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《浙江大学》 2011年
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球孢白僵菌两种甘露醇脱氢酶及五种过氧化氢酶的功能分析与对鳞翅目幼虫高口服毒力的工程菌株构建

王正亮  
【摘要】:球孢白僵菌已被开发成多种制剂应用于农林害虫的防治,但其田间防治效果受环境因子的制约,这是制约真菌杀虫剂大规模应用推广的技术瓶颈和亟待解决的国际难题。开展白僵菌抗逆生物学研究,揭示抗逆性状的分子基础,定向遗传改良生产菌株的抗逆力和毒力,是提升生防真菌制剂质量和田间应用稳定性的核心技术途径。 甘露醇是生物体内广泛存在的小分子多元醇,作为碳源储备物,也参与真菌的抗逆境胁迫生理反应。过氧化氢酶是细胞抗氧化酶系的重要成员,在细胞抵抗活性氧自由基(Reactive oxygen species, ROS)胁迫过程中发挥着重要的作用。目前在生防真菌中有关甘露醇代谢相关酶系的生物学功能知之有限,对过氧化氢酶在抗逆反应中的作用也鲜有研究报道。另外,将外源苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)营养期杀虫蛋白Vip3Aa1基因置于构巢曲霉组成型通用启动子PgpdA下导入球孢白僵菌中能有效提高工程菌株对斜纹夜蛾低龄幼虫的毒力,但受启动子驱动力的影响,Vip3Aal毒蛋白的表达量不足以致死高龄的叶面暴食性害虫。为此,本论文从揭示球孢白僵菌抗逆生物学机理及提高菌株口服毒力的角度出发,运用农杆菌介导的同源重组以及芽生孢子化学转化法,系统研究了球孢白僵菌中甘露醇代谢相关酶和过氧化氢酶的基因家族的时空表达情况以及各基因缺失对菌株抗逆力和毒力的影响;以球孢白僵菌自身疏水蛋白基因启动子的克隆及优化为切入点,构建了高表达Vip3Aa1蛋白的球孢白僵菌工程菌株,并评价了其对斜纹夜蛾各龄幼虫双途径感染的杀虫活性。主要研究内容及结果如下: 甘露醇1-磷酸脱氢酶(mannitol1-phosphate dehydrogenase, MPD)的基因克隆、表达纯化及酶学特征分析通过序列比对及简并引物扩增,从球孢白僵菌Bb2860基因组中克隆到甘露醇1-磷酸脱氢酶基因BbMPD,序列全长1334bp,其开放阅读框(open reading frame, ORF)长1176bp,含一个158bp的内含子,编码一条由391个氨基酸组成的典型的真菌甘露醇1-磷酸脱氢酶,预测分子量为42.8kDa,与已知的其它17种真菌MPD蛋白的序列同源性为56~74%,且在N端含有一个NADH辅因子结合域(GAGRIG)。在大肠杆菌中成功表达了BbMPD的重组蛋白,其纯化产物的最适反应温度为30℃,最适反应pH7.0,对果糖6-磷酸具有底物专一性,米氏常数Km和Vmax积分别为0.89±0.05mM和913.5±14.9U/mg蛋白,还原D-果糖6-磷酸的催化效率(kcat/Km)为1.31×104mM-1s-1。 甘露醇脱氢酶(mannitol dehydrogenase, MTD)的基因克隆及两个脱氢酶基因的表达调控首次从Bb2860基因组中克隆到甘露醇脱氢酶基因BbMTD,其上游序列有3个胁迫响应元件(AGGGG)和5个碳利用阻遏元件CREA (Carbon catabolite repression element, SYGGRG)附着位点的保守序列;ORF全长801bp,编码266个氨基酸,蛋白分子量和等电点分别为28.2kDa和6.6,与其它真菌MTD的同源性较高,N端第28个氨基酸处存在一个NADPH辅因子结合域(GPKGIG)。 BbMTD在菌丝生长的前五天转录表达水平逐步递增,第五天的表达量约为第二天的20倍,但在此后的两天里又有所下降。