收藏本站
《浙江大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

稻瘟病菌亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MoMET13)功能的初步研究

王红  
【摘要】:本文利用农杆菌介导的ATMT转化技术成功获得一个稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)致病缺陷突变体Wh-672,并鉴定了T-DNA标记的基因MoMET13,进而通过敲除和互补验证对MoMET13的生物学功能做了初步分析。 利用农杆菌介导转化法(ATMT)筛选出一个对大麦和水稻都完全失去致病性的稻瘟病菌突变体Wh-672。Wh-672在CM培养基上菌落生长速率明显减慢,菌落白色,无气生菌丝,不产生分生孢子。采用hiTAIL-PCR的方法扩增了T-DNA右边界的610bp基因组DNA序列,并克隆到pGEM-Teasy载体上。测序和BLAST分析结果显示,T-DNA标记基因编号为MGG_01728.6,该基因位于第1染色体的Supercontig 27内,由1948个碱基组成,编码627个氨基酸,内有2个外显子和1个内含子,T-DNA插入位点在MoMET13基因起始密码上游815bp处。MGG 01728与Sc MET13和Sp MET9的同源性分别为46.9%,48.03%,这些序列属于亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)超家族成员。 通过构建MoMET13基因敲除载体和稻瘟病菌原生质体转化得到96个转化子,并通过PCR和Southern杂交筛选出4个MoMET13基因敲除转化子。突变体表型分析结果表明,△Momet13突变体不能在缺甲硫氨酸的基本培养基上生长,对寄主的致病性丧失,其它表型也与Wh-672突变体完全一致。为了进一步验证突变体Wh-672的表型改变是由T-DNA插入引起的,构建了融合MoMETl3和绿色荧光蛋白基因GFP的互补载体,分别对Wh-672和△Momet13突变体进行了互补转化,获得58个互补转化子。选取转化子672-hb3进行表型互补分析,结果显示突变体的所有表型均得到恢复。通过激光扫描共聚焦显微镜在672-hb3的菌丝、孢子和附着胞内几乎都观察不到GFP绿色荧光,说明MoMET13基因在营养生长、产孢和附着胞形成过程中低水平表达。 生物信息学分析表明,在稻瘟病菌中除MoMET13外,MoMET12也可编码亚甲基四氢叶酸还原酶,它们分别与酿酒酵母(S. cerevisiae)的MET13和MET12同源。为进一步了解稻瘟病菌MoMET12基因的功能,通过构建MoMET12基因敲除载体和原生质体转化得到269个转化子,用PCR的方法筛选出4个敲除转化子,△Momet12突变体与△Momet13突变体类似也不能在缺甲硫氨酸的基本培养基上正常生长,但△Momet12突变体的其它表型(如产孢、致病性等)与野生菌株Guy11基本一致。 综合上述,亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MoMET3)在稻瘟病菌致病过程中起关键作用。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S435.111

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 黄亚丽;潘玮;蒋细良;郭平;田云龙;李记鹏;朱昌雄;;根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展[J];生物技术通报;2007年03期
2 黄卫,汪天虹,吴志红,吴静,李滢冰;丝状真菌遗传转化系统研究进展[J];微生物学杂志;2000年03期
3 刘朋娟;王政逸;王秋华;李德葆;;农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选[J];中国水稻科学;2006年03期
4 方丽;刘海青;宋凤鸣;郑重;;农杆菌介导的黄瓜炭疽菌遗传转化[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2006年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈东亮;李纪元;范正琪;范妙华;;根癌农杆菌介导真菌遗传转化的影响因素及应用[J];安徽农业科学;2010年07期
