤干细胞标志物的初步鉴定、表达及其临床病理学意义[D];兰州大学;2010年
5 黄稳定;肿瘤干细胞标志物CD133及胚胎干细胞Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中的表达及意义[D];第二军医大学;2010年
6 陈炬莹;乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究[D];福建医科大学;2010年
7 王建鹏;Notch-1基因下调诱导GBM肿瘤干细胞肿瘤细胞凋亡的试验研究[D];青岛大学;2010年
8 安勇;体外吉西他滨筛选富集人胰腺癌细胞株SW1990肿瘤干细胞的研究[D];南京医科大学;2010年
9 武加利;人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定[D];青岛大学;2011年
10 王蒙;原发性乳腺癌患者循环肿瘤细胞及肿瘤干细胞的检测及临床意义[D];河北医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026