BbMPD的转录水平在连续七天培养过程中保持相对恒定,第4天表达水平最高。在1M NaCl的渗透压胁迫和50mM H202的氧化胁迫下,基因表达均呈现随胁迫时间延长而显著上调的趋势,渗透压胁迫3h后的BbMTD和BbMPD基因表达水平分别较空白对照提高了5.0和10.9倍;相应基因的转录水平在氧化胁迫3h后分别上调了11.4和74.9倍。两基因在热胁迫条件下的表达水平均受抑制,热激3h后,BbMPD的表达水平为正常条件下的63%,而BbMTD只有一半左右。结果表明,两基因均参与球孢白僵菌抵抗逆境胁迫的防御反应。 BbMPD和BbMTD基因的敲除及突变株表型分析应用根癌农杆菌介导的遗传转化方法成功构建BbMPD和BbMTD基因的缺失突变株ΔBbMPD和ABbMTD。酶活分析显示,BbMPD和BbMTD均是球孢白僵菌甘露醇代谢的关键催化酶,ΔBbMPD菌株粗酶液无法还原果糖6-磷酸,而ABbMTD有低水平的酶活残留。无论是在固体SDAY平板正常条件下生长,还是在液体SDB胁迫条件下培养,单基因敲除株胞内甘露醇含量均显著低于野生株。在正常生长条件下,ΔBbMPD和ΔBbMTD菌丝(或分生孢子)中甘露醇的含量分别减少了68%(83%)和16%(38%)。渗透压能诱导菌株胞内甘露醇的合成,1M NaCl刺激24h后,ΔBbMPD和ΔBbMTD菌丝甘露醇含量分别提高3.0和1.7倍。而热激培养则抑制其合成,35℃下培养一天,相应的甘露醇合成水平只有正常培养条件下的40.7%和62.3%。有趣的是,各菌株胞内甘露醇合成的减少伴随着海藻糖含量的上升。例如,正常平板培养条件下,ΔBbMPD菌丝和分生孢子中海藻糖的含量较野生株分别提高1.7倍和1.5倍。 除胞内可溶性甘露醇和海藻糖含量变化外,BbMPD基因的敲除显著影响菌株的产孢能力(下降27%),而ΔBbMTD菌株的产孢则不受影响。两敲除株菌丝和孢子在不同的单一碳源培养基上培养时表型差异明显。ΔBbMPD菌丝生长速度不受影响,但分生孢子的萌发速率较野生株显著降低,在以果糖,葡萄糖和甘露醇为单一碳源平板上孢子萌发50%所需的时间(GT50)分别延迟3.0、3.1和6.6h;ΔBbMTD菌丝生长则受到显著抑制,但其分生孢子除在甘露醇平板上萌发延迟之外(GTso后延7.1h),萌发速率在其他碳源平板上差异不显著。抗逆力测定显示,甘露醇合成受阻能致球孢白僵菌的分生孢子对活性氧、高温、紫外等环境胁迫的适应能力显著下降。ΔBbMPD和ΔBbMTD分生孢子对H202的耐受力分别较野生株下降38%和18%,对UV-B辐射的耐受力(LDso:0.26和0.36J/cm2)比野生株(LD50:0.42J/cm2)分别下降39%和16%,对45℃热胁迫的耐受力(LT50:39.0min和46.1min)比野生株(52.0min)分别下降22%和11%。然而,上述基因的缺失不显著影响菌株对桃蚜的毒力以及对高渗透压胁迫的耐受力。 球孢白僵菌过氧化氢酶(Catalase,CAT)基因家族的克隆、序列分析及表达调控通过保守序列比对从球孢白僵菌2860基因组中克隆到五个CAT基因,分别编码三种单功能CAT (BbcatA、 BbcatB和BbcatC)和两种双功能CAT (BbcatP和BbcatD)。其中,BbcatC为小亚基酶,蛋白序列中含有NADPH绑定域,其余四种均为大亚基酶。通过进化树构建分析表明,五种CAT分别属于不同的蛋白家族。其中,BbcatA属于cladeA(孢子特异性CAT),主要参与分生孢子的形成及发育过程,其基因转录表达水平在产孢过程中逐渐累积,而在孢子萌发和菌丝开始生长过程中大幅降低;氧化胁迫能提高该基因转录水平,50mM H202胁迫3h的表达水平为空白对照的4.5倍。