2 张霞;宋瑞清;邓勋;;黑木耳YBS-3菌株ras启动子的克隆与分析[J];安徽农业科学;2011年17期
3 韩伟;;食用菌遗传操作技术与基因功能的研究进展[J];安徽农业科学;2011年34期
4 苗灵凤;刘运广;杨帆;;TAIL-PCR技术及其在医学上的应用[J];重庆医学;2007年10期
5 张娇;谷守芹;李青为;韩建民;董金皋;;根癌农杆菌介导的玉米大斑病菌转化条件的优化[J];河北农业大学学报;2010年04期
6 陈茂功;林小虎;李洪杰;王晓鸣;周印富;;玉米弯孢叶斑病菌ATMT转化条件优化及转GFP单孢的获得[J];河北科技师范学院学报;2011年03期
7 苏彩云;靳发彬;张佳;丰枚枚;张春珍;王红怡;代明伟;;丝状真菌的DNA转化方法[J];河北化工;2007年07期
8 朱咏华;吴康;郑芒;靳冉;廖红东;刘选明;;根癌农杆菌介导的丝状真菌简青霉遗传转化的研究[J];湖南大学学报(自然科学版);2010年10期
9 张泽民;朱海涛;王江;高菊;陈兆贵;刘芳;宛新杉;张景六;张桂权;;T-DNA插入产生的水稻白化苗突变的遗传分析[J];华南农业大学学报;2007年03期
10 张霞;宋瑞清;邓勋;;黑木耳YBS-3菌株ras启动子的克隆与分析(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 李欣龙;张敏;段霞瑜;周益林;;丝状真菌遗传转化系统的研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
2 郝小丽;韦建福;魏士平;姚元红;;限制性内切酶介导整合技术在真菌功能基因研究中的应用[A];中国植病、菌物学会杭州联合年会论文集[C];2008年
3 姚元红;韦建福;郝小丽;;根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化[A];中国植病、菌物学会杭州联合年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冯宝珍;辣椒疫霉(Phytophthora capsici)诱导坏死蛋白基因克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
2 洪伟雄;甘蔗梢腐病病原菌—串珠镰刀菌分子生物学研究初探[D];福建农林大学;2011年
3 陈美元;双孢蘑菇基质降解能力退化分子机理的初步研究[D];福建农林大学;2011年
4 李松;米根霉CICIM F0071α-淀粉酶:基因克隆、鉴定与异源表达[D];江南大学;2011年
5 王璐;农杆菌介导转化及原生质体融合法选育红曲菌Monacolin K高产株[D];江南大学;2011年
6 张海峰;稻瘟病菌G蛋白及MAPK信号途径相关基因的功能分析[D];南京农业大学;2011年
7 严蕾艳;灰霉病菌双组分组氨酸激酶信号途径上五个关键基因的功能研究[D];浙江大学;2011年
8 廖红东;磁性纳米颗粒固定纤维素酶和产酶丝状真菌转化的研究[D];湖南大学;2010年
9 史建荣;小麦赤霉病菌与寄主小麦的互作研究[D];南京农业大学;2000年
10 王政逸;稻瘟病菌异柠檬酸裂解酶基因(ICL1)在致病过程中的作用[D];浙江大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李瑞清;水稻白化转绿突变体G_9的特性分析和基因定位研究[D];安徽农业大学;2010年
2 李巍;转基因金针菇和番茄中碱性成纤维细胞生长因子的表达[D];吉林农业大学;2011年
3 汪佳妮;大丽轮枝菌Vd991 T-DNA插入突变体库的构建及致病相关基因的筛选[D];中国农业科学院;2011年
4 赵津津;蜡蚧轮枝菌“Lecanicillium lecanii(Zimmerman)Viegas”苯菌灵抗性基因转化的研究[D];中国农业科学院;2011年
5 刘迅;绿僵菌在土壤中宿存时空动态研究[D];中国农业科学院;2011年
6 杨歆璇;香蕉枯萎病病原菌转化体系的建立及FEM1基因功能的初探[D];海南大学;2011年
7 任楠;根癌农杆菌介导泡盛曲霉转化的研究[D];华南理工大学;2011年
8 李俊星;根癌农杆菌介导的丝状真菌转化及脂肪酶基因表达的研究[D];华南理工大学;2011年
9 吴磊;轮枝镰孢的荧光标记及其在寄主—病原菌互作中的应用[D];河北科技师范学院;2011年
