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《浙江大学》 2011年
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蜂胶对血管内皮细胞的影响及其分子机制

玄红专  
【摘要】:蜂胶是西方蜜蜂采集树脂并混入蜂蜡、花粉及自身腺体分泌物所得到的一种天然产物,具有广泛的生物学活性和药理作用,如抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗炎症、抗氧化、抗肿瘤以及抑制血管生成等,因而被广泛应用于食品和保健品行业,以增进人体健康和预防疾病如炎症、心血管疾病、糖尿病和肿瘤等。 我们前期动物实验表明,蜂胶具有降血糖、降血脂、抗炎症等功效,但是作用机理还不完全清楚。血管内皮对维持血管正常功能非常重要,内皮细胞损伤或功能异常引起多种炎症和退行性疾病,如糖尿病、动脉粥样硬化、高血压、心肌缺血和肿瘤等。因此,调控血管内皮细胞凋亡,维持其正常的功能引起研究者的重视。苗俊英等研究发现膜整联蛋白β4参与正常血管内皮细胞凋亡信号转导过程,并指出正常细胞中的膜整连蛋白β4通过磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(PC-PLC)、反应活性氧(ROS)、p53等信号分子调控血管内皮细胞的凋亡。目前还没有关于蜂胶对膜整连蛋白β4和PC-PLC信号通路的研究报道。因此,本实验通过在体外建立不同的血管内皮细胞损伤模型,即去除血清和生长因子诱导血管内皮细胞凋亡、脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞损伤以及氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞损伤,深入研究巴西蜂胶和中国蜂胶对膜整连蛋白β4及其下游信号分子PC-PLC、ROS、p53以及线粒体膜电位的影响,以及在炎症条件下,巴西蜂胶和中国蜂胶对Toll样受体4(TLR4)的影响,为阐明蜂胶影响血管内皮细胞的作用机制提供实验依据,同时为研究蜂胶辅助治疗糖尿病、心血管疾病以及炎症提供理论依据。 主要研究结果如下: 1.在去除血清和生长因子的条件下,高剂量的巴西蜂胶显著提高膜整连蛋白β4、p53和ROS水平,并降低线粒体膜电位,诱导血管内皮细胞凋亡。而低剂量的巴西蜂胶和中国蜂胶显著地降低膜整连蛋白β4、PC-PLC、p53和ROS水平,保护血管内皮细胞。但高剂量的中国蜂胶也破坏线粒体膜电位,是潜在的凋亡诱导剂。 2.在LPS诱导的血管内皮细胞中,巴西蜂胶(6.25,12.5和25μg/ml)和中国蜂胶(12.5μg/ml)均降低TLR4的表达以及PC-PLC的活性,进而抑制下游信号分子NF-κB p65、ROS和NO的水平,抑制LPS诱导的血管内皮细胞损伤。 3.在ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤条件下,巴西蜂胶(6.25,12.5和25μg/ml)和中国蜂胶(12.5μg/ml)均降低PC-PLC的活性和ROS的水平,抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。 总之,通过巴西蜂胶和中国蜂胶在体外对血管内皮细胞影响的研究,我们发现巴西蜂胶和中国蜂胶对血管内皮细胞的影响具有剂量依赖性,低浓度的巴西蜂胶和中国蜂胶保护血管内皮细胞,而高浓度的巴西蜂胶和中国蜂胶诱导血管内皮细胞凋亡,具有细胞毒性。
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