BbcatB和BbcatD属于clade B(分泌性CAT),在蛋白N端均含有一段19个氨基酸的分泌信号肽。BbcatB基因的表达水平随菌落生长时间延长而逐渐上调,第7天的转录水平达到第二天的30.2倍。BbcatD基因的表达在生长的前5天内保持较低的水平,而在第6天和第7天显著增强,分别达到第二天的53.1和158.3倍。氧化胁迫均能诱导BbcatB和BbcatD基因的表达,分别提高8.6和6.9倍。BbcatC和BbcatP均属于clade P(过氧化物酶体CAT),它们分别在蛋白中间段和C端含有PTS信号序列。BbcatC基因在菌丝生长过程中的转录表达量逐渐上升,而BbcatP基因在7天的菌落生长过程中其表达水平相对平稳。与其他四种CAT基因的表达水平相比,BbcatP基因受H202胁迫的影响最为显著,3h胁迫处理后,其转录水平较正常条件提高13.5倍。结果表明,各CAT在球孢白僵菌生长发育过程中扮演不同的角色,且不同程度地参与氧化胁迫的防御反应。 球孢白僵菌五种过氧化氢酶的生物学功能分析应用根癌农杆菌介导的遗传转化方法成功构建球孢白僵菌各CAT基因的单敲除株。酶活测定显示,正常生长条件下,菌丝CAT活力主要取决于BbcatB、 BbcatP和BbcatD。活性染色PAGE凝胶上仅呈现BbcatB(高)和BbcatP(低)两条酶带,氧化胁迫及热激等胁迫条件并不能改变相应的酶谱类型。抗逆力测定表明,ΔBbcatC和ΔBbcatP菌丝对氧化胁迫十分敏感,50mM H202几乎完全抑制.ΔBbcatP菌落的生长,而其它三种CAT的缺失突变株的菌落生长没有受到明显抑制。ABbcatB菌落生长在含4mM甲萘醌的培养基上明显受抑制,其他CAT基因缺失株生长则差异不显著。在渗透压(NaCl)、杀菌剂(多菌灵)以及热胁迫(33℃)条件下,各敲除株的菌落生长表型均未受到显著影响。另一方面,CAT基因敲除后可显著影响分生孢子对H202、UV-B和高温的耐受力,但影响程度不同。ΔBbcatA、 ΔBbcatP和ΔBbcatC分生孢子对H202的耐受力分别较野生株下降42.6%、57.0%和34.5%,而ΔBbcatB和ΔBbcatD的分生孢子对此氧化胁迫的耐受力未受显著影响。各敲除株的孢子对UV-B辐射的耐受力也表现不同程度的下降,以ΔBbcatB和ΔBbcatD最为显著,较野生株分别下降52.4%和47.6%。耐热力测定显示,ΔBbcatA分生孢子在45℃热胁迫下的半致死时间LT50较野生株下降40%,但其余敲除株都与野生株的LT5o均为52.0min。 毒力测定显示,敲除株ΔBbcatA、 ABbcatP知ΔBbcatD对斜纹夜蛾二龄幼虫的毒力显著低于野生株,其LT50分别较野生株下降1.4天、1.8天和0.9天,而另两个敲除株与野生株无异,其LT5o为5.0~5.1天之间。由此可见,CAT是球孢白僵菌克服昆虫寄主ROS相关的抗氧化酶系,因而是影响菌株重要抗逆性状和毒力的重要因子。 球孢白僵菌内源强启动子Phydl的克隆与优化为了寻找一种可在球孢白僵菌中高表达外源有益基因的内源强启动子,从Bb2860基因组中克隆到I型疏水蛋白基因(hydl)的上游序列,并分别截成-1798(全长、-1290、-1179、-991和-791bp)不同长度的片段或对-1290片段特定转录因子(StuA、 NIT2和Mat-Mc)结合位点施以定点突变后,与绿色荧光蛋白报告基因eGFP融合起来,在球孢白僵菌Bb2860中转化表达,考察各转化子中eGFP蛋白相对于外源通用启动子PgpdA调控的表达水平。结果显示,携带3个必要转录因子的-1290bp为最优的启动子片段(Phydl-t1),由其驱动eGFP表达的转化子菌落的相对荧光强度(RFI)是PgpdA驱动的15.6倍,且eGFP蛋白主要积累于分生孢子形成阶段,尤以成熟的分生孢子中表达量最高。