10 成平;植物抗病基因sncl在超级杂交稻亲本中的遗传转化研究[D];湖南农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 汪天虹,吴静,邹玉霞;瑞氏木霉分子生物学研究进展[J];菌物系统;2000年01期
2 王政逸,李德葆;限制酶介导的插入突变及其在丝状真菌中的应用[J];菌物系统;2001年01期
3 高兴喜,杨谦;根癌农杆菌介导的CryⅠA(b)基因在毛壳菌中的转化[J];农业环境科学学报;2005年01期
4 方卫国,张永军,杨星勇,裴炎;根癌农杆菌介导真菌遗传转化的研究进展[J];中国生物工程杂志;2002年05期
5 高兴喜,杨谦,郭兆奎,宋金柱;影响根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化因素分析[J];微生物学通报;2005年01期
6 李维,张义正;根癌农杆菌介导的白腐丝状真菌——黄孢原毛平革菌的转化[J];微生物学报;2005年05期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李宏宇;稻瘟病菌T-DNA插入突变研究[D];福建农林大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李模孝;盾壳霉T-DNA标记插入突变体库的构建及其质量评估[D];华中农业大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 鲁国东;稻瘟病菌转化体系的建立及3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)的克隆[J];植物病理学报;1998年01期
2 鲁国东;黄大年;谢联辉;;稻瘟病菌的电击转化[J];福建农业大学学报;1997年03期
3 鲁国东,黄大年,陶全洲,杨炜,谢联辉;以cosmid质粒为载体的稻瘟病菌转化体系的建立及病菌基因文库的构建[J];中国水稻科学;1995年03期
4 张永庆;赵明富;何月秋;;稻瘟病菌诱导突变研究进展[J];云南农业大学学报;2006年01期
5 吴毅歆;范成明;周惠萍;久保康之;何月秋;;一种农杆菌介导稻瘟病菌的遗传转化[J];植物保护学报;2008年05期
6 岳宗岱;;稻瘟病菌生存力的观察[J];微生物学报;1974年02期
7 李桦;稻瘟病菌培养技术的研究[J];植物保护;1986年04期
8 A.O.Mackill;吕中平;;稻瘟病菌(Piricularia oryzae)的新寄主[J];植物医生;1987年02期
9 董国堃;宣伯承;;早稻稻瘟病大流行的成因条件及防治对策[J];中国农学通报;1989年02期
10 翁启勇,甘代耀,陈体强;稻瘟病菌染色体核型电泳条件研究初报[J];福建农业学报;1997年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 彭友良;杨俊;王维香;赵晓燕;许金荣;王大伟;孙静;;RNA剪切体组分作为稻瘟病菌的一类新致病因子[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 杨俊;王维香;赵文生;孔令安;孙静;薛敏峰;陈小林;王大伟;王瑞金;王立霞;张燕;许金荣;彭友良;;Con2作为剪切体的新成员控制稻瘟病菌的致病性和分生孢子产生[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
3 何月秋;唐文华;HeiLeungRobertS.Zeigler;;稻瘟病菌致病突变株的分离[A];中国植病学会西南联合学术年会论文集[C];2000年
4 卢建平;刘同宝;刘小红;林福呈;;稻瘟病菌基因组学的研究[A];2003’华东植物病理学术研讨会暨江苏省植物病理学会第十次会员代表大会论文集[C];2003年
5 刘娟;周益军;范永坚;;稻瘟病菌无毒基因的分子标记[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
6 朱晓寒;周腾胜;陈继圣;王宗华;;稻瘟病菌中一个假定的ADP核糖基化因子ARF6的功能分析[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 方峰;李盾;张明;;稻瘟病菌抗药性研究概况[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