其他截头片段或定点突变的启动子片段启动基因表达的效率均不如Phydl-t1,-791bp片段几乎完全失去启动外源基因表达的能力。在定点突变的片段中,以StuA结合位点的突变影响eGFP基因表达最甚。 高表达中肠特异性杀虫蛋白Vip3Aa1的球孢白僵菌工程株的构建及毒力分析将外源Bt营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa1置于优化的内源启动子Phydl-t1下导入野生株Bb2860中,筛选鉴定出一株生长和产孢性状良好且遗传稳定的工程株BbHV8。实时定量PCR和ELISA分析显示,与BbV28菌株(本实验室先前构建由PgpdA启动Vip3Aa1表达的工程菌株)相比,BbHV8培养4天的菌落(菌丝)中Vip3Aa1基因的转录水平上升112倍,在菌丝和培养7天形成的分生孢子中Vip3Aa1蛋白的表达量分别提高7.8和9.8倍。Western杂交和免疫胶体金定位分析表明,Vip3Aa1蛋白在BbHV8分生孢子中高表达且均与分布于细胞质中。孢子被四龄斜纹夜蛾幼虫摄食24h后,能在中肠液中通过Western杂交检测到一条62kDa的活性条带。生测实验表明,BbHV8菌株对斜纹夜蛾二至五龄幼虫均表现出明显的Vip3Aal特有的口服感染毒力,致死虫尸严重萎缩,保湿培养后长出的菌丝稀薄甚至不长。时间-剂量-死亡率(TCM)观察显示,BbHV8的杀虫速度明显快于BbV28和Bb2860,高浓度处理下,BbHV8在处理后第三天能分别杀死100%和53%的二、三龄幼虫,而BbV28和Bb2860在第8天才杀三龄幼虫62%和45%。 TCM模拟分析显示,Bb2860、BbV28和BbHV8对斜纹夜蛾二龄幼虫的LC5o随接种天数差异显著。BbHV8对斜纹夜蛾二龄幼虫的LC5o及其95%置信限由第2天的1293(889~1880)孢子/mm2下将至第5天的26(16~44)孢子/mm2。Bb2860和BbV28对三龄幼虫LC5o的差异不显著,但均显著高于BbHV8的LC5o。基于各菌株的LC5o值,BbHV8处理后3-8天期间对二、三龄幼虫的毒力分别为BbV28的8-80倍和Bb2860的18~931倍,毒力差异倍数随处理后时间延长而缩小。在可比较的处理剂量下,BbHV8对二、三龄幼虫的LTso比BbV28和Bb2860分别缩短1.5~3.8天和2.9~4.6天,即在给定剂量下,BbHV8的杀虫速度比BbV28快63~100%,比Bb2860怏1.1~1.6倍。此外,BbHV8在处理后3-8天杀死90%二至五龄幼虫的孢子剂量为678~1389个孢子/mm2,BbV28和Bb2860对三龄幼虫无可计算的LC5o。以上结果表明,Phydl-t1能强启动外源毒素基因的表达并大量积累毒蛋白于球孢白僵菌分生孢子中,从而大幅提高其对高龄暴食性害虫的毒力。 综上所述,本研究主要成果和创新点在于,一是成功克隆了球孢白僵菌中与甘露醇代谢相关的BbMPD和BbMTD基因,通过基因敲除和表型分析首次揭示了它们在调控该菌生长发育、抗逆及毒力性状中的重要作用。二是首次系统研究了该菌CAT基因种类、结构和功能,阐明了各CAT影响该菌抗逆性状和毒力的程度。三是发现了能驱动外源基因在球孢白僵菌分生孢形成阶段特异性超表达的疏水蛋白启动子Phyd1-t1,并利用其构建了超高表达Vip3Aa1肠毒蛋白的工程菌株,大幅提高了对斜纹夜蛾各龄幼虫的口服毒力,因而是对付暴食性叶面害虫的新武器。这些结果深化了对丝孢类生防真菌抗逆分子机理的认识,形成了真菌杀虫剂遗传改良的关键技术和成果。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S482.292

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【参考文献】
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1 李农昌,王成树,唐燕平,李增智,汤坚,黄长春,丁珊;白僵菌油剂剂型的研究[J];安徽农业大学学报;1996年03期
2 王成树;真菌杀虫剂剂型的研究现状(综述)[J];安徽农业大学学报;1996年03期
3 卢永洁;环境因子对白僵菌除治松毛虫效果的影响[J];河北林业科技;2005年05期
4 邝灼彬,吕利华,冯夏,陈焕瑜,武亚敬,何余容;温度及常见农药对球孢白僵菌生物学特性的影响[J];华南农业大学学报;2005年03期
5 张永军,裴炎,方卫国,杨星勇,王中康;耐低水活度高毒力虫生真菌菌株选育[J];菌物系统;2001年01期
6 应盛华,冯明光;真空干燥球孢白僵菌纯孢粉的活孢率、毒力与贮存期[J];微生物学通报;2002年05期
7 张爱文;邓春生;农向群;;虫生真菌育种方法的进展[J];微生物学杂志;1991年02期
8 方卫国,张永军,杨星勇,王中康,裴炎;球孢白僵菌降解昆虫体壁蛋白酶基因CDEP-1的克隆与序列分析[J];遗传学报;2002年03期
9 许寿涛,冯明光,应盛华;球孢白僵菌对桃蚜接种后特定时间内的侵染率[J];应用生态学报;2002年06期
10 叶素丹,冯明光;生防真菌耐旱特性的生理生化基础及其利用[J];应用生态学报;2004年12期
【共引文献】
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1 徐文;海春旭;杨晨;刘瑞;;过氧基异丙苯对雄性小鼠的自由基毒性与遗传毒性的研究[J];癌变.畸变.突变;2006年02期
2 齐新安;朱祖林;;安徽电大远程开放教育专业招生规模与发展态势的灰关联分析[J];安徽广播电视大学学报;2007年03期
3 魏鑫;王玉霞;王淑敏;董文轩;;平欧杂种榛过氧化物同工酶研究[J];山东农业科学;2008年01期
4 卢合全;李振怀;董合忠;李维江;唐薇;张冬梅;罗振;;杂交棉种植密度与留叶枝对产量及其构成因素的互作效应研究[J];山东农业科学;2009年11期
5 于海涛;闫美;徐磊;李安飞;;小麦新品系配合力和遗传力分析[J];山东农业科学;2009年12期
6 刘俊恒;何代元;张学舜;;14个玉米自交系的一般配合力分析[J];山东农业科学;2009年12期
7 罗振;李维江;董合忠;唐薇;张冬梅;卢合全;李振怀;;密度与整枝对抗虫杂交棉产量分布的影响[J];山东农业科学;2009年12期
8 孙嵬;崔娟;臧冬初;史树森;;温度和土壤含水量对东亚飞蝗卵孵化的影响[J];山东农业科学;2010年03期
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1 林华峰;李茂业;谢鹏;;菜青虫一种致病真菌的生物学及毒力研究[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 张祥明;;美盛肥料对油菜经济性状和产量的影响[A];土肥水资源高效利用与农业面源污染防控技术研讨会论文集[C];2011年
3 陈文华;黄国栋;赵凤达;;姜黄水醇提取液对冰乙酸损伤性溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜保护作用及机制研究[A];江西省中西医结合学会第九次活血化瘀学术研讨会活血化瘀临床应用新进展培训班论文集[C];2011年
4 赵晖;温学飞;赫晓辉;王政峰;安钰;;宁夏引黄灌区农村信息化对农业总产值的影响[A];2011全国灌区信息化建设与防渗抗冻胀新技术应用专刊[C];2011年