8 张海峰;赵倩;张幸;张正光;王源超;郑小波;;稻瘟病菌磷酸二酯酶基因的功能研究[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 穆常青;刘雪;潘玮;陆庆光;蒋细良;朱昌雄;;枯草芽孢杆菌B-332菌株对稻瘟病的防治效果及定殖作用研究[A];第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会论文集[C];2006年
10 刘永锋;俞文渊;陈志谊;刘邮洲;聂亚锋;于俊杰;;水稻稻瘟病菌孢子萌发特性及其分泌蛋白质研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 冯国明;近年稻瘟病为何高发[N];湖南科技报;2007年
2 本报记者 卢育辉 梁少棉;我省攻克稻瘟病世界性难题[N];广东科技报;2006年
3 刘在军;引进推广抗病新品种是首选[N];白银日报;2007年
4 水清;防治穗颈瘟,水稻破口期用药是关键[N];江苏农业科技报;2008年
5 省农科院植保所 陈志谊;水稻三大病害抗性育种有待加强[N];江苏农业科技报;2008年
6 通讯员 王洋 吴剑;市农科院抓好“五个基本”建设[N];黄冈日报;2010年
7 记者 耀辉;云南5成果喜获国家科技奖[N];云南经济日报;2006年
8 张尚武;加强水稻病虫害监控[N];湖南日报;2008年
9 晓春;特种稻种植的尴尬[N];山东科技报;2007年
10 杨俊 本报记者 王欢;“穗颈瘟”为何肆虐万亩稻田[N];四川日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张海峰;稻瘟病菌G蛋白及MAPK信号途径相关基因的功能分析[D];南京农业大学;2011年
2 李宏宇;稻瘟病菌T-DNA插入突变研究[D];福建农林大学;2003年
3 徐飞;基于结构的对于水稻和稻瘟病菌相互作用所包含蛋白的计算研究[D];浙江大学;2009年
4 翟焕趁;稻瘟病菌菌株FJ81278无毒基因Avr-Pid2的定位及深度测序分析[D];福建农林大学;2011年
5 刘同宝;稻瘟病菌细胞自噬相关基因MgATG4表达模式与功能分析[D];浙江大学;2008年
6 林艳;稻瘟病菌两个新基因的功能研究[D];福建农林大学;2007年
7 王立安;钙信号传导途径参与稻瘟病菌生长及致病性的调控[D];南京农业大学;2004年
8 贺闽;植物病原真菌与昆虫病原真菌侵染寄主表皮的分子机制研究[D];重庆大学;2012年
9 刘二明;水稻品种与稻瘟病菌的遗传多样性及稻瘟病持续控制研究[D];四川农业大学;2001年
10 林雄杰;稻瘟病菌Rab5互作蛋白研究[D];福建农林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王红;稻瘟病菌亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MoMET13)功能的初步研究[D];浙江大学;2011年
2 陈春南;稻瘟病菌81278ZB15 BAC克隆子805L15中7个假定分泌蛋白的功能分析[D];福建农林大学;2010年
3 姜凯;水稻纹枯病及稻瘟病拮抗菌的分离与抗性成分分析[D];四川农业大学;2010年
4 刘娟;稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)致病相关基因的分子标记及克隆[D];南京农业大学;2003年
5 杨帆;稻瘟病菌Rho2同源蛋白的功能分析[D];福建农林大学;2010年
6 樊改丽;稻瘟病菌定殖与扩展相关基因MgGLK1,MgMFS1和MgHAP的克隆与功能分析[D];福建农林大学;2011年
7 潘初沂;稻瘟病菌T-DNA插入致病突变体的分析[D];福建农林大学;2004年
8 刘朋娟;农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的稻瘟病菌转化及致病突变体的筛选[D];浙江大学;2005年
9 赵玉峰;一株稻瘟病拮抗菌株的筛选、诱变育种及抗菌谱测定[D];河南工业大学;2010年
10 林成增;稻瘟病菌假定几丁质酶基因功能分析[D];福建农林大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026