5 赵晖;温学飞;赫晓辉;王政峰;安钰;;基于因子分析法分析宁夏农村信息化的发展[A];2011全国灌区信息化建设与防渗抗冻胀新技术应用专刊[C];2011年
6 张玉;宋翠艳;刘海涛;孙伟男;;达里诺尔湖和岗更湖瓦氏雅罗抗氧化酶的研究[A];第三届全国现代生态渔业管理与技术研究[C];2011年
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6 黎继烈;金橘活性物质提取及生物活性研究[D];中南林业科技大学;2007年
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8 江琼;细胞周期调控蛋白cyclin D1基因靶向microRNAs的预测、系统验证及西洋参提取物处理人乳腺癌细胞的表达谱分析[D];浙江大学;2010年
9 谢雪钦;球孢白僵菌超氧化物岐化酶(SODs)的基因克隆、鉴定及功能分析[D];浙江大学;2010年
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1 尹守铮;外源抗氧化剂对肉鸡机体氧化还原状态和生产性能的影响[D];华中农业大学;2010年
2 曹杰;日粮中添加二氢吡啶对奶牛生产性能、抗氧化和抗热应激能力的影响[D];华中农业大学;2010年
3 卢增斌;防治水稻螟虫单项技术措施的评价及储备技术—转基因水稻对非靶标生物影响的研究[D];华中农业大学;2010年
4 申君;桃蚜的抗药性监测、杀虫剂的配方筛选及其增效生化机理的研究[D];华中农业大学;2010年
5 李贝;切花月季品种综合评价筛选及其配套栽培技术研究[D];华中农业大学;2010年
6 宋家勇;安林煤矿炮放面矿压显现规律及顶煤冒放性预测研究[D];河南理工大学;2010年
7 胡娟;几种生物农药对稻纵卷叶螟和稻飞虱的防治作用研究[D];安徽农业大学;2010年
8 刘苏;褐飞虱高毒力真菌筛选及固相发酵培养基组分优化[D];安徽农业大学;2010年
9 俞云峰;不同惰性载体上发酵产蜡蚧轮枝菌分生孢子生物特性的研究[D];浙江理工大学;2010年
10 江涛;黄淮麦区85个小麦品种(系)遗传多样性的SRAP标记分析和农艺性状的变异特征[D];山东农业大学;2009年
【二级参考文献】
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1 李增智;虫生真菌在害虫治理中应用现状[J];安徽农学院学报;1987年02期
2 孙继美,汤坚,丁贵银;球孢白僵菌不同菌株生物学特性的研究[J];安徽农业大学学报;1996年03期
3 黄芙蓉;白僵菌与病毒、苏云金杆菌、溴氰菊酯混合防治木毒蛾的研究[J];福建林业科技;2000年03期
4 朱衡,瞿峰,朱立煌;利用氯化苄提取适于分子生物学分析的真菌 DNA[J];真菌学报;1994年01期
5 许谦,冯明光,徐均焕,刘志强;安徽虫瘟霉菌株的强毒杀蚜效应与侵染速率[J];菌物系统;2000年02期
6 刘树生;温度对桃蚜和萝卜蚜种群增长的影响[J];昆虫学报;1991年02期
7 刘树生;昆虫生命表制作与分析中的几个问题[J];昆虫知识;1986年01期
8 刘树生;介绍一种饲养蚜虫的方法——新的叶子圆片法[J];昆虫知识;1987年02期
9 冯明光;时间—剂量—死亡率模型取代机率分析技术[J];昆虫知识;1998年04期
10 何余容,吕利华,邝灼彬,刘学明,曾惠明;球孢白僵菌不同分离株的生物学及对小猿叶甲成虫致病性测定[J];昆虫知识;2004年05期
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1 陈红梅;谢翎;吴甘霖;魏和平;黄勃;;球孢白僵菌Pr1蛋白酶基因cDNA克隆与序列分析[J];生物学杂志;2010年06期
2 赵锦年,陈爱芬;被害树干植入具球孢白僵菌的麦麸颗粒饲料防治松墨天牛[J];河北林业科技;1994年04期
3 翟锦彬,黄秀梨;球孢白僵菌对棉铃虫细胞防御反应的影响[J];北京师范大学学报(自然科学版);1996年04期
4 张丽坤,李国勋,文景芝,姜英;球孢白僵菌对东北大黑鳃金龟(Coleoptera: Melolonthidae)的侵染效果[J];东北农业大学学报;1997年03期
5 刘霆;段玉玺;陈立杰;马希斌;;球孢白僵菌代谢产物对植物幼苗的影响研究[J];种子;2006年09期
6 Sibani Sankar GHATAK;Md. Wasim REZA;;球孢白僵菌对油桐尺蛾的生物效力(英文)[J];昆虫学报;2007年09期
7 袁盛勇;孔琼;王丽波;李正跃;陈斌;肖春;;球孢白僵菌MZ041016菌株对小菜蛾的室内毒力测定[J];江苏农业科学;2007年06期
8 余素红;曾明森;吴光远;;球孢白僵菌的研究应用与展望[J];茶叶科学技术;2009年03期
9 袁盛勇;张宏瑞;孔琼;李正跃;骆弟乾;王学丽;董丽玲;;球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马的致病性研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2010年03期
10 刘洪剑;石建伟;束庆龙;孟志芬;董广平;方建民;;球孢白僵菌对松墨天牛成虫生活习性的影响[J];安徽农业大学学报;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘倩;应盛华;冯明光;;杀虫真菌球孢白僵菌热激响应过程中胞内海藻糖的潜在生理功能[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
2 汤坚;丁珊;孙继美;丁贵银;李纯;;47株球孢白僵菌酯酶同工酶的初步研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
3 丁珊;汤坚;丁贵银;孙继美;于宙;吴克;;球孢白僵菌血清学的初步研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
4 王龙江;何余容;吕利华;;球孢白僵菌对红火蚁入侵机制的初步研究[A];第二届全国生物入侵学术研讨会论文摘要集[C];2008年
5 孙继美;汤坚;丁贵银;;球孢白僵菌多菌株间培养性状比较[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
6 程素琴;周法永;;寄生于双钩跳甲的球孢白僵菌[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
7 孙明;关贵全;任巧云;罗建勋;;球孢白僵菌与溴氰菊酯的协同效应及对小亚璃眼蜱的毒力测定[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
8 洪家保;徐庆丰;;球孢白僵菌在液体培养中的发育研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
9 冯明光;;病原真菌对咀嚼式口器昆虫的摄人感染:球孢白僵菌对迁徙蚱蜢的生测实验[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
10 殷凤呜;陈权才;何雪香;吕尊德;李祖文;;七株球孢白僵菌酯酶同工酶及其对马尾松毛虫的毒力测定[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 王菲;球孢白僵菌“降伏”马铃薯甲虫[N];新疆科技报(汉);2010年
2 ;耐热植酸酶基因工程菌株构建及第二代高效、高产植酸酶[N];云南科技报;2003年
3 周航;生物材料的保藏要求及其是否造成说明书公开不充分[N];中国知识产权报;2011年
4 通讯员 万姗姗 记者 王春;我科学家一新发现有望使人忘记痛苦[N];科技日报;2008年
5 记者 胡左;内蒙古破解防治沙棘木蠹娥难题[N];科技日报;2007年
6 云南省农科院茶叶科学研究所 朱兴正;有机茶园病虫害防治措施[N];云南科技报;2007年
7 记者 陈卫东;我破解基因工程产业化难题[N];科技日报;2007年
8 本报记者 吴晓鹏实习记者 钟啸;小鼠搭桥[N];21世纪经济报道;2007年
9 曹建明;促红细胞生成素(EPO)[N];中国经营报;2000年
10 隆华;科研科普双丰收[N];上海科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王正亮;球孢白僵菌两种甘露醇脱氢酶及五种过氧化氢酶的功能分析与对鳞翅目幼虫高口服毒力的工程菌株构建[D];浙江大学;2011年
2 秦毅;表达苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aal的球孢白僵菌工程菌株的构建及其对斜纹夜蛾幼虫的肠道与体壁侵染力[D];浙江大学;2010年
3 张石柱;球孢白僵菌中疏水蛋白基因功能的研究[D];重庆大学;2010年
4 谢雪钦;球孢白僵菌超氧化物岐化酶(SODs)的基因克隆、鉴定及功能分析[D];浙江大学;2010年
5 谢翎;球孢白僵菌抗逆相关功能基因克隆与基因工程菌株构建研究[D];安徽农业大学;2009年
6 池小琴;酿酒酵母海藻糖代谢工程与抗逆性相关机制研究[D];浙江大学;2010年
7 宋婷婷;害虫生防真菌多药抗性与侵染褐飞虱的高毒力菌株筛选策略研究[D];浙江大学;2011年
8 方卫国;昆虫病原真菌降解寄主体壁酶基因的克隆及球孢白僵菌高毒力重组菌株的获得[D];西南农业大学;2003年
9 江琼;细胞周期调控蛋白cyclin D1基因靶向microRNAs的预测、系统验证及西洋参提取物处理人乳腺癌细胞的表达谱分析[D];浙江大学;2010年
10 康振;大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D];山东大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙召朋;继代培养对球孢白僵菌毒力及毒力相关酶表达的影响[D];吉林大学;2011年
2 武增强;钙调磷酸酶催化亚基BbCNA影响球孢白僵菌产孢、毒力和毒力相关生物学性状[D];西南大学;2010年
3 孙明;蜱病原真菌的分离、鉴定及其生物学特性研究[D];甘肃农业大学;2011年
4 吕丁丁;球孢白僵菌基因工程菌株构建及杀虫效率评价[D];安徽农业大学;2008年
5 冷波;一种新的球孢白僵菌内切几丁质酶的纯化和抗血清的制备[D];西南农业大学;2003年
6 张晓敏;不同环境条件对球孢白僵菌菌株SJ-05的影响[D];内蒙古农业大学;2010年
7 李静馨;球孢白僵菌α-葡萄糖苷转运蛋白(BbATG1)的功能分析与热激响应基因的分离鉴定[D];浙江大学;2011年
8 李银平;防治蓟马的白僵菌剂型及应用技术研究[D];中国农业科学院;2012年
9 张发成;球孢白僵菌对桃蚜种群数量增长的影响[D];浙江大学;2002年
10 贾凌;家蚕中球孢白僵菌结合蛋白CI8A的鉴定[D];西南大学;2011年
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